阴离子交换柱如何冲洗

A. 离交柱阴柱难淋洗怎么办

阴离子交换柱的清洗方式通用有三种，分别用于清洗酸溶性、碱溶性或有机污染物，在清洗过程中必须要确保严格按照清洗过程进行，否则会引起色谱柱的局部高压而损坏色谱柱。对于有机溶剂清洗色谱柱，需要逐步减少有机溶剂的量以避免由于混合的流动相黏度的变化。

（一）选择合适的清洗溶剂

1、对高价亲水污染物：用1~3mol/l的盐酸做淋洗液。

2、对低价亲水污染物：用10倍的淋洗液。

3、有机污染物：有机污染物会引起色谱柱效降低，可以采用兼容的有机溶剂清洗，有时也可以采用高浓度的盐酸与有机溶剂混合清洗则更有效。

4、对金属污染物：会引起色谱峰不对称性，可采用络合剂酸类，如0.2mol/l草酸。

（二）清洗过程

1、配制500mL合适的清洗溶液。

2、断开抑制器中，分别清洗保护住和分离柱，如果分离柱和保护住串联清洗，则将保护柱接在分离柱之后。

3、设置流速对2mm色谱柱采用0.5ml/min，而对4mm色谱柱采用2ml/min。

4、用二次去离子水冲洗色谱柱15min。

5、用清洗液清洗色谱柱60min。

6、用二次去离子水冲洗色谱柱15min。

7、连接抑制器，用淋洗液平衡色谱柱。

B. 离子交换层析中，为什么用氯离子洗脱阴离子

离子交换层析中，为什么用氯离子洗脱阴离子
阴离子交换柱的填料是正电填专料,在低盐条件下可以属通过电荷相互作用吸附样品中的阴离子和负电荷物质（如DNA）.这些带负电的物质由于其带电量不同,分子大小不同,因而与正电填料之间的结合力也就不同.用梯度的氯离子（一般用氯化钠梯度,例如从100mM氯化钠线性梯度升高到1M氯化钠）洗脱挂柱样品时,氯离子会和结合上的物质竞争结合正电填料,伴随着氯离子浓度的不断升高,氯离子的竞争作用越来越强,与填料结合的物质会按照亲和力从弱到强依次洗脱下来,形成独立的洗脱峰,从而将这些物质分开.
阳离子交换柱与之正好相反,柱子填料为负电荷,用钠离子洗脱结合的正电物质.

C. 急！急！如何装阴离子交换柱，使用时候出现气泡怎么除去谢谢

可以用适量的有机溶剂润洗一下层析柱，柱子体积较小的话就用玻璃棒搅匀排除一下气泡。

不管是干柱和湿柱，都要加层析液，不能要求一开始就没有气泡的。要用洗脱剂不停的洗脱，就是用配置好的试剂一边一边对柱子进行洗脱，这样不但可以消除气泡，还可以使硅胶充分沉降，让层析效果更好。等柱子没有气泡后在上样用洗脱液进行层析。

若柱中留有气泡或各部分松紧不匀（更不能有断层）时，会影响渗透速度和显色的均匀。去除就是用玻璃棒搅拌，赶走气泡。

(3)阴离子交换柱如何冲洗扩展阅读：

水溶液中一些阳离子进入了反离子层，而原来的反离子层中的阳离子进入了水溶液。这种在正常浓度下，反离子层与水溶液之间的各向同性离子交换称为离子交换作用。

离子交换主要发生在扩散层与正常水溶液之间。由于粘土颗粒表面通常带有负电荷，离子交换主要是阳离子交换，所以又称阳离子交换。离子交换严格遵循等价定律，即进入反离子层的阳离子等价于从反离子层排开的阳离子等价。

D. 为什么阴阳离子交换树脂混合后会结块

阳、阴离子交换树脂酸碱再生混合后会结块的现象叫做抱团现象，主要发生于混床设备中的阳阴树脂之间。
由于静电力的作用，新树脂表面非常干净，阳树脂和阴树脂间的静电力非常强困含笑，使得树脂抱团能力强，混床设备反洗难以自老者然分开，通过加入电解质（氯化钠或氢氧化钠）到树脂层中，消除树脂间的静电力，这样树脂就不会再抱团，树脂反洗才能分层明显。
具体操作如下：
1. 将水液面放置树脂层上约500mm处，从交换柱进碱管，以3~4m/h的流速从上向下通入两倍树脂体积（阳阴树脂总树脂量）的约4%NaOH溶液，此时排出废液pH大于14，然后用交换柱内的氢氧化钠溶液浸泡4~8h。
2. 碱浸泡时，每1小时用压缩空气搅拌10~20min，碱液浸泡结束后，不经清洗，直接进行大反洗，反洗开始时，流速宜小，待树脂松动后，逐渐加大反洗流速，使整个树脂层的展开率在50~70%，维持10min左右，关闭反洗阀门，让树脂自由沉降，观察树脂分层情况。
3. 如树脂分层还不明显汪含，打开下排水阀门，将混床树脂上部空间的碱液排回到树脂层中，使整个树脂层处于碱液中，再重新反洗分层。如此重复，直至树脂分层明显。
4.确认阳、阴树脂良好分层后，自上向下正洗（正洗流速一般为20-40m/h）至出水PH8-9，最后进行正常再生处理即可。
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E. 新离子交换树脂如何进行预处理

（1）阳离子交换树脂的预处理步骤
首先用清水对树脂进行冲洗（最好为反洗）洗至内出水清澈无混浊、无杂质为止容。而后用4~5%的HCl和NaOH在交换柱中依次交替浸泡2~4小时，在酸碱之间用大量清水淋洗（最好用混合床高纯度去离子水进行淋洗）至出水接近中性，如此重复2~3次，每次酸碱用量为树脂体积的2倍。最后一次处理应用4~5%的HCl溶液进行，用量加倍效果更好。放尽酸液，用清水淋洗至中性即可待用。
（2）阴离子交换树脂的预处理步骤
首先用清水对树脂进行冲洗（最好为反洗），洗至出水清澈无混浊、无杂质为止。而后用4 ~5%的NaOH和HCl在交换柱中依次交替浸泡2 ~4小时，在碱酸之间用大量清水淋洗（最好用混合床高纯度去离子水进行淋洗）至出水接近中性，如此重复2~3次，每次酸碱用量为树脂体积的2倍。最后一次处理应用4~5%的NaOH溶液进行，用量加倍效果更好。放尽碱液，用清水淋洗至中性即可待用。

F. 离子交换树脂怎么用

离子交换树脂应该如何使用？

离子交换树脂的使用方法，主要分为四个部分，分别是填装、反洗、再生、清洗，下面为大家详细的介绍离子交换树脂的使用方法：

填装：

1.先将干净的水放入树脂罐当中，高度在树脂罐的三分之一左右，可以有效的防止树脂与树脂罐发生碰撞，造成树脂的损坏。

2.将树脂从树脂罐顶部放入，然后对树脂进行反洗，时间大概在30分钟左右。

3.排水至液面高于树脂层5cm，进气混合树脂15～20分钟。

4.启动设备，检测正洗效果和出水电导率，如果数据正常，且产水能够达标，即可正常使用。

反洗：

树脂在工作一段时间之后，树脂上会有很多杂质，为了树脂的更好的使用，需要将这些杂质清除，一般的步骤是：从交换柱的底部进水，从顶部出水，对树脂进行反洗，直至出水清澈为止。

再生：

使用一定浓度的食盐水清洗树脂，（实验证明清洗的效果要比浸泡的效果更好）流速不能太快，一般再生的流速在10~15m/h左右，一般需要清洗半个小时左右，再生时需要根据实际的情况来决定清洗的时间。

清洗：

在食盐水清洗之后，使用与食盐水相同的流速进行冲洗，将树脂中的盐全部清洗干净，这个过程也是树脂再生的过程之一，所以很多人将这个过程叫做置换，时间大概一下30分钟左右。

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G. 急求~离子交换柱清洗方法

离子交换层析
Tina 发表于 2006-2-21 12:21:00
材料与仪器

DEAE-32纤维素，pH8.0 0.01 mol/L Tris-HCl，工程菌破碎离心后的上清液；

层析柱

二、 方法与步骤

1） 装柱：

用水清洗层析柱，柱内留存水距底部约1cm，加入18ml介质（凝胶溶液）。

2） 平衡：

加0.01M,PH8.0,tris-HCl缓冲液，直至流出液PH与缓冲液一致。

3） 上样：

用量筒量出上清液体积，再加入等体积缓冲液混合，取EP管留1.5ml。待柱中水流出，至刚好覆盖凝胶表面，靠璧缓慢加样。

4) 用50ml缓冲液洗涤，用EP管随机收集样品穿出液和洗涤穿出液。

5) 洗脱：

将梯度洗涤仪和层析柱连接，洗脱瓶A（混合器）加200µl缓冲液，开口打开至两瓶液面相平，相通管道出无气泡，关闭连接，A中加入6gNaCl溶解，把装置放在梯度混合仪上，开动搅拌器开关，打开A和B的连接通道，层析柱下端连收集器，收集洗脱流出液。

6） 控制流速，约4min/管，2-3ml/管。

分子筛的是凝胶层析
Sephadex G-100凝胶层析
Tina 发表于 2006-2-21 12:27:00
材料与仪器

Sephadex G-100，0.5 mol/L pH8.0 Tris-HCl，浓缩液

层析柱

二、 方法与步骤

1） Sephadex G-100 凝胶预处理

a) 100ml烧杯，称取5克sephadex G-100,加入50ml去离子水，浸泡溶胀24小时。

b) 倾去sephadex G-100溶胀后凝胶上层的水，加入凝胶等体积的1.0 mol/L NaOH液处理，用搅棒轻轻搅动，并浸泡1小时处理后倾去。用去离子水洗涤。洗涤过程中，用倾去法除去细颗粒。其方法是用搅棒将凝胶搅匀（注意不要过分用力搅拌，以防止颗粒破碎），放置数分钟，将未沉淀的细颗粒随上层水倒掉。浮选3-5次，直至上层没有细颗粒为止，再浸泡水洗至PH中性。

c) 将Sephadex G-100凝胶水溶液盛放于抽滤瓶中，用洗耳球塞住杯口，减压抽气30分钟，除去凝胶溶液内的气泡，将脱气后的凝胶溶液轻轻倒入烧杯中，其中盛有1/2去离子水。

2) 装柱

a) 层析柱(1.0Î50cm)用水清洗干净，柱的上、下端联接塑料管接上小乳胶管，装上螺旋夹。将层析柱垂直装好。校直过程用下端绑有钥匙的绳子挂于铁架的不同位置，从多角度校正使柱垂直。打开柱上端口，从柱底下出口管朝柱内注入水，使柱底全部充满水而不留气泡，关闭柱出口。最终柱内留存有2 cm的水。从出口处接上一根直径2 mm细塑管，塑管另一端固定在柱的上端部位。

b) 搅动凝胶溶液（切勿搅动太快，以免空气再逸入），使形成均一的薄胶浆，并立即沿玻棒倒入层析管内，让加入的凝胶在柱内自然沉降，待柱底面上积起约1-2 cm的凝胶床后，打开柱出口水流。随着柱内水的流出，上面不断加入凝胶液，使形成的凝胶床面上有凝胶连续下降（如果凝胶床面上不再有凝胶颗粒下降，应该用搅棒均匀地将凝胶床搅起数厘米高，然后再加凝胶，不然就会形成界面，影响层析效果）。

c) 凝胶沉积到柱内凝胶是否均匀，有否“纹路”或气泡。若层析柱不均一，必须重新装柱。

3） 平衡

柱装好后，使层析床稳定15-20分钟，然后连接洗脱瓶出口和层析柱顶端，用3-5倍体积地缓冲液平衡层析柱。平衡过程中控制上柱缓冲液地进柱操作压保持恒定。保持流速每滴/10秒。直至流出液的PH与上柱缓冲液完全相同。

4） 样品洗脱

a) 上样准备：

i) 上样前打开层析柱上端，先检查凝胶床界面是否平整，如果倾斜不平整，可用玻棒将凝胶床界面轻轻搅起后，再使凝胶自然沉降，形成平整状态的凝胶床界面。用毛细吸管小心吸去大部分清液，然后让液面自然下降，直至几乎露出凝胶床界面。

ii) 样品放入高速离心机，12000r/min、离心5 min。

iii) 上样前吸取50µl样品于EP管中，以备走电泳。

b) 样品上样：

i) 将样品由玻棒引流沿管壁加入到凝胶床面上，注意不要将床面凝胶冲起。同时打开层析柱下面流出液开关（控制流速1滴/20秒），保持层析柱下面流出滴速与上样的滴速一致，控制凝胶床界面不能脱水，并控制样品区带尽量狭窄。

ii) 当1.5ml样品全部加入后，用 1-2 ml的0.5mol/L PH8.0 Tris-HCl洗脱液同上样时一样地保持层析柱下面流出滴速与上样的滴速一致以控制凝胶床界面不能脱水，小心清洗凝胶床界面表面，使黏附着的样品全部洗入凝胶床。

iii) 然后开始控制上样的滴速大于层析柱下面流出滴速，使几乎与凝胶床界面相平的洗脱液液面慢慢提高至凝胶床界面高出2cm左右，封闭层析柱上端。

iv) 保持层析柱上柱洗脱液入口处与层析柱下面流出处有一定势压。控制上柱缓冲液的进柱操作压保持恒定。

c) 洗脱：

用0.1 mol/L PH8.0 Tris-HCl 缓冲液洗脱，用部分收集器收集，4分钟/管（约2-3ml/管），收集约1-30管。

5） 酶活、酶浓度测定，参见2.6.2，2.6.3

6） 最高酶活收集管洗脱液留50µl，以备走电泳。

7） 将酶活较高的收集液10~14管合并，测定总体积为7.1 ml，精确测定酶活性。并用考马思亮蓝测定蛋白浓度。测酶活时体系稀释了200倍，定蛋白时无稀释。

H. 阴离子交换柱用什么冲洗和保养方法

氢氧化钠浸泡，水洗至微碱性，盐酸浸泡，水洗至中性，即可。