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② 分离蛋白质实验中的洗脱液是什么溶液
如果你问的是离子交换层析的话洗脱液就是由不同离子强度(PH)的缓冲液构成.
由于不同生物大分子的电荷密度分布不同,电荷量不等,等电点的差异及分子大小的区别,因而与离子交换剂的结合强弱也不同,当它们被结合到固定相交换基团上以后,主要依靠增加缓冲溶液的离子强度或改变酸碱度来进行洗脱.当缓冲液离子强度增加时,即增加了它与生物大分子对交换基团竞争吸附的能力,把生物大分子置换下来,改变酸碱度,使缓冲溶液的pH接近生物大分子的等电点,其净电荷为零,从而可被洗脱.
③ 离子交换后为什么要用水洗涤树脂流出液至中性
氢氧化钠溶液浸泡2~4h(或以小流量清洗),将碱液放尽之后,使用清水冲洗罗门哈斯离子交换树脂至排出水接近中性为止,可以去除有机物以及硅等杂质。
当阴离子交换树脂过滤完毕之后,通常用蒸馏水洗涤剩余的液体,然后用合适的洗脱液洗脱阴离子交换树脂。在洗脱过程中,首先洗脱上层中交换的离子,当它们穿过下层中未交换的树脂时,它们会再次交换。因此,初始洗脱液中的交换离子浓度将为零。随着洗脱的进行,洗脱液离子浓度逐渐增加,达到最大值,然后再逐渐降低。洗脱完成后,洗脱离子浓度将降低。它将再次等于零。对于阴离子交换树脂,通常将NaCl或NaOH溶液用作洗脱液,然后将树脂转换为氯或氢氧化物类型。因此,洗脱的树脂可以再生,用蒸馏水洗涤,然后再使用。
阴离子交换树脂的洗脱:
阴离子交换树脂在使用一段时间后,上层树脂的与水中离子交换的能力已完全失效了,下层树脂却还能继续使用。中间树脂部分失效。这部分称为“边界层”。当边界层达到一定水平时,水中的离子会某种程度地泄漏,并且一部分未交换的树脂保留在树脂层中,这时使用洗脱液洗脱树脂,把未失效的阴离子交换树脂洗脱出来,方便对已经失效的阴离子交换树脂进行再生。
④ 大孔吸附树脂和离子交换树脂的洗脱剂的使用有何不同
1、从孔结构方面来看,大孔离子交换树脂的比表面积要低,吸附树脂的孔结构发达,比表面积高。
2、从应用原理角度来看,吸附树脂主要是通过树脂内部的孔道进行物理吸附,高的比表面积提供高吸附量。大孔离子交换树脂主要是树脂上的可交换离子与溶液中的离子发生交换反应,大孔仅仅是使溶液及溶质易于渗透进入树脂(与凝胶树脂相比)。但是按照这样来讲,大孔离子交换树脂也有吸附有机物的功能,只是吸附量较低,没有应用价值而已。
3、从骨架结构上看,大孔离子交换树脂与吸附树脂并无区别,只是吸附树脂有的不带功能基团,因此其合成方法相似。带强极性官能团的吸附树脂与大孔离子交换树脂很难区分开。洗脱液的选择,常用甲醇,乙醇,丙酮,乙酸乙酯。先用适量水洗下蛋白质、鞣质、低聚糖、多糖等极性物质。再用低到高浓度的醇依次洗脱,一般70%乙醇洗脱皂苷。3%~5%碱液洗下黄酮、有机酸、酚类和氨基酸。10%酸洗下生物碱、氨基酸。丙酮洗下中性亲脂性成分。
⑤ 用强酸性阳离子交换树脂分离氨基酸混合物时,为什么要逐步提高洗脱液的pH和离子强度
用强酸性阳离子交换树脂分离氨基酸混合物时,氨基酸都是以阳离子的形式版,被吸附到树脂权的离子交换位上。
由于氨基酸是两性化合物,既有酸性,也有碱性,因此氨基酸都有等电点,pH低于等电点时,呈阳离子状态,pH高于等电点时,呈阴离子状态。氨基酸被强酸性离子交换树脂吸附后,都是以阳离子形式存在的,转变为阴离子就会被洗脱。通过逐渐提高洗脱液的pH,利用氨基酸不同的等电点,使不同的氨基酸逐渐从阳离子改变为阴离子,而被洗脱出来,从而达到分离效果。
⑥ 离子交换分离操作中,以高浓度盐溶液进行洗脱的原理是
用离子交换树脂进行分离的操作程序包括三个步骤,具体操作过程如下文中所述.
(1)交换柱的制备首先选择合适的离子交换树脂类型,用相应的溶液进行处理,如强酸性阳离子交换树脂需要在稀盐酸中浸泡,以除去杂质并使之溶胀和完全转变成H式.然后用蒸馏水洗至中性,装入充满蒸馏水的交换柱中.注意防止气泡进入树脂层.
(2)交换使待处理水样以合适的流速通过交换柱进行离子交换.交换完毕后用蒸馏水洗去残留的溶液及交换过程中形成的酸、碱或盐类等.
(3)洗脱洗脱是将已交换到树脂上的离子分离出来的过程.选择合适的洗脱液,使之以适宜速度通过交换柱进行洗脱.(更多质量检测、分析测试、化学计量、标准物质相关技术资料请参考中检所对照品查询 www.rmhot.com)
阳离子交换树脂常用盐酸溶液作为洗脱液;阴离子交换树脂常用盐酸溶液、氯化钠或氢氧化钠溶液作洗脱液.对于分配系数相近的离子,可用含有机络合剂或有机溶剂的洗脱液,以提高洗脱过程的选择性.
离子交换技术在富集和分离微量或痕量元素方面应用很广.例如分离水中的锂离子、锰离子、铜离子、铁离子、锌离子等多种金属离子,首先加入盐酸使一部分离子转变为络合阴离子,然后将水样通过强碱性阴离子交换树脂,各种离子均被交换在树脂上,最后用不同浓度的盐酸溶液进行洗脱分离.锂离子不生成络合阴离子,不发生交换,可用12mol/L HCl溶液最先洗脱出来
⑦ 离子分离为什么用不同浓度的洗脱液洗脱
阴离复子交换柱的填料是正电制填料,在低盐条件下可以通过电荷相互作用吸附样品中的阴离子和负电荷物质(如DNA).这些带负电的物质由于其带电量不同,分子大小不同,因而与正电填料之间的结合力也就不同.用梯度的氯离子(一般用氯化钠梯度,例如从100mM氯化钠线性梯度升高到1M氯化钠)洗脱挂柱样品时,氯离子会和结合上的物质竞争结合正电填料,伴随着氯离子浓度的不断升高,氯离子的竞争作用越来越强,与填料结合的物质会按照亲和力从弱到强依次洗脱下来,形成独立的洗脱峰,从而将这些物质分开.
阳离子交换柱与之正好相反,柱子填料为负电荷,用钠离子洗脱结合的正电物质.
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