A. 同一个超滤浓缩管可以用来纯化不同的蛋白吗
不可以的
不管是哪个公司生产超滤浓缩管使用后都会有蛋白残留在滤膜上,而不管是使回用氯化钠或答者氢氧化钠清洗都不能确保可以完全清理掉残留在膜上的蛋白。
如果不同的蛋白间混合使用,可能前一个蛋白会污染到后一个蛋白,甚至有些某些高活性的酶残留在上面会造成后一个蛋白被酶切降解,造成不必要的损失。
B. 超滤离心管怎么使用
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。
C. 超滤管怎么重复使用
1、携拿森首先用吸头吸取一定量的0.1mol的NaOH清洗滤敏顷膜1-2次。
2、其次用双蒸水冲洗滤膜2-3次。
3、最后将超辩亩滤管浸泡在20%乙醇里直至下次使用即可。
D. 超滤膜净水器取下水管几个月后还能正常净化水吗
不可以使用了,因为超滤膜已经拆封了,虽然你没有使用,但是里面的结构已经受到了污染,不能继续再用了,一旦拆封就马上使用,放着也是放几个月也相当于用了几个月也是过期了不行了。
E. 管式超滤膜和常规卷式超滤膜有什么区别
管式和卷式的超滤膜区别上面这个说的很清楚了:
管式超滤膜组件容易清洗和更换,在原水状内态好的容情况下,压力损失较小,抗高压能力强。能够有效处理含有悬浮物、黏度高和容易堵塞管路的固体污染物质等。
卷式超滤膜元件优点:膜的堆积密度大,结构紧凑,可使用好的平板膜,价格低廉。
其次还有MBR及平板膜组件。
如果说在选膜时,主要还是要根据进水及产水标准、价格来进行筛选。超滤膜当前来说陶氏和科氏以及东丽的都做的还不错,但是如果您要选型的话,需要提前准备水质参数报告及产水要求。
F. 上清液用30kd超滤管超滤出现絮状物是怎么回事
以下是一些原因:
1、超滤管的选择不当:经常使用的30KD超滤管过滤效果较好,如果采用了新的或不同品牌的超滤管,则可能会使得过滤效果受到影响,从而在上清液中出现絮状物。
2、超滤管损坏或不适当的使用:如果超滤管已经损坏或瞎州塌没有正确地安装在设备中,就有可能产生细小的颗粒或细丝等杂质物,进而形成絮状物。
3、上清液样品本身存在问题:如果上迹衫清液中存在高浓度的蛋白质、沉淀或其他大分子物质,这些物质磨圆即使通过超滤管过滤,也很难被完全去除,从而导致上清液出现絮状物。
4、超滤条件不合适:超滤过程中温度、pH值、离子强度等条件不符合要求,也可能会导致上清液中出现絮状物。
G. 大家用过的超滤管怎么保存
超滤膜组件的维护(四川禹华环保)要点:
一、短期停机的情况下:停机2-3天以内,请内在膜组件内部充水容的状态下停机;如果达一周左右时,请注入浓度为50mg/L的次氯酸钠溶液;
二、 长期停机的情况下:膜组件要先经过次氯酸钠药洗后,再注入浓度为1.5%的亚硫酸氢钠溶液。
三、置于阴凉处,不能脱水存放;低于零度时要加甘油防冻;