药典中纯化水微生物限度检查

A. 2015版药典和2010版药典对微生物限度检查的区别

2015版药典对培养基系统、实验方法、实验环境规定等方面做出了重大修订，方法内应用范围增加了生物方法容；
还有一些细节的变化，例如阳性对照试验，10版药典采用金黄色葡萄杆菌，而2015版采用不同菌种；
总之2015版药典是采用了先整合后优化、求大同存小异等整合原则。
我了解有限，以上仅供参考。

B. 2015版微生物限度检查计数是指两种培养基菌落数之和吗

2015版药典微生物学拟收载情况
检查法
①无菌检查法
②非无菌药品微生物计数法
③非无菌药品控制菌检查法
④抑菌剂效力检查法
⑤灭菌法
⑥生物指示剂抗性检查法
⑦中药饮片的微生物限度检查法

标准
非无菌药品微生物限度标准
指导原则
非无菌药品微生物限度检查指导原则
制剂通则中
制剂通则中有关制剂项下的无菌和微生物限度检查要求的修订

制剂通则中有关制剂项下的[无菌]和[微生物限度]检查要求的修订

(1)为保证用药安全，眼用液体、半固体制剂仍应符合无菌检查法的规定
(2)为保证用药安全，对用于手术、创伤、烧伤的外用制剂如鼻用制剂、软膏剂、乳膏剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶剂、散剂、涂剂、滴耳剂等仍应符合无菌检查的规定。但在其通则无菌检查项下增加：“除另有规定外”。给予有不按无菌检查的原因
(3)在搽剂和酊剂通则项下的微生物限度检查项下增加：“除另有规定外” 。给予有可能需要按无菌检查的原因

品种正文中的无菌或微生物限度检查及其标准要求

1、受热不稳定、制剂不能进行最终灭菌的无菌工艺产品如：抗生素原料药、抗生素粉针剂正文中无菌检查的规定
2、经验证后各论化品种检查项下的：无菌…..或微生物限度……(有具体检查的规定)
3、药用敷料的无菌或微生物限度要求及标准
4、纯化水、注射用水的微生物限度要求及标准
2015年版药典的纯化水、注射用水[微生物限度]价差方法在参考欧、美药典只要用水微生物检查要求的基础上，由浙江所立课题考察、比对，在所用培养基和方法上将有较大的修订与USP35版、EP7.0版、JP16版比较，2015年版中国药典微生物学检验体系规划收载的项目和内容已基本趋向一致，将使我国药典的微生物学检验成为一个比较完备的标准体系，其意义在于：
1）全面与国际药典标准接轨；
2）从对终产品的检验向过程控制转变。

2015年版微生物学检验中的重大修订及意义

1、实验环境的重大修订
①无菌检查环境洁净度规定
②微生物限度检查环境洁净度规定

2、培养系统的重大修订
①无菌检查中培养基的修订
②微生物计数法中培养基的修订
③控制菌检查法中培养基的修订
④控制菌检查法中培养基的修订
⑤抑菌效力测定法中培养基的修订

3、对一、二、三部微生物学附录的整合、修订
与USP35版、EP7.0版、JP16版比较，2015年版中国药典微生物学检验体系规划收载的项目和内容已基本趋向一致，将使我国药典的微生物学检验成为一个比较完备的标准体系，其意义在于：

1）全面与国际药典标准接轨；

2）从对终产品的检验向过程控制转变。

实验环境的重大修订

GMP2010年版对洁净度的规定及确认标准
洁净度级别
悬浮粒子最大允许数/立方米
浮游菌
cfu/m3
沉降菌（f）
cfu /4小时(2)
表面微生物
静态
动态
接触（f）
cfu /碟
5指手套
cfu /手套
≥0.5μm
≥5.0μm(2)
≥0.5μm
≥5.0μm
A级
3520
20
3520
20
1
1
1
1
B级
3520
29
352000
2900
10
5
5
5
C级
352000
2900
3520000
29000
100
50
25
－
D级
3520000
29000
不作规定
不作规定
200
100
50
－

按实验性质修订微生物学检验环境洁净度

2010年版 2015年版
无菌检查： 无菌检查：
应在洁净度10000级背景下的局部100级单向流空气区域内或隔离系统中进行。
应在洁净度B级背景下的局部A级单向流空气区域内或隔离系统中进行。
微生物限度检查： 微生物限度检查：
应在洁净度10000级背景下的局部100级单向流空气区域内进行。 应在受控洁净环境下（不低于D级）的局部不低于B级单向流空气区域内进行。

培养基系统的重大修订
修订依据：
通过科研课题的建立及大量实验，以国际品牌培养基为对照，考察了中国药典微生物限度检查法、无菌检查法中所用国产培养基与USP/BP/JP中所规定的培养基的粗军生长能力比较，得出大量的实验数据，并经过可靠的统计分析名为整体微生物检验培养基的修订提供了有利的技术支持。

修订意义：
(1)纠正了我国在微生物检验系统中长期存在的对微生物分了培养的概念，提高污染微生物的检查可能。
（2）与先进国家药典所用培养基一致，为实现结果夫人打下重要基础。

对一、二、三部微生物学附录的整合、修订
需进行整合、修订的微生物学检验记录：

①无菌检查法
②微生物检查法
③指导原则
微生物限度检查法应用指导原则
药品微生物实验室规范指导原则

中国药典2015年版微生物限度检查法增、修订

C. 问问大家,美国药典中关于纯化水和注射用水质量标准中是否有有关微生物限度检测

现把国内、欧盟、FDA或日本药典的情况说下：
1、无菌检查GMP、欧盟没有要求，FDA要求只有灭菌回纯化水才需要无菌检查答，贮罐
中的水只有微生物限度检查
2、总有机碳 （TOC） 国内目前检查限度还是和易氧化物选一项TOC和其他都一样≤0.5mg/L (≤500 ppb 碳 )
3、细菌内毒菌 只有欧盟要求/ ≤0.25EU/ml（生产渗析液时）
4、微生物纠偏限度都是一样 ≤100CFU/ml
希望能给你帮助！

D. 中国药典微生物限度检查法的概述

《中国药典来》2010版一部、二部、三部源附录的微生物限度检查法内容无差别，故此文方法，以《中国药典》2010版二部附录ⅪJ为例。
微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。
除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30℃～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23℃～28℃。
检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10c㎡ 为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。
注：《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准分为GB/T16292-2010 医药工业洁净室(区)悬浮粒子的测试方法GB/T16293-2010 医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法GB/T16294-2010 医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法

E. 中国药典微生物限度检查法的微生物限度标准

非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径及对患者健康潜在的危害而制订的。药品的生产、贮存、销售过程中的检验，原料及辅料的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。 细菌数每1g不得过l000cfu。每lml不得过100cfu。
霉菌和酵母菌数每lg或lml不得过100cfu。
大肠埃希菌每1g或lml不得检出. 3.1用于手术、烧伤及严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定。
3.2耳、鼻及呼吸道吸入给药制剂
细菌数每1g、lml或l0cm²，不得过100cfu。
霉菌和酵母菌数每1g、lml或l0cm²，不得过10cfu。
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌每1g、lml或l0cm²不得检出。
大肠埃希菌鼻及呼吸道给药的制剂，每1g、lml或l0cm²，不得检出。
3.3阴道、尿道给药制剂
细菌数每1g、lml或l0cm²，不得过100cfu。
霉菌数和酵母菌数每1g、lml或l0cm²应小于10cfu。
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌每1g、lml或l0cm²，不得检出。
3 .4直肠给药制剂
细菌数每1g不得过l000cfu。每lml不得过100cfu。
霉菌和酵母菌数每1g或lml不得过100cfu。
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌每lg或lml不得检出。
3.5其他局部给药制剂
细菌数每1g、lml或l0cm²不得过100cfu。
霉菌和酵母菌数每1g、lml或l0cm²不得过100cfu。
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌每1g、lml或l0cm²不得检出。 参照相应制剂的微生物限度标准执行。
注1：本检查法中白色念珠菌检查所描述该菌在念珠菌显色培养基上的菌落特征，是指该菌在法国科玛嘉公司提供的科玛嘉念珠菌显色培养基上生长的菌落特征。给出这一信息是为了方便本方法的使用者，并不表示对该公司产品的认可．若其他等效产品具有相同的效果，那么也可使用其他等效的产品。
以上文中方法中提到的“无菌检查法（附录XII A）”为《中国药典》2010版二部附录XII A无菌检查法。

F. 2015中国药典对无菌检查与微生物限度检查的环境分别有什么要求

两个都是在背景10000级洁净度下，局部100级的单层空气气流下进行的

G. 按药典做纯化水微生物限度检查，使用抽滤法的话，微孔滤膜要选择水系膜还是有机膜为什么

水系 因为你的溶液是水

H. 微生物限度检查在中国药典2015版附录多少

《中国药典》2015年版微生物限度检查法修订后将分为三个附录：

1、非无菌药品微生物限度检查：微生物计数法

2、非无菌药品微生物限度检查：控制菌检查法

3、非无菌药品微生物限度标准。

修订后的微生物限度检查法暂不收载于《中国药典》2010年版第二增补本而将直接收载《中国药典》2015年版，在正式实施前的公示期内将进一步完善以保证方法的适应性和可操作性。

非无菌药品微生物限度标准的整合、修订

1、药典委员会微生物专业委员会的修订思路

2、修订后限度标准的总体结构

3、修订后限度标准各项具体规定

药典委员会微生物专业委员会的修订思路

修订思路

(1) 2010版中国药典一、二、三部微生物限度本中项目的对比、整合

整合：采用一部的项目作为合并后限度标准的基础

(2)与美、欧、日药典比较，修订中国药典的微生物限度标准

1、参照欧、美、日药典一致的表示形式，采用较清晰直观的表格形式列出各类药品和原敷料的微生物限度标准

2、菌数计数结果以10n表示；

3、以“需氧菌总数”取代“细菌数”，以“耐胆盐革兰阴性菌”取代“大肠菌群”

2、修订后限度标准的总体结构（共9项、4个表）

1、制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂和原辅料应符合无菌检查法的规定

2、用于手术、烧伤或严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法的规定

3、非无菌化学药品及生物制品制剂的微生物限度标准

4、非无菌不含药材原粉的中药制剂微生物限度标准

5、非无菌含药材原粉的中药制剂微生物限度标准

6、非无菌的药用原料及辅料微生物限度标准

7、中药提取物及中药饮片的微生物限度标准

8、有兼用途径的制剂应符合各给药途径的标准

9、霉变、长螨者以不合格论

2015版微生物限度标准的特点及展望

特点：

1、很好地分析、汇总了现一、二、三部的限度标准的项目

能考虑和前向性地制订符合我国传统中药特点的微生物限度标准

2、化学药、生物制品的限度标准（菌数及控制菌）已与美、欧、日药典的限度标准一致或更严格

3、新设立的中药提取物和中药饮片的微生物限度标准（仅规定了控制菌），菌数计数限度等待调研数据

展望：

1、结合GMP管理的步伐，进一步合理制定含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准

2、在开展课题积累数据、区分用法的基数上完善中药提取物、中药饮片、草药的微生物限度标准

I. 中国药典微生物限度检查法的稀释液和培养基制备方法

稀释液配制后，应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
1 .pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
照无菌检查法（附录XII A）制备。
2.pH6.8无菌磷酸盐缓冲液、pH7.6无菌磷酸盐缓冲液
按缓冲液（二部附录XV D）配制后，过滤，分装，灭菌。
如需要，可在上述稀释液灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。
3.0.9%无菌氯化钠溶液
取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，过滤，分装，灭菌。 培养基可按以下处方制备，也可使用按该处方生产的符合要求的脱水培养基。配制后，应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
1.营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基及改良马丁琼脂培养基
照无菌检查法（附录XII A）制备。
2.玫瑰红钠琼脂培养基
胨 5.0g
玫瑰红钠 0.0133g
葡萄糖 10.0g
琼脂 14.0g
磷酸二氢钾 1.0g
水 1000ml
硫酸镁 0.5g
除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠，分装．灭菌。
3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD )
胨 10.0g
琼脂 14.0g
酵母浸出粉 5.0g
水 1000ml
葡萄糖 20.0g
除葡萄糖外，取上述成分．混合，微温溶解，滤过，加人葡萄糖，分装．灭菌。
4．胆盐乳糖培养基(BL )胨20.0g
磷酸二氢钾 1.3g
乳糖 5.0g
牛胆盐 2.0g
氯化钠 5.0g
（或去氧胆酸钠） ( 0.5g)
磷酸氢二钾 4.0g
水 1000ml
除乳糖、牛胆盐或去氧胆酸钠外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.4 ±0.2，煮沸，滤清，加人乳糖、牛胆盐或去氧胆酸钠，分装，灭菌。
5.乳糖胆盐发酵培养基
胨 20.0g
0.04%溴甲酚紫指示液 25ml
乳糖 10.0g
水 l000ml
牛胆盐 5.0g
除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.4 ±0.2，加人0.04%溴甲酚紫指示液，根据要求的用量分装于含倒管的试管中。灭菌。所用倒管的规格应保证产气结果的观察。
6．曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB )
营养琼脂培养基 100ml
曙红钠指示液 2ml
20%乳糖溶液 5ml
亚甲蓝指示液 1.3～1.6ml
取营养琼脂培养基，加热溶化后，冷至60℃，按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液，摇匀，倾注平皿。
7.麦康凯琼脂培养基（MacC）胨20.0g
1%中性红指示液 3ml
乳糖 10.0g
琼脂 14.0g
牛胆盐 5.0g
水 l000ml
氯化钠 5.0g
除乳糖、1%中性红指示液、牛胆盐及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2 ±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，冷至约60℃，倾注平皿。
8.4 -甲基伞形酮葡糖昔酸（4-methylumbelliferyl-β-D-glucuionide，MUG）培养基
胨 10.0g
磷酸二氢钾（无水） 0.9g
硫酸锰 0.5mg
磷酸氢二钠（无水） 6.2g
硫酸锌 0.5mg
亚硫酸钠 40mg
硫酸镁 0.1g
去氧胆酸钠 1.0g
氯化钠 5.0g
MUG 75mg
氯化钙 50mg
水 l000ml
除MUG外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加人MUG，溶解，每管分装5ml，灭菌。
9.三糖铁琼脂培养基（TSI )
胨 20.0g
牛肉浸出粉 5.0g
乳糖 10.0g
蔗糖 10.0g
葡萄糖 1.0g
氯化钠 5.0g
硫酸亚铁 0.2g
硫代硫酸钠 0.2g
0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
琼脂 12.0g
水 1000ml
除三种糖、0.2%酚磺酞指示液、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，制成高底层（2～75px）短斜面。
10．四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）
胨 5.0g
硫代硫酸钠 30.0g
牛胆盐 1.0g
水 l000ml
碳酸钙 10.0g
取上述成分，混合，微温溶解，灭菌。
临用前，取上述培养基，每10ml加入碘试液0.2ml和亮绿试液0.lml，混匀。
11.沙门、志贺菌属琼脂培养基（SS）
胨 5.0g
硫代硫酸钠 8.5g
牛肉浸出粉 5.0g
中性红指示液 2.5ml
乳糖 10.0g
亮绿试液 0.33ml
牛胆盐 8.5g
琼脂 16.0g
枸橼酸钠 8.5g
水 1000ml
枸橼酸铁铵 1.0g
除乳糖、中性红指示液、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,滤过，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，灭菌，冷至60℃，倾注平皿。
12．胆盐硫乳琼脂培养基（DHL )
胨 20.0g
枸橼酸钠 1.0g
牛肉浸出粉 3.0g
枸橼酸铁铵 1.0g
乳糖 10.0g
中性红指示液 3ml
蔗糖 10.0g
琼脂 16.0g
去氧胆酸钠 1.0g
水 l000ml
硫代硫酸钠 2.3g
除糖、指示液及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,加入琼脂，加热溶化后，再加人其余成分，摇匀，冷至60 ℃，倾注平皿。
13.溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基
胨 10.0g
溴化十六烷基三甲铵 0.3g
牛肉浸出粉 3.0g
琼脂 14.0g
氯化钠 5.0g
水 l000ml
除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.5±0.1，加入琼脂，加热溶化后，分装，灭菌，冷至60 ℃，倾注平皿。
14．亚碲酸盐肉汤培养基
临用前，取灭菌的营养肉汤培养基，每100ml中加人新配制的1%亚谛酸钠（钾）试液0.2ml，混匀，即得。
15．卵黄氯化钠琼脂培养基
胨 6.0g
10%氯化钠卵黄液 100ml
牛肉浸出粉 1.8g
琼脂 14.0g
氯化钠 30.0g
水 650ml
除10 %氯化钠卵黄液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.6土0 .1，灭菌，待冷至约60 ℃，以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液，充分振摇，倾注平皿。
10%氯化钠卵黄液的制备取新鲜鸡蛋1个，以无菌操作取出卵黄，放入10%无菌氯化钠溶液100ml中，充分振摇，即得。
16.甘露醇氯化钠琼脂培养基
胨 10.0g
酚磺酞指示液 2.5ml
牛肉浸出粉 1.0g
琼脂 14.0g
甘露醇 10.0g
水 l000ml
氯化钠 75.0g
除甘露醇、酚磺酞指示液及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节州值使灭菌后为7.4 ±0.2，加入琼脂，加热溶化后，滤过，分装，灭菌，冷至60 ℃，倾注平皿。
17．乳糖发酵培养基
胨 20.0g
乳糖 10.0g
0.04%溴甲酚紫指示液 25ml
水 l000ml
除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，加入指示液，分装于含倒管的小试管中，每管3ml．灭菌。
18．绿脓菌素（Pyocyanin）测定用培养基（PDP琼脂培养基）
胨 20.0g
甘油 l0ml
氯化镁（无水） 1.4g
琼脂 14.0g
硫酸钾（无水） 10.0g
水 1000ml
取胨、氯化镁、硫酸钾和水混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入甘油及琼脂，加热溶化，混匀，分装于试管，灭菌，置成斜面。
19.梭菌增菌培养基
牛肉浸出粉 10.0g
盐酸半胱氨酸 0.5g
胨 10.0g
氯化钠 5.0g
酵母浸出粉 3.0g
醋酸钠 3.0g
可溶性淀粉 1.0g
琼脂 0.5g
葡萄糖 5.0g
水 1000ml
取上述成分，混合，加热煮沸使溶解，调节pH值使灭菌后为6.8士0.2，加热溶化，滤过，分装，灭菌。
20.哥伦比亚琼脂培养基
酪蛋白胰酶消化物 10.0g
肉胃酶消化物 5.0g
心胰酶消化物 3.0g
酵母浸出粉 5.0g
玉米淀粉 1.0g
氯化钠 5.0g
琼脂 15.0g
水 1000ml
除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3士0.2，加入琼脂，加热溶化，滤过，分装，灭菌，冷至45～50 ℃，加人相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素，混匀，倾注平皿。
21．沙氏葡萄糖液体培养基
胨 10g
葡萄糖 40g
水 1000ml
除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过。加人葡萄糖，溶解，分装，灭菌。
22．沙氏葡萄糖琼脂培养基
胨 10g
水 1000ml
葡萄糖 40g
琼脂 14g
除琼脂和葡萄糖外，混合，微温溶解，滤过。加入琼脂和葡萄糖，溶解，分装，灭菌。
23.（科玛嘉）念珠菌显色培养基（注1）
胨 10.2g
琼脂 15g
氢罂素 0.5g
灭菌水 1000ml
色素 22.0g
除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值至6.3士0.2。滤过，加入琼脂，加热煮沸，不断搅拌至琼脂完全溶解，倾注平皿。
24.1%聚山梨酯80-玉米琼脂培养基
黄色玉米粉 40g
琼脂 10～15g
聚山梨酯80 10ml
水 1000ml
取玉米粉、聚山梨酯80及蒸馏水500ml，混合，65℃加热30分钟，混匀，用纱布滤过，补足原水量。取琼脂，水500ml，混合，加热溶解。将以上两种溶液混合，摇匀，分装，灭菌。