『壹』 请问羧甲基纤维素和DEAE纤维素分离蛋白有什么区别
羧甲基纤维素是弱阳离子交换填料,要求使用时的pH值要低于目的蛋白质等电点起码0.5个pH值单位,为了达到较好的分离效果,实际使用时最好是低于1个以上pH值单位。在低pH值下,有的不耐酸的杂质蛋白质会变性,届时离心除去,可首先去除一部分杂质蛋白质。
DEAE纤维素是弱阴离子交换层析填料,要求使用时的pH值要高于目的蛋白质等电点起码0.5个pH值单位,为了达到较好的分离效果,实际使用时最好是高于1个以上pH值单位。大多数蛋白质的等电点在6.0左右,可以耐受8.0,所以依据pH提高使得某些杂质蛋白质变性的做法多数情况下不可行。
这两种填料的工作pH值不同,但都可以用氯化钠来洗脱。交换基团不同,分离效果也不同,可以先用一种来纯化,得到初步纯化的产物之后再用另一种来纯化。因为有些蛋白质不能耐受酸,所以我建议先用羧甲基纤维素弱阴离子交换层析,再用DEAE纤维素弱阳离子交换层析,产物的纯度比单用一种时更高。
在对蛋白质的破坏方面,弱交换填料比强交换填料好,有的蛋白质用强离子交换来纯化,蛋白质结合再交换之后会损失很多活力,但是弱离子交换则损失的活力较少。但是弱离子交换的分辨率比强离子交换差一些。如果纯化得不好,又有强离子交换的,就试一下吧。lxj341401(站内联系TA)一个是阳离子交换填料,一个是阴离子交换填料,用哪个跟蛋白值的等电点pI还有所用缓冲液的pH有关,pH>pI时带负电荷,蛋白质能吸附到阴离子交换填料,相反的用阳离子交换。所以能不能代替看具体情况了。悦迷008(站内联系TA)Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-15 06:00:21:
这两个填料虽然都是离子交换用的,但一个是弱阴一个是弱阳,效果不同,没有一个能代替另一个的说法。
『贰』 我要分离纯化一种未知酶,一切未知,想用凝胶层析和离子交换层析分离,不知选用什么填料合适有好的建议
建议用离子交换层析。凝胶过滤层析流速慢,上样量低,而且分离效果一般,凝胶回过滤答一般用于层析的后期包括除盐,去除降解片段之类的。
离子交换一般就用到DEAE,因为大部分蛋白都偏酸。要是你的酶是碱性蛋白,那就更好办,上个CM柱,其他杂蛋白就留不下多少了。
所以先拿DEAE试试吧。
『叁』 沸石有什么作用
天然沸石是一种新兴材料,被广泛应用于工业、农业、国防等部门,并且它的用途还在不断地开拓。沸石被用作离子交换剂、吸附分离剂、干燥剂、催化剂、水泥混合材料。
1、在石油、化学工业中,用作石油炼制的催化裂化、氢化裂化和石油的化学异构化、重整、烷基化、歧化;气、液净化、分离和储存剂;硬水软化、海水淡化剂;特殊干燥剂(干燥空气、氮、烃类等)。
2、在轻工行业用于造纸、合成橡胶、塑料、树脂、涂料充填剂和素质颜色等。在国防、空间技术、超真空技术、开发能源、电子工业等方面,用作吸附分离剂和干燥剂。
3、在建材工业中,用作水泥水硬性活性掺和料,烧制人工轻骨料,制作轻质高强度板材和砖。
4、在农业上用作土壤改良剂,能起保肥、保水、防止病虫害的作用。在禽畜业中,作饲料(猪、鸡)的添加剂和除臭剂等,可促进牲口成长,提高小鸡成活率。
5、在环境保护方面,用来处理废气、废水,从废水废液中脱除或回收金属离子,脱除废水中放射性污染物。
6、在医学上沸石用于血液、尿中氮量的测定。沸石还被开发成为保健用品,用于抗衰老,去除体内积累的重金属。
7、在供应中沸石常用于砂糖的精制。
8、新型墙材(加气混凝土砌块)原料:随着实心黏土砖逐步退出舞台,新型墙体材料应用比例目前已达到80%墙体材料供应企业以煤矸石、粉煤灰、陶粒、炉渣、轻质工业废渣、重质建筑垃圾、沸石等为主料,积极开发新型墙体材料。
9、在化学蒸馏或加热实验当中常用来防止暴沸,沸石的结构当中有大量的小孔,可作为气泡的凝结核,使反应液平稳沸腾。可用敲碎至米粒大小的素烧瓷片代替。
10、在水产养殖中可以用作鱼虾饲料添加剂,也可以做鱼塘修建材料,净化水质。
『肆』 离子交换色谱法的原理,装置及应用
原理:
离子交换色谱(ion exchange chromatography,IEC)以离子交换树脂作为固定相,树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时,组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换。根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。
装置:
(1)分离柱 装有离子交换树脂,如阳离子交换树脂、阴离子交换树脂或螯合离子交换树脂。为了减小扩散阻力,提高色谱分离效率,要使用均匀粒度的小球形树脂。最常用的阳离子交换树脂是在有机聚合物分子(如苯乙烯-二乙烯基苯共聚物)上连接磺酸基官能团(─SO3─)。最常用的阴离子交换剂是在有机聚合物分子上连接季铵官能团(─NH4)。这些都是常规高交换容量的离子交换树脂,由于它们的传质速度低,使柱效和分离速度都低。C.霍瓦特描述了一种薄膜阴离子交换树脂,它是在苯乙烯-二乙烯基苯共聚物核心上沉淀一薄层阴离子交换树脂,就象鸡蛋有一薄层外皮那样,离子交换反应只在外皮上进行,因此缩短了扩散的路径,所以离子交换速度高,传质快,提高了柱效。同样,在小颗粒多孔硅胶上涂一薄层离子交换材料也可得到相同类型的树脂。螯合离子交换树脂具有络合某些金属离子而同时排斥另一些金属离子的能力,因此这种树脂具有很高的选择性。除了离子交换柱外,其他高效液相色谱柱也可用于分离离子。
(2)抑制柱和柱后衍生作用 常用的检测器不仅能检测样品离子,而且也对移动相中的离子有响应,所以必须消除移动相离子的干扰。在离子色谱中,消除(抑制)移动相离子干扰的常用方法有两种。
①抑制反应,用抑制反应来改变移动相,使移动相离子不被检测器测出。离子色谱通常使用电导检测器。在抑制反应中??缍匝衾胱佣?裕?把高电导率移动相的氢氧化物转变成水,而样品离子则转变成它们相应的酸:
NaOH+H+─→Na++H2O
NaX+H+─→HX+Na+
在装有强酸性阳离子交换树脂的柱中进行抑制反应,使用一段时间后,这种树脂就需要再生,很不方便。改用连接有磺酸基(─SO3H)的离子交换膜(阳离子交换膜)或用连接有铵基(─NH4)的离子交换膜(阴离子交换膜),就可以连续进行抑制反应。例如,阳离子交换膜可使阳离子通过它扩散过去,而阴离子则不能扩散过去。
1981年,T.S.史蒂文斯和斯莫尔等报道了中空纤维抑制法。这种纤维是由阳离子交换膜材料拉制而成。用这种方法不仅不需要再生抑制柱而且减小了峰的加宽,提高了柱效。一种比较新的膜技术是加一电场以加速离子的传递,该法与中空纤维法比较,其优点是反应时间短、交换能力高,并且可以用于阳离子和阴离子两者。
②柱后衍生作用,将从柱子流出的洗出液与对被测物有特效作用的试剂相混合,在一反应器中生成带色的络合物(见配位化合物)。对衍生试剂最重要的要求是它们与被测物能生成络合物,但不与移动相生成络合物。柱后衍生法能用于测定重金属离子,所用的衍生试剂有茜素红S等。
(3)检测器 分为通用型和专用型。通用型检测器对存在于检测池中的所有离子都有响应。离子色谱中最常用的电导检测器就是通用型的一种。紫外-可见分光光度计是专用型的检测器,对离子具有选择性响应。可变波长紫外检测器与电导检测器联用,能帮助鉴定未知峰,分辨重叠峰和提供电导检测器不能测定的阴离子,如硫化物及亚砷酸中的阴离子的检测。
在离子色谱中,电导检测法总是和抑制反应配合使用。这种检测器对分子不响应,如水、乙醇或者不离解的弱酸分子等。对于电导检测器,一个重要的条件是温度要稳定,所以检测池要放在恒温箱中,1982年H.萨托设计一种双示差电导检测器,消除了温度变化对检测的影响,可测定10-9摩尔的阴离子。
应用:
离子色谱主要用于测定各种离子的含量,特别适于测定水溶液中低浓度的阴离子,例如饮用水水质分析,高纯水的离子分析,矿泉水、雨水、各种废水和电厂水的分析,纸浆和漂白液的分析,食品分析,生物体液(尿和血等)中的离子测定,以及钢铁工业、环境保护等方面的应用。离子色谱能测定下列类型的离子:有机阴离子、碱金属、碱土金属、重金属、稀土离子和有机酸,以及胺和铵盐等。
『伍』 有关固相萃取填料的离子交换容量
名称: Macro-Prep50系列离子交换填料
详细信息
货号 名称 包装 功能基团 载量mg/ml pH范围 高温消毒 最高流速cm/h
158-0040 Macro-Prep High Q 25ml ―N+(CH3)3 40(BSA) 1~14 可以 3000
156-0040 100 ml ―N+(CH3)3 40(BSA) 1~14 可以 3000
156-0041 500 ml ―N+(CH3)3 40(BSA) 1~14 可以 3000
156-0042 5L ―N+(CH3)3 40(BSA) 1~14 可以 3000
156-0043 10L ―N+(CH3)3 40(BSA) 1~14 可以 3000
158-0020 Macro-Prep DEAE 25 ml ―N+(C2H5)2 35 (BSA) 1~14 可以 3000
156-0020 100 ml ―N+(C2H5)2 35(BSA) 1~14 可以 3000
156-0021 500 ml ―N+(C2H5)2 35(BSA) 1~14 可以 3000
156-0022 5L ―N+(C2H5)2 35(BSA) 1~14 可以 3000
156-0023 10L ―N+(C2H5)2 35(BSA) 1~14 可以 3000
158-0030 Macro-Prep High S 25 ml ―SO3- 70(lgG) 1~14 可以 3000
156-0030 100 ml ―SO3- 70(lgG) 1~14 可以 3000
156-0031 500 ml ―SO3- 70(lgG) 1~14 可以 3000
156-0032 5L ―SO3- 70(lgG) 1~14 可以 3000
156-0033 10L ―SO3- 70(lgG) 1~14 可以 3000
158-0070 Macro-Prep CM 25 ml
―COO- 35 1~14 可以 3000
156-0070 100 ml ―COO- 35
1~14 可以 3000
156-0071 500 ml ―COO- 35
1~14 可以 3000
156-0072 5L ―COO- 35 1~14 可以 3000
156-0073 10L ―COO- 35 1~14 可以 3000
Macro-Prep 50系列:
在低压和中压下操作良好,在不同pH和离子强度时仍具有最小的体积变化。
l.对生物分子具有较高载量
2.对复杂生物混合物具有高分辨率
3.坚硬的多聚物基质,为中压介质中最耐压者,从而流速最高
4.亲水基质减少了非特异结合
5.大孔径增强了离子进入位点
6.化学、机械和热稳定性优异
7.孔径均为50μm
『陆』 离子交换树脂作为药物载体应具备哪些优点
1、高效离子交换色谱 应用离子交换的原理,采用低交换容量的离子交换树脂来分离离子,这在离子色谱中应用最广泛,其主要填料类型为有机离子交换树脂,以苯乙烯二乙烯苯共聚体为骨架,在苯环上引入磺酸基,形成强酸型阳离子交换树脂,引入叔胺基而成季胺型强碱性阴离子交换树脂,此交换树脂具有大孔或薄壳型或多孔表面层型的物理结构,以便于快速达到交换平衡,离子交换树脂耐酸碱可在任何pH范围内使用,易再生处理、使用寿命长,缺点是机械强度差、易溶胀易、受有机物污染。 硅质键合离子交换剂以硅胶为载体,将有离子交换基的有机硅烷与基表面的硅醇基反应,形成化学键合型离子交换剂,其特点是柱效高、交换平衡快、机械强度高,缺点是不耐酸碱、只宜在pH28范围内使用。离子交换色谱是最常用的离子色谱。 2、离子排斥色谱 它主要根据Donnon膜排斥效应,电离组分受排斥不被保留,而弱酸则有一定保留的原理,制成离子排斥色谱主要用于分离有机酸以及无机含氧酸根,如硼酸根碳酸根和硫酸根有机酸等。它主要采用高交换容量的磺化H型阳离子交换树脂为填料以稀盐酸为淋洗液。3、离子对色谱 离子对色谱的固定相为疏水型的中性填料,可用苯乙烯二乙烯苯树脂或十八烷基硅胶(ODS),也有用C8硅胶或CN,固定相流动相由含有所谓对离子试剂和含适量有机溶剂的水溶液组成,对离子是指其电荷与待测离子相反,并能与之生成疏水性离子,对化合物的表面活性剂离子,用于阴离子分离的对离子是烷基胺类如氢氧化四丁基铵氢氧化十六烷基三甲烷等,用于阳离子分离的对离子是烷基磺酸类,如己烷磺酸钠,庚烷磺酸钠等对离子的非极性端亲脂极性端亲水,其CH2键越长则离子对化合物在固定相的保留越强,在极性流动相中,往往加入一些有机溶剂,以加快淋洗速度,此法主要用于疏水性阴离子以及金属络合物的分离,至于其分离机理则有3种不同的假说,反相离子对分配离子交换以及离子相互作用。 二、离子色谱系统IC系统的构成与HPLC相同,仪器由流动相传送部分、分离柱、检测器和数据处理4个部分组成,在需要抑制背景电导的情况下通常还配有MSM或类似抑制器。其主要不同之处是IC的流动相要求耐酸碱腐蚀以及在可与水互溶的有机溶剂(如乙腈、甲醇和丙酮等)中不溶胀的系统。因此,凡是流动相通过的管道、阀门、泵、柱子及接头等均不宜用不锈钢材料,而是用耐酸碱腐蚀的PEEK材料的全塑IC系统。离子色谱的最重要的部件是分离柱。柱管材料应是惰性的,一般均在室温下使用。高效柱和特殊性能分离柱的研制成功,是离子色谱迅速发展的关键。
『柒』 高效液相色谱的原理及使用方法
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。
使用方法:色谱柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的规定.常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用辛基键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用;离子交换填料用于离子交换色谱;凝胶或玻璃微球等,用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外,柱温为室温,检测器为紫外吸收检测器。
在用紫外吸收检测器时,所用流动相应符合紫外分光光度法项下对溶剂的要求。
正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外,其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进 化学键合固定相反应
样量、检测器的灵敏度等,均可适当改变
以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于20分钟内记录完毕。2.系统适用性试验
按各品种项下要求对仪器进行适用性试验,即用规定的对照品对仪器进行试验和调整,应达到规定的要求;或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子.
『捌』 离子层析中nacl能用硫酸铵代替吗
离子层析中nacl能用硫酸铵代替
阴离子交换柱的填料是正电填料,在低盐条件下可以通过电荷相互作用吸附样品中的阴离子和负电荷物质(如DNA).这些带负电的物质由于其带电量不同,分子大小不同,因而与正电填料之间的结合力也就不同.用梯度的氯离子(一般用氯化钠梯度,例如从100mM氯化钠线性梯度升高到1M氯化钠)洗脱挂柱样品时,氯离子会和结合上的物质竞争结合正电填料,伴随着氯离子浓度的不断升高,氯离子的竞争作用越来越强,与填料结合的物质会按照亲和力从弱到强依次洗脱下来,形成独立的洗脱峰,从而将这些物质分开.
阳离子交换柱与之正好相反,柱子填料为负电荷,用钠离子洗脱结合的正电物质.