1. 配置depc水时,为什么一定要过夜处理呢,而不是说几个小时后就可以用了呢
主要原因就是为了DEPC能被分解,而不至于残留到耗材上对下游实验有影响,或是对人身健康有危害,因此才会过夜处理的。
DEPC(处理)水是指用DEPC处理过并经高温高压消毒的MiliQ纯水。MiliQ纯水加0.1% DEPC,混匀过夜,121℃,20min。而后DEPC即降解成二氧化碳和酒精,失去毒性。
DEPC是一种有效的核酸酶抑制剂,它能够与很多酶的-NH,-SH或-OH等基团发生反应,从而破坏酶的活性中心。DEPC溶液浓度约为0.1% (v/v)时可使RNase失活,从而防止RNA被降解。在进行RNA实验时,常用DEPC处理实验所用的各种试剂。
(1)depc水处理tip头扩展阅读:
DEPC水可以用于RNA沉淀的溶解,含有RNA的各种反应体系如反转录、siRNA的退火等,以及其它各种要求无RNase、DNAase和proteinase的反应体系。
但是DEPC有刺激性,对眼睛和气道粘膜有强刺激,在操作中应尽量在通风的条件下进行,DEPC毒性并不是很强,但吸入的毒性最强。且通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性,常用于生物实验中RNA的提取等。
2. depc处理水和depc水处理的区别
DEPC处理水是用DEPC(diethyl pyrocarbonate,焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压灭菌的MiliQ纯水。不含杂质RNA、DNA和蛋内白质。
depc水处理是用DEPC对水进行容处理的手段方法。