A. 瓒呮护浼樼己鐐
瓒呮护鎶鏈浣滀负涓绉嶅父瑙佺殑鍒嗙诲拰绾鍖栨墜娈碉紝鍏锋湁鏄捐憲鐨勪紭鍔裤傞栧厛锛屽叾鎿嶄綔绠渚匡紝鏃犻渶棰濆栨坊鍔犲寲瀛﹁瘯鍓傦紝杩欎娇寰楀畠鍦ㄥ疄闄呭簲鐢ㄤ腑鑺傜渷浜嗘垚鏈锛屽噺灏戜簡澶嶆潅姝ラゃ傚叾娆★紝瓒呮护杩囩▼娓╁拰锛屾棤闇缁忓巻鐩稿彉鍖栵紝濡傝捀鍙戞垨鍐峰喕骞茬嚗锛屽洜姝ゅ彲浠ラ伩鍏嶅圭敓鐗╁ぇ鍒嗗瓙濡傝泲鐧借川绛変骇鐢熶笉鍒╁奖鍝嶏紝濡傚彉鎬с佸け娲诲拰鑷婧讹紝淇濇寔浜嗙敓鐗╂椿鎬с傚湪鐢熺墿澶у垎瀛愮殑鍒跺囪繃绋嬩腑锛岃秴婊ゆ湁鐫閲嶈佷綔鐢锛屼富瑕佺敤浜庤劚鐩愩佽劚姘村拰娴撶缉绛夋ラわ紝涓哄悗缁澶勭悊鎻愪緵浜嗗熀纭鏉′欢銆
鐒惰岋紝瓒呮护骞堕潪瀹岀編鏃犵己銆傚畠鐨勫眬闄愭т富瑕佷綋鐜板湪涓嶈兘鐩存帴鑾峰緱骞茬矇鍒跺墏锛屽逛簬铔嬬櫧璐ㄦ憾娑诧紝閫氳繃瓒呮护寰楀埌鐨勬祿搴﹂氬父鍦10%鍒50%涔嬮棿锛岃繖鎰忓懗鐫鍦ㄦ煇浜涢渶瑕侀珮娴撳害浜у搧鐨勬儏鍐典笅锛屽彲鑳介渶瑕佽繘涓姝ョ殑娴撶缉姝ラゃ傚洜姝わ紝瓒呮护鎶鏈鍦ㄥ疄闄呭簲鐢ㄤ腑闇瑕佷笌鍏朵粬鎶鏈鐩哥粨鍚堬紝浠ユ弧瓒充笉鍚屽満鍚堢殑闇姹傘
B. 纯化的单克隆抗体,超滤浓缩的时候会把磷酸盐离心掉导致抗体的缓冲环境变成水吗
不会的。。。
超滤浓缩对于缓冲液成分不会有任何改变的,因为PBS中的磷酸根离子回也好答,氯离子也好,钠离子也好都是很小的离子,可以在溶液中自由扩散,不会因为超滤离心就被甩到下层滤液中去。
你可以做个简单的实验,取一定体积PBS溶液测一下pH值和电导率值,之后用超滤管去离心。取出上层未被滤完的溶液再测一下pH值和电导率值,会发现pH值和电导率值和之前测的是一样的。即可证明未被滤完的溶液还是PBS溶液,而不是水。
C. 请问超滤管可以纯化胃蛋白酶消化后的IgG吗。需要F(ab')2片段。
超滤管不建议用复于纯化,适制用于去盐或浓缩,尤其是对于你的这个实验,问题有3点:
1、胃蛋白酶35KD左右,Fab2有90KD,两者的分子量相差不到3倍,你很难选到合适孔径的超滤管能较好分离两者,用分子筛还是可以的;
2、超滤管总体蛋白回收率比纯化技术低;
3、每次超滤,都会有上层滤液残留,无法高效率去除这部分杂蛋白。
以上意见供您参考,祝愉快!
D. 蛋白纯化过程中,超滤能除咪唑吗
您好!可以的,但是超滤除的不是很干净,用分子筛干净些。
网络教育团队【海纳百川团】为您解答。
感谢您的采纳 O(∩_∩)O 。如有疑问,欢迎追问。
E. 同一个超滤浓缩管可以用来纯化不同的蛋白吗
不可以的
不管是哪个公司生产超滤浓缩管使用后都会有蛋白残留在滤膜上,而不管是使回用氯化钠或答者氢氧化钠清洗都不能确保可以完全清理掉残留在膜上的蛋白。
如果不同的蛋白间混合使用,可能前一个蛋白会污染到后一个蛋白,甚至有些某些高活性的酶残留在上面会造成后一个蛋白被酶切降解,造成不必要的损失。