① 10%新生牛血清的DMEM完全培养配置方法
你培养基买的液体的还是粉状的?如果液体的加10%血清不就行了,如果粉状的要用ddH2O配,配好调PH值,然后0.22uM滤膜过滤除菌,再加10%血清就行了
如果你什么都没有买准备自己配,我就无语了……
② 如何配DMEM培养基
这里是一份GIBCO的低糖DMEM粉剂配制说明(普通高糖的DMEM培养基配法是一样的):
TO PREPARE 1*LIQUID
1. Measrue out 5% less distilled water than desired total volume of medium using a mixing container that is as close to the final volume as possible.
2. Add powdered medium to 15 to 30℃ (room temperature)water with gentle stirring. (Do not heat water)
3. Rinse out inside of package to remove all traces of powder.
4. Add 3.7g of NaHCO3 per liter of medium.
5. Dilute to a desired volume with water. Stir until dissolved. (Do not over-mix)
6. Adjust pH of medium to 0.20.3 below desired final working pH* use of IN NaOH or IN HCl is recommended. (Add slowly with stirring) After pH has been adjuste keep container closed until medium is filtered.
7. Sterilize immediately by membrane filtration. (Positive pressure recommended) *pH unite will usually rise 0.1-0.3upon filtration.
另外,在李玲、李雪峰编著的《细胞生物学实验》中配制方法如下:
1 制备新鲜三蒸水或Millipore超纯水。
2 称取所需量的干粉培养基,加入约终体积一半的三蒸水中;若配制一个包装的培养液,在将整个包装的干粉倒入三蒸水后,需用水洗包装袋内面2次,倒入培养液中,以保证所有干粉都溶解成培养液。磁力搅拌或人工搅拌使之完全溶解。
3 根据包装袋上的要求补加所需量的碳酸氢钠;根据实验需要,添HEPES(5-20mmol/L)、谷氨酰胺和其他特殊物质。
4 加水定容到终体积。
5 必要时用1 mol/L 盐酸和1 mol/L 氢氧化钠调节pH。
6 用无菌0.22um滤膜过滤除菌,分装于无菌血清瓶中,4℃冰箱保存。 配制好的培养液用前加入100U/mL青霉素和100U/mL链霉素,并根据需要加入血清(5%-20%)。
③ DMEM培养液中加血清时过膜的目的是什么
除去污染和杂质,同时过滤膜后可以除菌,因为DMEM不能高压灭菌,对于不能经过高压蒸汽灭菌法灭菌的试剂都需要采用滤膜除菌方法。滤膜分0.22和0.45的,0.45除颗粒和大多数细菌微生物,0.22可以达到GMP或者药典规定的除菌99.99%的要求,希望对你有帮助,望采纳。
④ 20%BSA应该怎么配置
在化学上有二种百分比浓度,一是重量/体积百分浓度,另一种是重量/重量百分浓度,二种配法如下:
一、重量/体积百分浓度:先称取20gBSA用适量水(固液总体积小于100ml,) 完全溶解,冷却后补加水至100ml刻度,搅匀或摇匀。这是最常用的方法。
二、重量/重量百分浓度:先称取20gBSA,再称取用适量水(固液总体积小于100g)完全溶解,冷却后补加水至总重为120g,搅匀或摇匀。
⑤ DMEM培养基为什么要通过0.2um微膜过滤
DMEM培养基中含有大量的不耐高压高温的有机物,无法通过温度来灭菌,只能通过过滤除菌,而过滤除菌通常采用0.2微米孔径的过滤膜过滤。