纯水低流速冲色谱柱会有什么伤害

1. 纯水是否能通过高效液相色谱柱

看是什么柱子，有一些做糖的柱子就是要求纯水做流动相的。但一般的C8或C18柱子不行，要求最少5%有机相，以防对色谱柱伤害

2. 离子色谱柱能用纯水冲洗吗，这样是否会影响柱子的性能。

按看说明书或咨询色谱柱厂商，防止损害色谱柱，离子柱都不便宜，小心为上。
用纯水短时间内冲洗色谱柱，通常不会对色谱柱造成较大的损伤，但如果长时间用水冲洗色谱柱则
可能引起固定相流失和相塌陷现象，所以若非必要请尽量避免用纯水冲洗色谱柱，建议在水中加入一定
量的甲醇或乙腈进行冲洗，通常水的含量<90%不会对色谱柱造成任何影响。
原因分析：
首先，由于目前所用的色谱柱大多以硅胶为基质，硅胶的溶解特点是在纯水中的溶解度比在含有一
定浓度有机溶剂的流动相中要大得多，所以长时间的用纯水冲洗会导致固定相的流失，引起柱效下降。
其次，对于常规的 C18 柱而言，由于C18 长链与水是不互溶的，C18 长链之间的相互作用力大于
C18 与水分子的作用力，长时间的用水冲洗，使得C18 长链之间相互靠近，水流的冲刷，导致相互联结
的C18 长链倒伏在硅胶基质的表面，对疏水性物质的保留能力下降，即相塌陷。针对用纯水冲洗容易出
现相塌陷的现象，有些厂家推出了纯水柱（如我公司的UltimateTM AQ-C18 柱），这种纯水柱可以用纯
水作流动相而不会产生相塌陷，这对只溶于纯水的样品的分析提供了一个很好的选择。
第三，如使用过含缓冲盐的流动相的色谱柱，用纯水冲洗，并一定能将缓冲盐完全洗去。因为，由
于缓冲盐难溶于有机溶剂，C18 反相柱中用的填料是在硅胶表面上接上许许多多的C18 长链，相当于一
个疏水的有机相，而硅胶基体被有机物质包裹着，所以用纯缓冲盐水溶液做流动相时也许缓冲盐不容易
到达硅胶基质，不至损害基体。但所用的流动相通常会含一部分有机溶剂，而且这些有机溶剂与C18
长链是互溶的，因此有机溶剂的加入增强了流动相渗入硅胶基质的能力，能使部分缓冲盐达到硅胶基质。
同样的道理，用纯水冲洗只能洗掉表面的缓冲盐，而渗入深处的缓冲盐则仍然残留在那里。所以最好在
水中加入部分有机溶剂进行冲洗，一般的C18 柱通常用含水20％～90％都可以，含水的比例要视分析
时使用的流动相来定，原则上，用于冲洗的流动相中水的比例应该等于或高于（缓冲盐用后清洗的情况，
推荐使用“等于”）分析时所用流动相中水的比例。

3. 液相色谱可以用100%水冲吗，我的色谱柱不小心用纯水冲了10分钟左右，然后压力就上不去了，我该怎

如果流动相里本来就有水 短时间内没问题 切成流动相多冲一会儿就没事了

4. 洗柱用水冲的时间长了对色谱柱有没有影响

首先你的柱子是反相柱，最好不要用纯水冲洗柱子，可以用5-10%甲醇水溶液小流速冲洗色谱柱，时间长一点，基本是没有什么大碍的，我们经常过夜冲柱子，最后保存在100%的甲醇里。

5. 柱子堵了,为什么要用低流速冲

因为冲洗的时候可以将柱温略微设高一点，有利于盐溶解，或是先用100%水冲（只能短时间冲，二三十分钟，时间长会损坏柱子），再用含有机相的水冲。如果是长时间走样，样品中的固体小颗粒堵了柱子，也只能反冲了。

有些柱子反冲之后就只能倒过来用了，所以需谨慎，最好打电话咨询下工程师（最好平时使用时加上保护柱，相对于色谱柱，滤芯还是便宜很多的）。

相关知识

作为普通C18柱，尤其是硅胶基质的普通C18柱，对酸碱盐以及水，都是造成柱子的损坏的流动相构成。水不能过多（除了带AQ的纯水柱，一般各家品牌都有这款防水柱）我个人认为只要超过80%的水的流动相，都会造成C18的寿命缩短。所以做高水相的流动相分析时请注意选合适的柱子。

酸对柱子的损伤是不可逆的，一定要控制PH，PH在2以下的都要做好费柱子的准备。碱性条件是对于硅胶基质的C18的弱项，一般的硅胶基质的C18碱性条件都不太耐用，但现在也有碱性PH11的柱子，但比较贵。盐对色谱柱的影响主要是盐析造成的，而且是致命。

以上内容参考：网络--柱子

6. 做液相流速5.0ml/min会冲坏柱子吗

5.0ml/min的流速算是相当大了。一般最高也就是2.0ml/min。不过还要看色谱柱的粒径和流动相。反正是不建议这么大的流速的。就像是水流湍急的河岸泥沙会被水流冲掉一样，填料会加速塌陷的（这个比喻不太恰当）。

当然了，如果真的需要这样的柱流速也不是完全不可以。还要看柱子的柱压力。一般的色谱柱都会有一个上限的压力值。这么说吧，如果是一般的C18色谱柱250mm柱压最好不要超过20MPa，不然寿命就会大大缩短。苯基柱、氨基柱、C8柱子也是一样的。如果你用的是特殊的色谱柱就另当别论了。

7. 色谱柱能否用纯水冲洗冲洗后会有什么样的影响

如果流动相里本来就有水 短时间内没问题 切成流动相多冲一会儿就没事了

8. 液相色谱C18柱堵塞后如何冲洗柱子，能用纯水 冲柱子吗

C18柱子不能用纯抄水冲洗，再说本来就堵了，压力很高应该选择压力低的溶剂。
如果你确定是堵塞了，就用纯乙腈反冲，先用低一点的流速，比如01ml/min，看压力情况，不要超过200bar，再慢慢提高流速，但不要超过1.的流速，如果是真的堵了，可能会压力慢慢降下来的。
如果上面方法不行，那还有可能是盐析堵的，那就用乙腈：水=90：10反冲。

9. 每次使用之后的高效液相色谱柱都要清洗吗，如何冲洗

这个是不是需要清洗的问题，需要看你的流动相是什么。
一般反相色谱，经常会用到缓冲盐。而盐对于色谱柱伤害比较大。如果盐堵在色谱柱里面那柱子就废了。所以需要把它冲掉。最好是每次都冲掉。
如果你的柱子流动相里面没有盐，那就没必要冲洗了。

冲洗方法：反相柱子最好保存在纯甲醇或者纯乙腈里面，但是盐不溶于纯有机相。所以中间过渡甲醇水或者乙腈水。
究竟用什么，要看你的流动相。
比如，我用的是磷酸盐缓冲液-乙腈（70：30）的流动相，那么冲洗的时候最好选用10%-15%乙腈水，冲洗1.0ml/min，至少30min，最好40min。

如果第二天接着使用的话可以不必用纯甲醇或者纯乙腈封存了。如果第二天不用，最好用纯的有机相封上柱子，同样是1.0ml/min流速冲洗30min。

另，也不是说不清洗就会坏。我们研发有的时候为了赶项目，来不及冲洗色谱柱。柱子不会怎么样。就是寿命会短一点而已。

10. 液相色谱法实验前为什么要冲洗色谱柱

转载：《分析测试网络网》

1.色谱柱简介
最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性添充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等）也有使用,正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱；手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。孔径在15nm（1nm=10埃）以下的填料适合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用PH2~8的流动相。当PH大于8时，可使载体硅胶溶解；当PH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用PH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包裹聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等；当需使用PH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。
2.色谱柱的冲洗体积确定
一般情况都是冲洗色谱柱10-20倍柱体积，具体可以这样计算，根据柱内径和柱长算出色谱柱内体积。短柱一般时间就是30分钟、长柱一般冲洗60分钟就可以了。举例：内经为4.6mm、长250mm，其柱内体积=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分钟，折中取15被柱内体积，则冲洗时间就出来了。
3.色谱柱冲洗
冲洗色谱柱最好在分析结束后，用流动相冲洗到基线平稳，然后用10%左右的有机溶剂冲洗色谱柱，主要是冲洗干净流动相中的缓冲盐。然后用100有机溶剂冲洗。最好是梯度变化冲洗。分析物可能为一些能溶解在水中，有些需要用纯溶剂才能完全去除。如果分析时间紧迫一定要把盐分冲洗干净，一般情况不要用纯水冲洗色谱柱，特别是反向柱的填料的键合集团容易折断，对色谱柱造成损伤。色谱柱被使用在某种程度上就是开始被污染了，所以色谱柱的寿命和我们使用的情况有很大的关系。虽然被污染但是对我们分析目标物没有造成影响我们也就是认为还能用。
4.色谱柱维护冲洗
常见故障筛板阻塞，解决办法是：a、过滤流动相；b、过滤样品；c、运用在线过滤或保护柱。
柱头塌陷解决方法是：：a、避免使用PH>8的流动相（针对大部分硅胶的柱子）；b、使用保护柱 ；c、使用预柱（饱和色谱柱）。
前面谈到的不管用什么溶剂一定要加入一定比例的用机溶剂，主要是考虑到一些疏水基团在有机溶剂里面容易伸展利于冲洗其包藏的杂质等。当我们的色谱柱在压力和柱效下降时，我可以拆开泵近端柱头的螺丝取出筛板，清洗筛板以及观察里面的填料，如填料污染严重，就要进行挖取一部分被污染的填料然后用其他废弃的柱子相同填料来填补，用新的筛板或清洗好的筛板拧好螺丝。然后冲洗观察柱压变化和测试柱效等。

5.特殊冲洗 强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰形变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多样品特别是复杂样品而言，很难判断其是否含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈清洗色谱柱。
清洗方法：
1.未使用缓冲盐：每天分析完成后，用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。
2. 使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱 60min。
3.补救方法：
水——乙腈——氯仿（或异丙醇）——乙腈——水
每一步以 1.0ml/min 流速反向冲洗色谱柱 60min。

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