❶ 超滤离心管怎么使用
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。
❷ 浸没式管式超滤膜如何进行清洗
管式超滤膜正确的清洗方法:
1、对于一般的膜孔不是特别细小的可拆式的回超滤滤芯,可直接拆开答用柔软物质一边擦拭一边用清水冲洗。
2、用海绵球擦洗,根据膜管直径大小,选择合适的海绵球,利用专用设备通过膜管进行擦拭清洗,可以反复使用。
3、热水冲洗法将水加热到(30-40℃),然后冲洗膜表面,去除那些粘稠或者是热溶的杂质效果很好。
❸ 选择管式超滤膜需要注意的问题有哪些
超滤膜使用注意事项:
1、超滤系统要定期灭菌:超滤膜具有截留细菌的作用,但版却不能杀菌,如果长期权使用不排除会影响到截留率现象的发生,虽然这种可能性比较低,但为保证产水水质而做好预防措施是必要的。因而,必须对过滤系统进行定期的灭菌,同时也要对周转环境进行定期的灭菌。杀菌周期可根据具体的水质情况而定。
2、注意保护超滤组件:超滤组件属于精密器材,因而在使用安装时需要轻拿轻放,注意防护。组件停用时,需要先清洗干净后再进行密封,在特别地区的冬天,还需要对组件进行防冻处理。
3、在使用超滤膜之前,要仔细阅读使用说明,按照说明进行操作。
4、过滤系统组件数根据设计总透水量而定,因而在设计时,需要考虑可能影响到超滤组件透水量的相关因素。
5、超滤组件在出厂前会被放入保护液,因此在使用前需要进行冲洗,直至保护液被彻底清除。
❹ 超滤管怎么重复使用
1、携拿森首先用吸头吸取一定量的0.1mol的NaOH清洗滤敏顷膜1-2次。
2、其次用双蒸水冲洗滤膜2-3次。
3、最后将超辩亩滤管浸泡在20%乙醇里直至下次使用即可。