『壹』 蛋白质的分离纯化技术有哪些
蛋白质的分离纯化方法很多，主要有：
（一）根据蛋白质溶解度不同的分离方法
1、蛋白质的盐析
中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的 SO4 和 NH4)有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失水”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。盐析时若溶液 pH 在蛋白质等电点则效果更好。由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。
影响盐析的因素有：（1）温度：除对温度敏感的蛋白质在低温（4 度）操作外，一般可在室温中进行。一般温度低蛋白质溶介度降低。但有的蛋白质（如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白）在较高的温度（25 度）比 0 度时溶解度低，更容易盐析。（2）pH 值：大多数蛋白质在等电点时在浓盐溶液中的溶介度最低。（3）蛋白质浓度：蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白质地一起沉淀出来（共沉现象）。因此在盐析前血清要加等量生理盐水稀释，使蛋白质含量在 2.5-3.0%。蛋白质盐析常用的中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。 其中应用最多的硫酸铵，它的优点是温度系数小而溶解度大（25 度时饱和溶液为 4.1M，即 767 克/升；0 度时饱和溶解度为 3.9M，即 676 克/升），在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来；另外硫酸铵分段盐析效果也比其他盐好，不易引起蛋白质变性。硫酸铵溶液的 pH 常在 4.5-5.5 之间，当用其他 pH 值进行盐析时，需用硫酸或氨水调节。蛋白质在用盐析沉淀分离后，需要将蛋白质中的盐除去，常用的办法是透析，即把蛋白质溶液装入秀析袋内（常
用的是玻璃纸），用缓冲液进行透析，并不断的更换缓冲液，因透析所需时间较长，所以最好在低温中进行。此外也可用葡萄糖凝胶 G-25 或 G-50 过柱的办法除盐，所用的时间就比较短。
2、等电点沉淀法
蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小，因而溶解度也最小，各种蛋白质的等电点有差别，可利用调节溶液的 pH 达到某一蛋白质的等电点使之沉淀，但此法很少单独使用，可与盐析法结合用。
3、低温有机溶剂沉淀法
用与水可混溶的有机溶剂，甲醇，乙醇或丙酮，可使多数蛋白质溶解度降低并析出，此法分辨力比盐析高，但蛋白质较易变性，应在低温下进行。
（二）根据蛋白质分子大小的差别的分离方法
1、透析与超滤
透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。超滤法是利用高压力或离心力，强使水和其他小的溶质分子通过半透膜，而蛋白质留在膜上，可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质。
2、凝胶过滤法
也称分子排阻层析或分子筛层析，这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶（Sephadex ged）和琼脂糖凝胶（agarose gel）。
（三）根据蛋白质带电性质进行分离
蛋白质在不同 pH 环境中带电性质和电荷数量不同，可将其分开。
1、电泳法
各种蛋白质在同一 pH 条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳，这是利用一种两性电解质作为载体，电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的 pH 梯度，当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时，到达各自等电点的 pH 位置就停止，此法可用于分析和制备各种蛋白质。
2、离子交换层析法
离子交换剂有阳离子交换剂（如：羧甲基纤维素；CM-纤维素）和阴离子交换剂（二乙氨基乙基纤维素；DEAE?FONT FACE="宋体" LANG="ZH-CN">纤维素），当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时，带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上，随后用改变 pH 或离子强度办法将吸附的蛋白质洗脱下来。
（四）根据配体特异性的分离方法－亲和色谱法
亲和层析法（aflinity chromatography）是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand）的分子能特异而非共价地结合。其基本原理：蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在，每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质，因此蛋白质的分离（Separation），提纯（Purification）和鉴定（Characterization）是生物化学中的重要的一部分，至今还没的单独或一套现成的方法能移把任何一种蛋白质
从复杂的混合蛋白质中提取出来，因此往往采取几种方法联合使用。
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『贰』 离子交换层析可用于哪些种类蛋白质的分离
离子交换层析是利用蛋白质在不同PH带不同种电荷的方法，利用离子交换的方法分离专蛋白的。
离子交换属内的介质一般是树脂，阳离子交换型的，使用前树脂先用碱处理成钠型，将氨基酸混合液（pH=2-3)上柱，pH=2-3时，氨基酸主要以阳离子形式存在，与树脂上的钠离子发生交换而被“挂”在树脂上，再用洗脱剂洗脱。不同的氨基酸（带的电荷不同）与树脂的亲和力不同，要将其分离洗脱下来，需要降低它们之间的亲和力，方法是逐步提高洗脱剂的pH和盐浓度，这样各种氨基酸将以不同的速度被洗脱下来，反之亦然。
不同反荷离子与树脂亲和力是不同的，其强弱关系为阳性竞争离子：Ag+〉CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+ 阴性竞争离子：I->NO3->(PO4)3->CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F- 如果某种离子溶液洗脱效果不好，可用另一种亲和力强的离子代替之，等电点＞7选择阳离子交换树脂，等电点＜7选择阴离子交换树脂。
『叁』 使用分子筛纯化蛋白后发现收率较低，是什么原因
1.蛋白可能被蛋白酶降解。可以在样品和缓冲液中加入蛋白酶抑制剂，阻止蛋白酶降解作用
2.样品制备过程中可能吸附在滤器上，更换吸附性更低的滤器材质
3.样品沉淀，可能由于盐或不合适的缓冲液条件引起
4.疏水蛋白，可以酌情采用去污剂、降低极性的试剂和去污剂
5.非特异性吸附，可以通过降低盐离子浓度最小化疏水相互作用，增加pH，加入适量去污剂或有机溶剂
『肆』 蛋白分离纯化所使用的填料有哪些
从方法上来讲，主要是亲和层析、离子交换、分子排阻（分子筛）、疏水层析和反相层析这5种；但具体到每个实验，就会根据您的实验目的（蛋白的纯度、活性、量产以及用途的不同），以及蛋白本身的性质不同（真核或原核、水溶性、稳定性、有无修饰、理化性质等），来设计合理的纯化方法，进而选择不同类型、分辨率和性价比的填料。
一般科研实验室，有限考虑亲和层析填料，若有更高的纯度要求，再考虑不同分辨率的离子交换或分子筛填料。
蛋白纯化，GE的填料是最丰富，也是最稳定的，你可以参考最新的GE 凝胶选择指南。
如，我在文库钟搜的2014版的：
http://wenku..com/link?url=XIgERGPVdEqYRPs-_IG_-
『伍』 deat-纤维素离子交换层析法可用于分离纯化蛋白质,主要是由于a...
DEAT-纤维素离子交换层析法主要用于分离纯化蛋白质，这主要得益于其独特的分子筛分能力和离子交换机制。
一、DEAT-纤维素离子交换层析法的基本原理
DEAT-纤维素离子交换层析法是一种基于离子交换原理的分离纯化技术。在层析过程中，蛋白质在流动相和固定相之间的分布取决于蛋白质的电荷特性和大小。纤维素作为固定相，其表面的离子交换基团能与蛋白质分子上的电荷进行作用，从而实现蛋白质的分离。
二、分子筛分能力在蛋白质分离中的应用
DEAT-纤维素层析介质具有特定的孔径和表面性质，这些特性使得它可以根据蛋白质分子的大小和形状进行筛分。不同大小的蛋白质分子在通过层析柱时，会受到不同程度的阻力，从而实现了不同蛋白质的分离。
三、离子交换机制的作用
离子交换层析中的离子交换过程是关键。纤维素介质上的离子交换基团能够与蛋白质表面的电荷进行选择性结合。这种结合力的大小取决于蛋白质所带电荷的多少和性质，因此不同性质的蛋白质会以不同的速度在层析柱中被分离。
四、DEAT-纤维素离子交换层析法的优势
该方法具有分离效果好、分辨率高、操作简便等优点。此外，由于纤维素介质的生物相容性，该方法在蛋白质分离纯化中具有良好的应用前景。在生物医药、生物工程等领域中，DEAT-纤维素离子交换层析法已成为一种重要的蛋白质分离纯化手段。
综上所述，DEAT-纤维素离子交换层析法通过其分子筛分能力和离子交换机制，实现了对蛋白质的有效分离和纯化。其在生物医药和生物工程领域的应用前景广阔。