㈠ 黑曲霉柠檬酸高产菌的选肓方案怎么设计
使用选择性培养基加指示剂做单菌落培养，用高效液相色谱法检测。
培养基可用马铃薯培养基，加酸碱指示剂（石蕊指示试剂）
得做大量的试验，必要时用紫外线诱变
我原来做相似的试验就是这么做的。
㈡ 黑曲霉生产柠檬酸的过程中出现不同批次其产量和品质差别很大，原因有哪些
黑曲霉具有多种活性较强的酶系，如CX酶、淀粉酶、酸性蛋白酶等，可将原料中的纤维素等大分子化合物降解转化为动物易消化利用的养分，并为白地霉、酵母菌提供必需的糖、氨基酸等。但在试验中发现，黑曲霉培养时间超过60h,就会有孢子产生。为延长黑曲霉作用时间，采用二次发酵工艺，即：第一次固体发酵培养基→接种黑曲霉（30℃静止培养3d）→第一次发酵→加适量麸皮、尿素及等量酱渣→接种白地霉、酵母菌（30℃静止培养）→第二次发酵。时间由实验确定，60℃烘干、备用。 ，两个基本问题之一：保证强酸环境！ 因为黑曲霉在pH为2～3的环境中发酵蔗糖，产物以柠檬酸为主，只产极少量的草酸；当pH接近中性时则大量产生草酸， 而柠檬酸产量很低。 两个基本问题之二：O2 必须保证氧气维持呼吸：标准呼吸链产生ATP积累，侧呼吸链不产生ATP，缺氧导致侧呼吸链失活，使ATP积累，柠檬酸积累减少。 TCA环的调节作用 1.TCA环的起始酶：柠檬酸合成酶是一种调节酶。但在黑曲霉中，柠檬酸合成酶没有调节作用，这是黑曲霉TCA环的第一个特点。 顺乌头酸酶失活，阻断TCA环是柠檬酸积累的必要条件。顺乌头酸酶、异柠檬酸酶在pH2.0时失活，线粒体顺乌头酸酶在催化时有柠檬酸：顺乌头酸：异柠檬酸=90：3：7的平衡，这个平衡可能就是造成柠檬酸的最初积累而使pH值降低。 2.黑曲霉菌体内α-酮戊二酸脱氢酶缺失或活力很低（TCA环被阻断）。 3.氧和pH值对柠檬酸发酵的影响很大。 标准呼吸链产生ATP积累，侧呼吸链不产生ATP，缺氧导致侧呼吸链失活，使ATP积累，柠檬酸积累减少。 归纳： ①Mn2+缺乏→抑制蛋白合成→NH4↑ 解除磷酸果糖激酶的代谢调节，促进EMP途径畅通，有一条呼吸活动强的不产生ATP的侧呼吸链 ②由于丙酮酸羧化酶是组成型酶，不被调节控制。丙酮酸氧化脱羧生成乙酰CoA和CO2的固定两个反应的平衡，以及柠檬酸合成酶不被调节，增强了合成柠檬酸的能力。 ③由于顺乌头酸水合酶在催化时建立了以下平衡： 柠檬酸：顺乌头酸：异柠檬酸=90：3：7 同时控制Fe2+含量时，顺乌头酸酶活力降低，使柠檬酸积累。 ④随着柠檬酸积累，pH降低到一定程度时，使顺乌头酸酶和异柠檬酸脱氢酶失活，更有利于柠檬酸的积累及排出细胞外。 采用细菌发酵比霉菌和酵母菌更加有利， 一是细菌生长繁殖快，容易在发酵初期取得优势，因而抗污染，适合生料发酵； 二是菌体碳氮比例小，其蛋白质构成更适合畜禽的消化吸收，而且不产生黄曲霉毒素。 三是细菌发酵的速度比酵母快得多, 在应用淀粉水解液为原料，应用固定化细菌细胞连续生产酒精时发现细菌发酵的酒精生产能力是酵母发酵的2.65倍.
㈢ 用黑曲霉生产柠檬酸的过程中出现不同的批次其产量和品质差别很大,这是为什么啊急求解决方案!!
1.培养基是否有过改变，如批次，生产厂家，不同规格（生化试剂或分析纯）
2.是否由于操作等问题导致染菌
3.发酵前灭菌条件是否改变
4.温度等条件是否在未注意的情况下有过改变
㈣ 实验室里黑曲霉发酵柠檬酸的注意事项包括后提取工作的注意事项，经历过此实验的大神望详细赐教。
1、合适的碳源（抄淀粉、袭麦芽糖、甘露糖等），高浓度的糖；
2、限制有机氮源、选择适量的无机氮源（铵盐）；
孢子培养基 ：要求能使菌体迅速生长，产生较多优质的孢子，所以营养不要太丰富；
发酵培养基 ：既要使菌体能迅速生长，达到一定的菌丝浓度，又要使长好的菌体能迅速合成所需产物 ；
3、合适的pH值，黑曲霉在pH为2～3的环境中发酵糖，产物以柠檬酸为主；当pH接近中性时则大量产生草酸， 而柠檬酸产量很低；
4、发酵液中溶氧量要高（摇床的转速250r/m）；
5、限制重金属离子，如Mn2＋缺乏促进EMP途径畅通， 控制Fe2＋含量使顺乌头酸酶活力降低，使柠檬酸积累 。
㈤ 请设计从自然界筛选柠檬酸产生菌的具体实验过程
看了一楼的复制粘贴不禁笑了：英文里还来个汉语拼音，Tianjialiangwei 添加量为。
拜托复版制的时候也看看清权楚好不好。
红芋粉醪20%、柠檬酸10%～20%配成培养液，调节pH2.0～2.5，以一定量的培养基和土样均匀混合，用毛细吸管点种在平皿内事先覆盖的无菌滤纸上（2～3层），于30℃培养，这样可以分离到产生柠檬酸的黑曲霉。
㈥ 用黑曲霉发酵生产柠檬酸..
题目比较大，一般一个生产工艺问题，要从人、机、料、法、环这五个方面进行专入手。个人建属议从两个方面开始入手，1.原料方面，主要是糖蜜是否是同一批其中的金属含量是否一致，所有添加的各种助剂，化学试剂是否同一个批次，批次间的差异如何。另外就是生产过程中的PH值是否稳定。
㈦ 黑曲霉柠檬酸产生菌菌株的富集应考虑利用哪些特点来进行富集
柠檬酸生产菌的分离筛选与其他微生物相同，一是收集相当数量的现有菌种，经版分离纯化，从中挑选出合适权的菌株；二是采集大量的含菌样品，分离筛选出优良菌种。若收集现有菌种则可直接活化、分离、纯化，并测定每个菌株的性能，从中选出最优良的菌株；若是通过采集含菌样品来分离选育，可根据糖质发酵柠檬酸高产菌主要是黑曲霉，它们具有强大的分解淀粉、蛋白质、果胶、脂肪等物质的酶系柠檬酸特征，可从腐烂植物、水果表皮，也可从含有腐烂未热水果的酸性土壤中分离。一般将采集的含菌样品经适当的增殖培养，或将样品浸出稀释液100mL和10％薯干粉、10％柠檬酸混合．在振荡摇床上于33—35℃下“富集”培养3—5d，然后进行分离筛选。
㈧ 黑曲霉发酵产柠檬酸的过程中霉菌结球是什么原因跪求大神解答
霉菌接团是正常现象，称为菌丝球，控制一定的接种量，维持比较合适的菌球大小，一般菌球较小时产酸较好，菌球较大时，产酸相对较差。
㈨ 请教黑曲霉生产柠檬酸的原理
柠檬酸生产工艺分为水果提取法，化学合成法和生物发酵法三种。
水果提取法：柠檬酸从柠檬、橘子、苹果等柠檬酸含量较高的水果中提取。此法提取的成本较高，不利于工业化生产。
化学合成法的原料是：丙酮，二氯丙酮或乙烯酮，此法工艺复杂，成本高，安全性低。
生物发酵法：1、表面发酵法，又称浅层发酵法，多以甜菜糖蜜为原料。工艺过程是：将原料先放入煮沸过内加入水煮沸，一次加皇血盐和EDTA二钠盐煮沸灭菌，再用无菌水配成培养基液，加入适量的硫酸铵、磷酸二氢钾作为氮源和营养盐，将培养基液在45-50度下送入发酵室内装入浅底的铝盘或不锈钢盘中，干孢子接入黑曲霉干孢，发酵，过滤掉菌丝后将发酵液中和，酸解、净化、浓缩、结晶等后处理可得。2、固体表面发酵法：多以海藻酸钠为载体，也有采用聚丙烯酰胺。固定化方法以后者为例，将丙烯酰胺单体（ACAM）和N,N-亚甲基双丙烯酰胺（BIS）溶于水后与微生物细胞混合，搅拌，加入四甲基乙二胺和过硫酸钾，室温下放置30min，使之聚合完全，制得凝胶，将其切成3mm*3mm*3mm的小块，用生理盐水洗净后作为载体进行发酵，提取，制得柠檬酸。3、深层发酵法 采用定向培养，紫外线诱变及NTG处理等的配合作用对菌株选育，使其适应以糖蜜为原料的深层发酵，并提高菌株的产酸率和转化率，对蜜糖进行预处理、处理，后经发酵、提取等工艺过程，得到柠檬酸。
降酸一般采用碳酸钙。