Ⅰ 100kd的膜包超滤的过程可以除掉蛋白核酸吗
不可以。超滤膜包是一种亲水性聚醚砜超滤膜为半透膜,不适用胶黏剂,采用湍流式结构设计,无死体积,无死角,使用方便,回收率高的合适过滤膜组件。根据查询相关资料显示,100kd的膜包超滤的过程不可以除掉蛋白核酸。膜并不是一个刚性的筛子,并不是标定100kD的膜包,就表示所有大于100kD的蛋白就全部被截留,小于100kD的蛋白就全部被透过。
Ⅱ 蛋白在超滤管浓缩过程中出现沉淀怎么办
1、选择合抄适的超滤管,主要考虑袭MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。
注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开
离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
Ⅲ 请问超滤管可以纯化胃蛋白酶消化后的IgG吗。需要F(ab')2片段。
超滤管不建议用复于纯化,适制用于去盐或浓缩,尤其是对于你的这个实验,问题有3点:
1、胃蛋白酶35KD左右,Fab2有90KD,两者的分子量相差不到3倍,你很难选到合适孔径的超滤管能较好分离两者,用分子筛还是可以的;
2、超滤管总体蛋白回收率比纯化技术低;
3、每次超滤,都会有上层滤液残留,无法高效率去除这部分杂蛋白。
以上意见供您参考,祝愉快!
Ⅳ 超滤离心管能分离蛋白和聚乙二醇吗
超滤离心管可以用来分离蛋白和聚乙二醇的
聚乙二醇(PEG)是一种分子量内很小的试剂,而超滤管的容截留分子量一般是在3000道尔顿~10000道尔顿之间。绝大多数蛋白可以被截留在超滤管上层,而聚乙二醇可以穿透滤膜到达超滤管下层
所以超滤离心管可以用来分离蛋白和聚乙二醇的
Ⅳ 蛋白用超滤管浓缩容易沉淀怎么办
可能是抄这个蛋白的水溶性较差,也就是只能保持在一定浓度不能太高
另外就和这个蛋白的稳定性有关了,超滤时保持低温,体积缩小一点后就把滤液混匀避免局部浓度过高,选择更合适的缓冲液,添加一点甘油等小分子物质等都可以增加蛋白的稳定性。
Ⅵ 同一个超滤浓缩管可以用来纯化不同的蛋白吗
不可以的
不管是哪个公司生产超滤浓缩管使用后都会有蛋白残留在滤膜上,而不管是使回用氯化钠或答者氢氧化钠清洗都不能确保可以完全清理掉残留在膜上的蛋白。
如果不同的蛋白间混合使用,可能前一个蛋白会污染到后一个蛋白,甚至有些某些高活性的酶残留在上面会造成后一个蛋白被酶切降解,造成不必要的损失。
Ⅶ 取50ul国产Bradford溶液 ,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白.
先回答你的问题:
Bradford溶液现在自己配也行(其实就是考马斯亮蓝溶液),不过买商品化的也很多,可以买Bradford蛋白定量试剂盒之类的东西。可以用这个试剂检测溶液中蛋白的浓度。如果要自己配,可以参考:http://..com/link?url=7UwTia_b3FPpAaia
在用超滤管的时候,保留在上方的是所需蛋白样品,超滤膜下方收集到的溶液就是流穿液。
这个意思应该是说,如果超滤完全保留蛋白,流穿液中理论是没有蛋白的,所以加入bradford溶液(棕红色)是不应该引起溶液变色的。但是如果有蛋白,会与Bradford溶液反应,变成蓝色。但是也有问题,超滤膜只能保留一定分子量以上的蛋白,如果截留分子量比较大,例如30K或者更大,有一些小的蛋白还是会进到流穿液的,会产生变色反应,而且肉眼观察变色,也没有办法给出具体蛋白的量,可能还是用仪器检测一下比较好。
Ⅷ 超滤浓缩最低浓度
超滤浓缩最低浓度是2毫克每毫升。因为浓缩过快或者过度浓缩会引起蛋白沉淀。蛋白浓缩后最终浓度不超过2毫克每毫升,降低离心速度并改用截留分子量更大的超滤管。
Ⅸ PS中空纤维超滤膜会不会吸附蛋白
1、是否会吸附蛋白抄,这袭个可能性很小,应该超滤膜会截留蛋白,在膜上
截留的蛋白,是截留字 过滤孔里面呢,还是停留膜表面上,这要看您用的 聚砜(ps)膜的亲水性了
如果蛋白渗透到 膜的孔经里面甚至已经到了 膜的支撑层的,膜就很难清洗出来
您问的 是否会吸附蛋白
这个回答起来 文字太多了
如果您有时间,我们可以多交流一下
Ⅹ 化学合成中的透析能用超滤管代替吗
除蛋白中的小分子杂质,不知道选用哪种方法,透析袋... 以及蛋白损失量大(尤其不适合微量的样本溶液),所以目前在很多实验中都被超滤代替