① 想问一下超滤离心管怎么使用啊还有它能不能重复使用
可以的,先用超声波洗干净,再用高压灭菌锅灭菌后,备用即可
② 超滤离心管放一般的离心机能用么
般的离心机有两种转子,一种是吊篮式的转子,一种是角转子.当然两种都可以用来转超滤管浓缩,不过角转子效率会差很多,就是你离心时间长但浓缩体积还是不大.吊篮转子效率比较高一些.
③ 超滤浓缩离心管使用前要怎么处理
可能不来同厂家的产品保存运输条源件不一样。
如果有甘油等保护剂,那就一定要洗干净再加样品。
干的超滤管也要先润湿再用,否则可能不能完全利用膜面积。
最好,用样品buffer润洗下再加样,最大程度保证蛋白活性。尤其是用过后保存在NaOH或乙醇中后。
一般还是离心机甩一下好,使膜充分浸润。
降低吸附的办法有:
1,蛋白浓度不要过低
2,尽量选用纤维素的低吸附超滤管
3,用前可以用Tween 80等去垢剂润洗(不影响蛋白活性的前提下)
4,加入保护蛋白,如BSA(不影响蛋白后续使用的前提下)
用完保存在20% EtOH中,4C保存,防止长菌,依不同样品可以重复使用不同的次数。
④ 电泳漆超滤设备保养维护方法
电泳漆超滤维护保养
一、操作规范
超滤透过液与进漆液的回流比为1:20~40最大操作压力0.18Mpa正常操作压力0.13Mpa膜最大耐压0.30Mpa最高操作温度<40摄氏度
二、操作注意事项
a)超滤装置一经启用就要尽量减小停机(泵)的次数,每次停机(泵)都要对膜组件进行清洗。
b)尽量避免系统在漆液低流量时运行(当旁路阀门打开或循环泵停止运行时,系统就会处于低流量运行状态)。以防产水量迅速下降。c)注意:超滤装置的所有阀门都要缓慢操作,以避免压力振动损坏超滤膜元件。
d)新超滤膜在使用之前首先应排尽膜管中的保护液,并用净水对膜管进行冲洗,以除去膜的保护液。
e)不允许把膜丝变干,如长时间不用使膜丝变干后,必须用10%~60%的酒精进行浸泡;
f)禁止:决不可在开启超滤系统循环泵时,还没有关闭此泵的出口阀;
三、停机的处理方法(关键性条例,必须依照完成,并填写维护文字记录,否则不予保修)
停机分短期停机(2小时之内),中期停机(2小时-14天),长期停机
(2小时以上),由于停机的长短对超滤膜的影响不一样,因此处理措施也不同。
1.短期停机,停机步骤为
a)慢慢关掉超滤装置漆液进口阀和漆液出口阀。b)停止供漆泵
c)对超滤膜用净水冲冼10分钟,冲洗管道同漆液回流管道一样(如有反冲管路,待正冲完毕后再反冲10分钟)。
d)冲冼完毕后,关闭透过液的阀门使膜管内充满净水(不可使膜成为干膜,如膜变为干膜,需用5%的洒精灌入膜管方可)。
2.中期停机
中期停机首先必须用净水置换出超滤装置中的漆液(即冲洗时间要比短期停机时间要长),然后用去离子水多次清洗装置,直到不含任何漆液为止,最后用去离水充满超滤装置防止膜变干。操作步骤为:a)先用超滤水充满清洗箱,然后执行短期停机的4个步骤。b)打开超滤液去清洗箱的阀门和少半开漆液出口(1/3)
c)启动清洗泵,慢慢打开清洗液进口阀门,打入与膜管内漆液相当体积的净水或超滤水,以便把装置中的漆液排出并使其进入电泳槽中(此项操作的作用为:可使装置中的漆液几乎全部打回到电泳槽内,可避免使排放漆所造成的经济损失及环境污染)。
d)对超滤膜用净水冲冼,冲洗管道同漆液回流管道一样(如有反冲管路,待正冲完毕后再反冲直到清洗液干净为止,最后关闭超滤器漆液
的进出口阀门和透过液的所有阀门,将去纯水【离子水】封存在膜管内)。
3.长期停机
长期停机时,封闭在超滤管中的溶液必须含防腐剂,以防止细菌生长,停机步骤为:
a).首先按短期停机1-4步骤操作,然后按中期停机第4步步骤进行操作。
b).在清洗箱中,用去离子水配制成大约1%的甲醛液。c).好能让这种甲醛溶液在装置内循环30分种。
d).在长期停机后恢复开机前需用大约5%的酒精直接到入超滤侧面的两只口浸泡30分钟(只限外压式膜管)。
四、滤膜元件的化学清洗
1当下列之一发生时需要进行化学清洗:
a.在正常压力下如产品流量下降量达到正常值的10~15%b.为了维持正常的产品流量,给水压力增加了10~15%c.使用压力增加了10~15%2常用清洗方法:
a.用电泳漆的专用溶剂经过配比后利用清洗系统循环3-5分钟清除系统中的物料;
b.再将NaOH配制成5%-10%的浓度,然后循环清洗,此过程应保持0.05M|pa,一般循环10~20分钟,以使溶液充分浸润膜;
⑤ 超滤离心管怎么使用
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。
⑥ 超滤管怎么重复使用
1、携拿森首先用吸头吸取一定量的0.1mol的NaOH清洗滤敏顷膜1-2次。
2、其次用双蒸水冲洗滤膜2-3次。
3、最后将超辩亩滤管浸泡在20%乙醇里直至下次使用即可。
⑦ millipore 超滤管区别
1、装量:0.5ML 4ML 15ML
2、截留分子量3K 10K 30K 50K 100K
⑧ 大家用过的超滤管怎么保存
超滤膜组件的维护(四川禹华环保)要点:
一、短期停机的情况下:停机2-3天以内,请内在膜组件内部充水容的状态下停机;如果达一周左右时,请注入浓度为50mg/L的次氯酸钠溶液;
二、 长期停机的情况下:膜组件要先经过次氯酸钠药洗后,再注入浓度为1.5%的亚硫酸氢钠溶液。
三、置于阴凉处,不能脱水存放;低于零度时要加甘油防冻;