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超滤离心机

发布时间:2025-01-04 13:39:43

超滤离心管如何选择以及使用方法

超滤离心管在蛋白质、DNA和生物分子的浓缩、纯化和脱盐过程中被广泛应用。选择和使用超滤离心管时,需要理解其与微滤的区别。

微滤(Microfiltration)利用微孔膜介质去除溶液中尺寸为0.1 μm至10.0 μm的颗粒或生物体,广泛应用于生物制药预过滤和除菌过滤。微滤在细胞实验中常用于样品和培养基灭菌,以及从细胞裂解物中去除完整细胞和碎片,确保下游应用结果准确性。

超滤(Ultrafiltration)通过压力或浓度梯度使料液通过半透膜进行分离,能截留尺寸范围为1-1000kDa的分子,并允许盐和水等小分子通过。它广泛应用于蛋白质溶液的分离和纯化,以及核酸样品制备,如分子克隆和质粒纯化。与沉淀法相比,超滤更为温和,避免生物大分子失活。

超滤离心管是一种利用离心力驱动溶液通过超滤膜进行快速浓缩、渗滤和缓冲液置换的装置,由盖子、过滤装置和离心管组成。通过选择适合的膜孔径,可进行除热源、澄清和分离大分子污染物,或浓缩和脱盐目标分子。

选择超滤离心管时,需考虑样品起始量及超滤膜的截留分子量(MWCO)。样品体积决定离心管尺寸,而截留分子量则需根据目标大分子的分子量选择,通常选择比目标分子小2-3倍的膜。

使用超滤离心管涉及准备、加样、离心和回收步骤。准备阶段需冲洗设备以消除甘油残留,然后在离心前加入适量纯水或缓冲溶液。离心前确保离心机转子平衡,以保持稳定。回收时,从过滤装置或离心管中轻轻提取样品,注意不要接触或损坏超滤膜。

遵循上述步骤,正确选择和使用超滤离心管,将有效实现蛋白质、DNA和生物分子的高效浓缩、纯化和脱盐,为科学研究和工业应用提供可靠支持。

⑵ 求助:第一次使用超滤离心管应该怎么处理

可能不同厂家的产品保存运输条件不一样。
如果有甘油等保护剂,那就一定要洗干净再加样品。版权
干的超滤管也要先润湿再用,否则可能不能完全利用膜面积。
最好,用样品buffer润洗下再加样,最大程度保证蛋白活性。尤其是用过后保存在NaOH或乙醇中后。
一般还是离心机甩一下好,使膜充分浸润。

降低吸附的办法有:
1,蛋白浓度不要过低
2,尽量选用纤维素的低吸附超滤管
3,用前可以用Tween 80等去垢剂润洗(不影响蛋白活性的前提下)
4,加入保护蛋白,如BSA(不影响蛋白后续使用的前提下)

用完保存在20% EtOH中,4C保存,防止长菌,依不同样品可以重复使用不同的次数。

⑶ 超滤管规格太小怎么放进离心机

1、首先将超滤内管插入所提供的一个微量离心管中。
2、其次向超滤管内管中加入不超过500微升的样本,并盖上盖子。
3、最后让盖子的连接带朝着转子的中央,用一个超滤管平衡即可。

⑷ 超滤离心管怎么使用

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。

⑸ 怎样提取那么小的病毒

提取小病毒的方法可以用超滤法:

1、超滤法的关键是超滤膜,可以简单理解为孔径极小的筛子。
2、当含有病毒的溶液通过超滤膜时,病毒就被留在了筛子上,而溶质和小分子物质如各种无机盐等就被滤过了,之后再拿一定体积的液体把病毒从筛子上溶解下来,就实现了浓缩。

要求获取的浓缩病毒大分子杂质含量很低时,就可以选择超离法超速离心了:
超速离心简单说,就是利用变态的重力把含病毒溶液里的病毒甩下来。

在病毒纯化时,常用的方法是密度梯度离心法:
1、首先,在离心管中按浓度低至高配置离心介质
2、然后放到变态离心机里高速甩俩小时候,要分离的样品里的物质就按密度排列在离心管里了。这时再按密度取出需要的条带并重新溶解就好了。

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