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离子交换色谱的主要洗脱方式有

发布时间:2024-11-23 11:46:32

Ⅰ 用离子交换法从海带提取碘的实验中,洗脱为什么要分两步

树脂吸附碘的时候是以多碘离子(I3-)吸附,因此需要第一次用氢氧化钠洗脱,发生歧版化反应,洗权脱液中主要为I-和IO3-(碘酸根);第二次用氯化钠洗,发生离子交换,洗脱液主要为I-,顺便将树脂转换成氯型。如果采用一步法很难洗脱完全,收率偏低。

Ⅱ 离子交换树脂可以用乙酸洗脱吗

可以。离子交换树脂吸附很强,虽然很难区分开,但是可以使明誉用部分乙醇,丙酮,乙酸,乙酯等洗脱下来,要注意洗脱的时候先用适量水洗下蛋白质、鞣质、低聚糖、多糖等极性物质瞎滚。乙酸,也叫醋酸,是一种有机化合物,是一种有机一元酸,为食醋主要磨槐余成分。

Ⅲ 为什么离子交换色谱用碳酸钠和碳酸氢钠作为洗脱液

保证离子的移动速度。离子交换色谱为保证离子的移动速度,选用碳酸钠和碳酸氢钠作为洗脱液。离子交换色谱法,是以离子交换剂(如聚苯乙烯基质离子交换树脂)作固定相,基于流动相中溶质(样品)离子和固定相表面离子交换基团之间的离子交换。

Ⅳ 离子交换层析的具体操作

对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒,以保证有较好的均匀度,对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理,使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理,使最终转为-OH-型或盐型交换剂;对于阳离子交换剂则用“酸-碱-酸”处理,使最终转为-H-型交换剂。
洗涤好的纤维素使用前必须平衡至所需的pH和离子强度。已平衡的交换剂在装柱前还要减压除气泡。为了避免颗粒大小不等的交换剂在自然沉降时分层,要适当加压装柱,同时使柱床压紧,减少死体积,有利于分辨率的提高。
柱子装好后再用起始缓冲液淋洗,直至达到充分平衡方可使用。 加样:
层析所用的样品应与起始缓冲液有相同的pH和离子强度,所选定的pH值应落在交换剂与被结合物有相反电荷的范围,同时要注意离子强度应低,可用透析、凝胶过滤或稀释法达此目的。样品中的不溶物应在透析后或凝胶过滤前,以离心法除去。为了达到满意的分离效果,上样量要适当,不要超过柱的负荷能力。柱的负荷能力可用交换容量来推算,通常上样量为交换剂交换总量的1%-5%。 已结合样品的离子交换前,可通过改变溶液的pH或改变离子强度的方法将结合物洗脱,也可同时改变pH与离子强度。为了使复杂的组份分离完全,往往需要逐步改变pH或离子强度,其中最简单的方法是阶段洗脱法,即分次将不同pH与离子强度的溶液加入,使不同成分逐步洗脱。由于这种洗脱pH与离子强度的变化大,使许多洗脱体积相近的成分同时洗脱,纯度较差,不适宜精细的分离。最好的洗脱方法是连续梯度洗脱,洗脱装置见图16-6.两个容器放于同一水平上,第一个容器盛有一定pH的缓冲液,第二个容器含有高盐浓度或不同pH的缓冲液,两容器连通,第一个容器与柱相连,当溶液由第一容器流入柱时,第二容器中的溶液就会自动来补充,经搅拌与第一容器的溶液相混合,这样流入柱中的缓冲液的洗脱能力即成梯度变化。第一容器中任何时间的浓度都可用下式进行计算:
C=C2-(C2-C1)(1-V)A2/A1
式中A1、A2分别代表两容器的截面积:C1、C2分别表示容器中溶液的浓度;V为流出体积对总体积之比。当A1=A2时为线性梯度,当A1>A2时为凹形梯度,A1>A2时为凸形梯度。
洗脱时应满足以下要求:
①洗脱液体积应足够大,一般要几十倍于床体积,从而使分离的各峰不至于太拥挤。
②梯度的上限要足够高,使紧密吸附的物质能被洗脱下来。
③梯度不要上升太快,要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸,会引起区带扩散;而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。
洗脱馏份的分析按一定体积(5-10ml/管)收集的洗脱液可逐管进行测定,得到层析图谱。依实验目的的不同,可采用适宜的检测方法(生物活性测定、免疫学测定等)确定图谱中目的物的位置,并回收目的物。
离子交换剂的再生与保存离子交换剂可在柱上再生。如离子交换纤维素可用2mol/:NaCl淋洗柱,若有强吸附物则可用0.1mol/LNaOH洗柱;若有脂溶性物质则可用非离子型去污剂洗柱后再生,也可用乙醇洗涤,其顺序为:0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存离子交换剂时要加防腐剂。对阴离子交换剂宜用0.002%氯已定(洗必泰),阳离子交换剂可用乙基硫柳汞(0.005%)。有些产品建议用0.02%叠氮钠。

Ⅳ 离子交换时常用的洗脱方式有哪些

再生剂方面:
软化钠床:浓度为5-8%的NaCl溶液,再生剂用量为树脂床层体积的3倍,再生液接触内时间大于30分钟;容
阳床(即氢床):浓度为4%的HCl溶液,再生剂用量为树脂床层体积的3倍,再生液接触时间大于30分钟;
阴床:浓度为4%的NaOH溶液,再生剂用量为树脂床层体积的3倍,再生液接触时间大于30分钟;
再生方式方面:
1)顺流再生
2)逆流再生
3)混床设备分同步再生(即上面进碱,下面进酸,计算准确流量,从中排口排出),两步再生(即先从上部进碱,从下部排除,然后从下部进酸,上部进水顶压,从中排口排出)。

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