① 提取DNA之前为什么用
提取DNA需要在碱来性条件下的原因如下:源
在酸性条件下,DNA容易被水解,但最不稳定是的嘌呤与脱氧核糖之间的糖苷键.在碱性条件下,RNA由于2'-OH的存在,比DNA要容易水解得多,DNA在碱性条件下相对稳定.
DNA提取方法:
酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)
表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。
碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。
② DNA变性,溶液摩尔浓度至少为多少
变性的本质是这些化合物与DNA之间发生反应或者氢键的重构。
所以理论上只要有这些物质存在,就内会变容性。
但是我们一般是要求DNA完全变性,这就需要一定用量,但DNA含量难以确定,同时为了保证有效,实际用量会大大超出理论。
所以你的问题其实毫无实际意义,参考别人的经验即可。
另外,你不觉得你说 “‘纯’的甲酰胺为‘29.6mol/L’” 前后矛盾么?
③ DNA测序反应中Hi-Di甲酰胺起什么作用
这么会有这么笨的答案?而居然其还被采纳了?太不专业了。。。
甲酰胺是强变性剂,可以打回断碱基间的答氢键,阻止测序PCR产物形成2级结构。2级结构的形成将会通过产物的形态,来改变其迁移速度,使最终的结果出现误差。