trishcl过滤除菌对滤膜的要求

A. 微孔滤膜孔径0.22和0.45微米分别能过滤什么主要的微孔滤膜孔径就这两种吗我看网上多数都是这两种

0.45微孔滤膜能过滤微米除颗粒和大多数细菌微生物，0.22微孔滤膜可以达到GMP或者药典规定的除菌99.99%的要求。

其他孔径：

3.0-10.0μm：RO脱盐前之保安过滤；

0.6-0.8μm：大剂量注射液、大输液中的微粒过滤，啤酒、饮料过滤，油类光刻胶、喷漆溶剂等的澄清过滤。

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注意事项：

1、 为保护延长滤膜的使用寿命,可用同等大小的滤纸或绢绸布(应先用质量浓度20 g·L - 1磺酸钠溶液煮沸绢绸布约30 min，然后用注射用水清洗干净)放在滤膜上,防止滤膜破裂。

2、微孔滤膜之孔径为锥体状,光滑的一面孔径小为正面;粗糙的一面孔径大为反面，安装时应将正面(光面)朝上，反面(暗面)朝下，否则易被杂质阻塞孔径,影响滤速。温度低时应将处理好的滤膜放于与药液温度相同的注射用水中浸泡5～10 min，可避免因温差使滤膜抗拉强度降低而导致破裂现象。

3、用作起泡点的测定：测定起泡点压力可以反映微孔滤膜的孔径大小,这与被滤过的药液质量密切相关，也是保证微孔滤膜质量的一种重要手段。

使用的微孔滤膜应事先放在70℃左右的注射用水中浸泡1 h。将水倾出后再用温注射用水浸泡过夜备用。临用时取出用注射用水淋洗干净，即可装入过滤器中使用安装。时防止滤膜装歪泄漏。

4、若发现微孔滤膜有小洞孔或小裂缝时,可用原不用的破滤膜漂洗干净后烘干，然后撕碎放于少量丙酮的小杯中，搅拌成糊状粘液,将此粘液滴于平放滤膜的小洞孔或小裂缝处，不宜过多粘液覆盖而稍大即可，挥干后则可继续使用而不影响。

B. 滤膜标准品是不是指这个滤膜的含量是有标准值的

问：最近要做一些培养基，有一些糖类需要过滤除菌，但不知道怎么操作，还需要什么辅助设备？

答：你只要有滤膜和配套的过滤器就可以了，一般在超净工作台上进行。滤膜用0.22微米或0.45微米两种规格，指的是滤膜的孔径大小吧。一般0.22就够了！

答：如果溶液的量比较大，超过500ml，可以采用已灭菌的抽滤瓶，预先垫好0.22um 的滤膜。抽滤瓶灭菌前要检查封口用纱布或棉花堵牢，使用时，不用在无菌室中进行，只要保证收集瓶无菌状态就可以。抽滤后，过滤好的溶液在无菌条件下倒进已灭菌的空试剂瓶中。

如果用小量的溶液过滤，无菌室内用一次性注射器和一次性0.22um滤膜（millipore或pall都有卖）就可以。

答：看过滤的量，如果量小，用注射器加滤器、0.22微米滤膜过滤，滤器加上滤膜后盖紧，稍旋松，饭盒密封100度蒸馏水煮沸30分钟灭菌，用来承接无菌糖水的瓶需高压。用时在无菌操作台上操作，并先旋紧滤器，注意滤器外流下去的哪怕一滴也会造成染菌；过滤应该是费力的，如果感觉很轻松，则滤膜已破。0.45微米的滤膜一般用于两次过滤的第一次，以防止0.22堵塞。注射器，若能高压更好些。

如果量大，正压可用蠕动泵接皮管接不锈钢滤器大张滤膜，这些都是要高压的。负压可用抽滤。

C. 请问制备培养基时如何过滤除菌

1、灭菌方法
培养基的灭菌方法主要有两种，高压除菌及.22um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可低限度地减少培养基的营养损失。
1.1 高压灭菌

某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。
可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。
1.2 过滤灭菌
可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。一般情况下采取正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。一般使用过滤器可参照各供应商的产品说明书。
目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜滤器（如Zeiss滤器）或立式微孔滤器（Millipore、Pall）除菌。微孔滤膜滤器为不锈钢，中间可夹放0.22um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。如在使用Zeiss滤器时，先要用培养用水将滤膜充分润湿，在安装滤膜时可在其上放置一层定性滤纸再固定。消毒时旋钮不要扭太紧，凡与空气接触部位都要包好（可用牛皮纸、纱布、无纺布等）；高压灭菌后，在无菌环境中立即将旋钮扭紧。过滤除菌结束后，要打开滤器，检查滤膜是否完整，如果滤膜破裂，需重新进行过滤除菌过程。立式微孔滤器可以选用不同的微孔滤柱体积，因为滤膜的折叠，膜面积显著增大，液体处理量大，而且不容易发生堵塞现象。

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E. 过滤除菌操作时，将菌液注入滤器过滤，时间不宜过长，压力控制在多少为宜

控制在200～500mmHg。

过滤除菌法为用物理阻留的方法将液体或空气的细菌除去，以达到无菌目的。所用的器具为含有微小孔径的滤菌器。主要用于血清、毒素、抗生素等不耐热生物制品及空气的除菌。常用的滤菌器有薄膜滤菌器、陶瓷滤菌器、石棉滤菌器、烧结玻璃滤菌器等。

利用滤膜过滤去除细菌的方法。常用的有熔结玻璃细菌滤器、火棉胶、硝化纤维素滤膜等。用最大孔径不超过1nm的过滤器可得到无菌滤液，常用于对热不稳定的物质的除菌。空气或其他气体也可通过棉花或超细纤维膜达到除菌的目的。

过滤除菌法分为绝对过滤和深层过滤。绝对过滤为过滤介质的滤孔小于固体颗粒，把颗粒截留；深层过滤介质滤孔不一定小于固体颗粒，为藉滤层内的曲折通道，把颗粒截留。

当含有微生物颗粒的空气通过滤层时，空气流仅能从纤维间的间隙通过，由于纤维纵横交错，层层叠叠，迫使空气流不断改变运动方向和速度。由于微生物颗粒的惯性大于空气，因而当空气流遇阻而绕道前进时，微生物颗粒未能及时改变它的运动方向，而撞击并被截留于纤维的表面。

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由于黄酒为一种非蒸馏酒，未经处理的原酒中含有大量的浑浊物、胶体物、细菌及其它微生物。为提高黄酒的品质，延长存放时间，必须对黄酒进行过滤灭菌后方可投入市场销售。采用过滤除菌法替代传统的蒸汽灭菌法，由于在较低温度下即可出去大肠杆菌及其它杂菌、悬浮杂质，对降低原材料消耗和生产成本，提高黄酒的品质有着重要的作用。

使用过滤法去除空气中的微生物为一种比较简易的空气消毒方法。虽然经过滤空气尚不易达列完全灭菌，但由过滤处理中一般不使用热力和消毒剂，因此为人们所乐于接受。门前该法已普遍用于建筑物均通风、个人防护和生物制品工业中。

F. 我用tris-hcl溶液提取的样品，问上液相色谱前用有机滤膜过滤还是无机滤膜过滤

保险期间还是用有机膜好，水系膜可以用于不超过10%的有机相过滤。