『壹』 色谱柱使用和维护注意事项
正确使用和维护色谱柱至关重要，稍有不慎可能影响其性能和寿命。以下是几个关键注意事项：
1. 避免极端压力和温度变化，以及机械震动。温度骤变或柱体跌落可能导致填充物受损；柱压的快速升降也会冲击填料。调节流速需平稳，进样时阀门转动不可过缓。
2. 在调整溶剂组成时，尤其在反相色谱中，应逐渐进行，不可直接从有机溶剂变为全水，反之亦然。
3. 除非生产商明确允许，否则一般不推荐反冲色谱柱，因为这会快速降低柱效。若要反冲，必须确保柱头杂质已清除。
4. 选择适当的流动相（注意pH值），以免固定相受损。有时可在进样器前加预柱，以减少硅胶基质溶解分析柱的风险。
5. 避免直接注入复杂样品，特别是生物样品，可能需要预处理或加保护柱。保护柱应定期更换，填充与分析柱相似的固定相。
6. 定期用强溶剂清洗色谱柱，清洗时需逐步更换溶剂，每种溶液体积为柱体积的20倍左右。清洗顺序和溶剂可参考文章提供的例子。
7. 存储色谱柱时，要确保柱内充满乙腈或甲醇，接头紧固，防止溶剂挥发。避免在柱内留置缓冲液过夜。
8. 压力升高可能是滤片堵塞或大分子污染，柱效降低可能意味着柱头塌陷。处理方法包括取出部分填料，然后用相同溶剂填充并压平。
9. 保护柱可以延长柱子寿命，尽管会略降柱效。硅胶柱在pH2~9范围内使用，柱顶可能吸附物质，定期检查并处理。
10. 工作后使用强洗脱液冲洗，如ODS柱用甲醇。使用盐缓冲液后需用无盐流动相冲洗，避免卤族元素对管道的腐蚀。长期不使用，建议每隔几天开机冲洗。
色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。
『贰』 离子色谱仪没有压力了有什么解决办法
离子色谱仪没有压力可能由多种原因导致，可尝试以下解决办法。
若是流动相问题，检查流动相储液瓶，看是否液位过低或已用完，需及时补充。同时，查看流动相管路是否堵塞，可取下管路，用合适溶剂冲洗疏通。
泵头故障也会引起压力问题。检查泵头是否有气泡，可通过排气操作排出气泡。若泵头密封垫磨损，需更换密封垫。
单向阀若出现堵塞或故障，会影响压力。可将单向阀取下，用适当的溶剂超声清洗，去除杂质后装回。
还有可能是连接管路松动或泄漏。仔细检查各连接部位，确保管路连接牢固，如有泄漏，需重新拧紧或更换密封件。
此外，色谱柱堵塞也会造成压力异常。可尝试反冲色谱柱，但要注意反冲方向和条件，避免损坏色谱柱。若反冲后仍无压力，可能需要更换色谱柱。
『叁』 我是新手，请问如何反冲色谱柱
不到万不得已，还是不要反冲。如果一定要反冲，那就要以较小的流速，如0.2 mL/min，进行反冲，反冲时，柱子下端不接检测器，防止对检测器产生污染。
『肆』 色谱仪,没插纯化器,做色柱活化有什么后果
一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。
2、我在做方法开发的时候,用乙腈和水作为流动相,在调整梯度的时候发现,刚开始用60%乙腈, RT为2.5分钟,调到40%乙腈,RT没有变化,30%也没有变化,一直调到20%的时候,RT突然变到了约13分钟,请问这是什么原因?我用的是离子交柱。
答：离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和pH决定，你现在讲的比较简单，需要把你的方法说的详细一点才能做具体的分析。譬如分析物是什么情况，其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质？离子交换柱是聚合物基质还是硅胶基质？水相是什么缓冲盐？
3、对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？
答：新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。
如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。
4、测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？
答：分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。
5、氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复？
答：氨基柱测酸性样品，应该是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。