阴离子交换色谱柱纯化蛋白质

A. 蛋白质纯化技术的方法有哪几种

电泳是蛋白纯化过程中一种检测方式。
主要步骤：
第一步富集：如果是有标签的蛋白，一般用亲和色谱（affinity chromatography）是利用生物大分子间所具有的特异性亲和能力进行富集，然后用咪唑洗脱。要是没有标签的，基本是先超滤浓缩，然后再通过盐析的方式去富集。

第二步初级分离：主要是利用离子交换色谱法，是通过蛋白表面电荷来分离。楼上的说的很清楚。

第三步精细纯化：主要通过分子筛，通过蛋白空间结构和分子量不同来达到分离效果。

B. 设计一个ph稳定范围已知的蛋白分离纯化实验，利用那个类型的离子交换柱

如果不限定纯化方法，可以考虑亲和层析或离子交换，但根据你问题的意思，是选定离内子交换。容
此时就要考虑你蛋白的等电点了，如果等电点在你稳定pH之上，就用阳离子交换柱：
设计阳离子交换层析：将你的样品置换到你所指的稳定pH的running
buffer。同时装柱，平衡，然后上样，平衡，洗脱（因为你的pH不稳定，建议盐洗脱），收峰。得你的蛋白；
如果你的等电点在稳定pH之下，就用阴离子交换柱，其步骤如上，只是改变柱子类型。

C. 离子交换介质的结构

使用离子交换色谱进行细分级分离是较为常见的一种蛋白纯化方式。它是根据蛋白质的电荷不同来分离蛋白质混合物，被分离的目的蛋白所携带的电荷能与离子交换剂中所带的相反电荷相结合，而且这两者之间的结合作用是可逆的，通过逐渐增加离子强度或改变洗脱液PH值的方式处理色谱柱，离子交换剂上结念差合的目的蛋白便可与洗脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液当中。由于不同蛋白质的电荷不同，其与离仔则皮子交换剂的结合能力也不同，所以根据蛋白洗脱到溶液中的先后顺序来进行提取，就可以轻松分离出我们需要的目标蛋白。

离子交换剂的介质种类还可分为离子交换树脂、离子交换纤维素和离子交换凝胶等。强离子交换树脂保持离子化的PH值范围较宽，而弱离子交换树脂若想保持离子化，就只能在很窄的PH值范围内进行处理。离子交换色谱的优点是具有极高的分辨率，因此可以通过放大规模的方式直接应用于工业生产中。盯返根据数据统计结果可知，大多数蛋白质的静电荷是为负值，因此阴离子交换色谱的应用在纯化蛋白领域的最为广泛。选择离子交换介质时，首先要考虑的一点就是目的蛋白的分子大小，因为蛋白分子的大小不但会影响介质上的带电基团，还会影响介质对蛋白分子的动力载量，从而影响分离的效果和速度。

D. deae柱子适合纯化哪些蛋白

DEAE是阴离子交换柱，一般适合于等电点比较低的酸性蛋白。
另外DEAE在结合内毒素上有很好的效果，所以在很多蛋白去除内毒素时可以用到DEAE。

E. 某蛋白质等电点为8.14,如采用离子交换色谱法来纯化,如何选择填料和缓冲体系

我的话，第一步会选择pH7.0-7.4左右过阴离子交换，让大多数杂蛋白（大多数杂蛋白pI在6左右）、核酸、色素等杂质结合，收集流穿液，此时蛋白溶液的纯度和澄清度会大大提高，再校pH7.0或更低pH过阳离子交换进行纯化。讲究一点的话，在缓冲选择上可以区分一下阴阳离子缓冲，多数情况影响不大，不必纠结。

F. 蛋白质分离纯化的四种方法

1、盐析法：

盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。

2、有机溶剂沉淀法：

有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二：其一、与盐溶液一样具有脱水作用；其二、有机溶剂的介电常数比水小，导致溶剂的极性减小。

3、蛋白质沉淀剂：

蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用，常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。

4、聚乙二醇沉淀作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。

(6)阴离子交换色谱柱纯化蛋白质扩展阅读：

蛋白质是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。

机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20% ，即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。

人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸（Amino acid）按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。

G. 蛋白纯化阴离子交换，缓冲液带什么电荷

既然是阴离子交换，就要让目标蛋白带负电，那么缓冲液PH就要大于等电点。缓冲体系的选择也很重要，一般用TRIS-HCl，特别是弱阴离子柱不可选用带负电强的磷酸盐缓冲液，否则上样液中被交换的将是磷酸根而不是目标蛋白。一般用NaCl平衡后上样进行离子交换，然后再用较强的阴离子洗脱。

H. 离子交换层析中流出物质顺序是什么

若用离子交换层析分离物质，以蛋白质为例，离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂；而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。

由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的pH条件下，其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。

反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质，结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。

(8)阴离子交换色谱柱纯化蛋白质扩展阅读：

对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒，以保证有较好的均匀度，对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。

溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理，使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理，使最终转为-OH-型或盐型交换剂；对于阳离子交换剂则用“酸-碱-酸”处理，使最终转为-H-型交换剂。

梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸，会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。