过滤流动相视频

A. 为什么液相色谱实验中流动相和待测样品都需要过滤

因为要过滤掉流动相和待测样品里面的不溶性物质和气泡。防止它们堵住仪器。

很多东专西不是你看着澄清就真属的干净。液相的管路很细，还有色谱柱的孔径也很小，万一堵住了就报废了。所以一定要过滤。
流动相不单要过滤掉不溶物，还有就是气泡。这些气泡可能会堵住泵头，堵住色谱柱，就算哪儿都不会堵上也会导致流速不准确，柱压不稳定，基线波动等等。所以一定要过滤。

你的色谱柱是5um粒径的，用4.5um孔径滤膜就可以了。如果色谱柱粒径更小，那么也应该选择孔径更小的滤膜。

另外，如果你的流动相和待测样品是纯的色谱纯有机相，其实就没必要过滤了。

B. 请问HPLC是做什么的原理操作方法

HPLC是高效液相色谱，英文全称是High Performance Liquid Chromatography。该方法在化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中被用来做重要的分离分析技术。

用途：高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂，抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析等物质的分析。

原理：高效液相色谱以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析和分离。

操作方法：如下图所示，溶剂贮器中的流动相被泵吸入，经梯度控制器按一定的梯度进行混合然后输出，经测其压力和流量，导入进样阀（器）经保护柱、分离柱后到检测器检测，由数据处理设备处理数据或记录仪记录色谱图，馏分收集器收集馏分，废液瓶收集废液。

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液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。

HPLC根据固定相和流动相的成分分为正相色谱和反向色谱。

正相色谱法

采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。

反相色谱法

一般用非极性固定相（如C18、C8)；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。

参考资料：网络-高效液相色谱

C. 液相色谱所用流动相使用时应注意哪些问题

1、流动相恢复到室温后使用。流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定，特别是发生漂移，也容易产生气泡等现象。水与有机溶剂混合时，混合液变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。

2、做HPLC流动相的试剂应用HPLC级的、水应用二次蒸馏水，水相流动相需经常更换，防止长菌变质。使用去离子水、针剂水、纯净水（炊用）并不合适、尤其是做梯度洗脱时，水中的不纯物会成为鬼峰，从而干扰分析结果。

3、流动相的pH值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的。

4、用缓冲盐做流动相时，在使用前和使用后都要用水清洗流路，绝对禁止将缓冲溶液留在流路中静置或更长时间。

5、在更换两种互不相容的流动相时，中间要用异丙醇溶液清洗过渡。例如：先用甲醇水做流动相，然后再用正己烷做流动相时，一定要先用异丙醇溶液冲洗甲醇水，然后用正己烷冲洗异丙醇，反之也是一样。在更换流动相时还要考虑色谱柱是否更换。

D. 高效液相色谱的流动相要经过哪些处理

流动相要先过滤，超声脱气后方可使用。
另外选用试剂是要选用色谱级的专，过滤时选择合属适的滤膜。流动相最好现配现用，不要保存太长时间。
使用旋转蒸发仪上的真空泵 抽空气20min，可以达到脱气的作用。使用滤膜过滤掉杂质。
流动相必须过滤膜，用前要超声除气泡半个小时左右，否则基线不稳
仪器和色谱柱先要用有机溶剂（如乙腈等）好好清洗一下，待基线平衡后才能进一步工作，乙腈和水混合的流动性最好先超声抽滤脱气，准备工作做好了会节省好多时间。
若用色谱纯的乙腈和超纯水做流动相，流动相可以不用过滤膜，但超纯水需要超声约30分钟脱气。

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E. 为什么高效液相色谱仪的流动相在使用前必须过滤，脱气

用于高效液相色谱的流动相必须事先除气，否则容易在系统中逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响色谱柱的分离效率、检测器的灵敏度、基线的稳定性，甚至使其无法检测。

噪音增加，基线不稳定，突然跳跃。此外，溶解在流动相中的氧可以与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）发生反应。溶解气体也会引起溶剂ph值的变化，从而导致分离或分析结果的误差。

常用的除气方法有加热沸腾、抽真空、超声波、吹氦等。

高效液相色谱（hplc）是色谱的一个重要分支。以液体为流动相，高压输液系统，将不同极性的单溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入固定相色谱柱。分离柱中的组分后，用检测器检测。实现了样品的分析。

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液相色谱-质谱联用（LC-MS）可增加额外的分析能力，准确识别和量化细胞和组织裂解物、血液、血浆、尿液和口服液等复杂样品基质中的微量化合物。

流动相和固定相都是液体。流动相与固定相应不相容（极性不同，避免固定液流失），界面清晰。当样品进入色谱柱时，溶质分布在两相之间。达到平衡后，遵循高效液相色谱的计算公式。

公式中cs溶质在固定相的浓度、cm溶质在流动相的浓度、vs固定相的体积和vm流动相的体积。llpc与gpc有相似之处，即分离顺序取决于k值较大的组分的保留值，但也存在差异。在gpc中，流量对k的影响较小，而llpc流量对k的影响较大。

F. 过滤操作的详细过程

过滤操作要求“一贴、二低、三靠”。

一贴

即使滤纸润湿，紧贴漏斗内壁，不残留气泡。（防止气泡减慢过滤速度。）

二低

1、滤纸边缘略低于漏斗边缘。

2、液面低于滤纸边缘。（防止液体过滤不净。）

三靠

1、倾倒时烧杯杯口要紧靠玻璃棒上。

2、玻璃棒下端抵靠在三层滤纸处。

3、漏斗下端长的那侧管口紧靠烧杯内壁。

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注意事项

1、烧杯中的混合物在过滤前应用玻璃棒搅拌，然后进行过滤。

2、过滤后若溶液还显浑浊，应再过滤一次，直到溶液变得透明为止。

3、过滤器中的沉淀的洗涤方法：用烧瓶或滴管向过滤器中加蒸馏水，使水面盖没沉淀物，待溶液全部滤出后，重复2~3次。

4、斗架烧杯玻璃棒，滤纸漏斗角一样：“斗”指漏斗；“架”指漏斗架。这两句点明了过滤操作实验所需要的仪器：漏斗、漏斗架、烧杯、玻璃棒、滤纸，并且强调滤纸折叠的角度要与漏斗的角度一样。

5、过滤之前要静置：意思是说在过滤之前须将液体静置一会儿，使固体和液体充分分离。

6、三靠两低不要忘：意思是说在过滤时不要忘记了三靠两低。“三靠”的意思是指漏斗颈的末端要靠在承接滤液的烧杯壁上，要使玻璃棒的底端靠在滤纸上，盛过滤液的烧杯嘴要靠在玻璃棒上；“两低”的意思是说滤纸边缘应略低于漏斗的边缘，所倒入的滤液的液面应略低于滤纸的边缘。