蓝莓花色素树脂法分离纯化

㈠ 植物多糖一般都是什么颜色的

一、植物多糖的提取

1 溶剂提取法

1．1 水提法

水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出，有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。

1．2酸碱提法

有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。

有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。采用的稀碱多位为0．1mol／L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。

1．4 生物酶提取法

酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。

1．5 超声提取法

超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。另外，超声波的热效应使水温基本在57℃，对原料有水浴作用。超声波提取与传统的提取消锋方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。超声提取的影响因素有：超声时间、超声频率（一般低频中提取效率高，但也有例外）、料液比和温度等。

1．6 微波提取

微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能 细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。微波技术应用于植物细胞破壁，有效地提高了收率。具有穿透力强、选择性高、加热效率高等特点。影响微波浸提的主要因素为浸提时间、样品和提取溶剂的含水量，溶剂的介电常数和电导率（介电常数和电导率的溶剂对微波的吸收较好）、微波功率等。但是由于微波泄漏对操作兄桥液者影响很大，因而对设备的要求较高，这对微波的研究及应用带来了一定的困难。

二、植物多糖的分离纯化

在多糖提取物中，常会有无机盐、蛋白质、色素及小分子物质等杂质，必须分别除去．一般是先脱除非多糖组分，再对多糖组分进行分级．

2．1 除蛋白

除蛋白质时一般选择能使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的试剂来处理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。但必须处理时间短，温度低，避免多糖降解。Sevage法（氯仿：戊醇/丁醇=4：1）和三氟三氯乙烷法在避免降解上有较好效果但要达到除尽游离蛋白质的目的仍需反复处理。如能加入蛋白质水解酶，使羡物蛋白质大分子进行一定程度的降解，再用Sevage法处理，一般效果更好。

为了避免使用有机溶剂也可采用反复冻融的方法除蛋白，将多糖液浓缩后，一20℃室温反复冻融7～8次，离心除去蛋白质。另外，蛋白质在等电点时溶解度最小，用氢氧化钙饱和液调pH10～pH11可除去偏碱性的蛋白质，然后再用硫酸调pH5～pH6，可除去偏酸性的蛋白质。冻融和等电点沉淀除蛋白质操作简单，但多糖液里往往有低浓度的蛋白质残留，应与其它方法结合使用。

2．2 脱色

植物多糖提取物中含有酚类化合物而使其颜色较深，可用吸附剂(纤维素、硅藻土、活性炭等)、离子交换柱(DEAE一纤维素)、氧化剂(H2O2)等脱除。活性炭比表面积大，吸附能力强，在进行当归多糖的提取时只向多糖液中加入了0．1％左右的活性炭，煮沸后滤过即完成了脱色操作。此法成本低廉，适合工业化生产。

2．3 除小分子杂质

小分子杂质如低聚寡糖的残留往往影响多糖的生物活性，需要进一步脱除，提高纯度。传统的方法是透析法，该法操作简单、技术成熟，但周期长，往往需要2一3天，常温下操作有可能造成多糖的霉变，必要时需加入少量防腐剂或需在低温条件下进行。随着膜分离技术的发展，纤维滤器透析法已经发展起来了，它利用不同孔径的膜使大小不同的分子分级，这种方式可缩短生产周期，而且条件温和，无疑是多糖脱除杂质的一条新途径。

2．4 多糖的分级纯化

采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．

2．4．1按溶解性不同分离

2.4.1.1分步沉淀法

分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．

2.4.1.2 盐析法

盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。常用的盐析剂有氯化钠、氯化钾、硫酸铵等，其中以硫酸铵最佳。

2.4.2 按电离性质不同分离

2.4.2.1季胺盐沉淀法

季胺氢氧化物是一类乳化剂，能与酸性多糖形成不溶性化合物季铵络合物，此络合物在低离子强度的水溶液中不溶解而产生沉淀。若提高多糖液pH值或加入硼砂缓冲液，也可使中性多糖沉淀分离。常用季铵盐有十六烷基三甲基季铵盐的溴化物及其氢氧化物和十六烷基吡啶。

2．4．3 柱层析法

2.4.3.1凝胶柱层析法

凝胶柱层析法常用的凝胶有葡聚糖凝胶(Sephadex)和琼脂糖凝胶(Sepharose)，以不同浓度的盐溶液和缓冲溶液作为洗脱剂，从而使不同大小的多糖分子得到分离纯化，但不适宜粘多糖的分离。

2.4.3.2纤维素阴离子交换剂柱层析法

纤维素阴离子交换剂柱层析法常用的交换剂为DEAE一纤维素和ECTEOLA一纤维素，分类硼砂型和碱型两种，洗脱剂可用不同浓度碱溶液、硼砂溶液、盐溶液，其优点可吸附杂质、纯化多糖，并适用于分离各种酸性、中性多糖和粘多糖。如百合多糖、北沙参多糖、太子参多糖等。

2.4.3.3 活性炭柱层析法

活性炭吸附量大、效率高，是分离水溶性物质的常用吸附剂。柱层析时活性炭中常拌入等量的硅藻土作稀释剂，以增加溶液的流速。糖溶液上柱后先用水洗脱无机盐、单糖等再依次增加乙醇浓度进行洗脱。

2.4.3.4 离子交换柱层析和普通凝胶柱层析联用法

有些植物的多糖成分复杂， 除中性多糖外，还含有糖醛酸等，因此往往两种不同性质的色谱柱联用才能得到单一多糖组分。

2.4.3.5 三种层析柱联用

采用离子交换葡聚糖凝胶柱、丙烯葡聚糖凝胶柱和葡聚糖凝胶柱三者联用，即先进行DEAE—SephadexA柱层析，用蒸馏水洗脱。水洗组分进一步用SephacrylS柱层析，得到主要组分再用SephadexG一100柱层析，有时会有较高的得率。

三、多糖的纯度鉴定

经过分级纯化的多糖在测定结构前须进行纯度鉴定．而且多糖的纯度不能用通常化合物的纯度标准来衡量，因为即便是多糖纯品，其微观也并不均一，仅代表相似链长的多糖分子的平均分布，通常所谓的多糖纯品也只是一定相对分子质量范围的多糖的均一组分．目前常用于多糖纯度的鉴定方法有：高效液相、 凝胶层析法、电泳法、色谱法、旋光度法等．

四、常见问题

多糖制备过程中蛋白质的脱除是目前分离纯化多糖的难点。Sevag法需要消耗大量的有机溶剂，且操作烦琐；三氟三氯乙烷的沸点较低(bp56℃)易挥发，不宜大量应用；三氯乙酸可引起多糖的降解，从而影响其生理活性；酶价格昂贵，不适合工业化生产。可以借鉴其它蛋白质脱除的方法，例如用天然澄清剂能简化提取工艺，提高多糖纯度。 脱色也是多糖提取纯化过程中面临的一个难题。活性炭会吸附多糖而造成多糖的损失；H2O2氧化脱色容易引起有些多糖的降解。

㈡ 如何提取花青素

花青素，是一种热敏性活性物质。属于水溶性多酚黄酮类化合物，其特殊的结构和化学成分赋予了花青素多种生物活性，这些活性物质对温度较为敏感，当所在环境温度超过一定界限后，就会失活，也就是我们俗话说的死掉。（比如我们都知道，乳酸菌、益生菌等都属于热敏性活性物质，不能加热，否则失去活性就会失去其主要作用。）花青素失活就会失去其特有的功效作用。
有机溶剂萃取法
这是目前国内外最广泛使用的提取方法。多数选择甲醇、乙酮、丙酮等混合溶剂对材料进行溶解过滤，通过调节溶液酸碱度萃取滤液中的花青素。国内吴信子等用盐酸一甲醇溶液提取，然后用纸层析法(中号)和柱层析法(聚乙酰胺)进行花色苷的分离 。目前，有机溶剂萃取法已成功地应用于诸如葡萄籽、石榴皮、蓝莓等绝大多数含花青素物质的提取分离。有机溶剂萃取法的关键是选择有效溶剂，要求既要对被提取的有效成分有较大溶解度，又要避免大量杂质的溶解。该方法原理简单，对设备要求较低，不足之处是大多数有机溶剂毒副作用大且产物提取率低。
2水溶液提取法
有机溶剂萃取的花青素多有毒性残留且生产过程环境污染大，有鉴于此，水溶液提取应运而生。该方法一般将植物材料在常压或高压下用热水浸泡，然后用非极性大孔树脂吸附；或直接使用脱氧热水提取，再采用超滤或反渗透，浓缩得到粗提物。它是Duncan和Gilmour(1998)发明的提取花青素的方法 ，此方法设备要求简单，但产品纯度低。
3超临界流体萃取法
超临界流体萃取是利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响进行提取。这种方法产品提取率高，但设备成本过高。孙传经 采用超临界CO：萃取法从银杏叶、黑加仑籽及葡萄籽中提取花青素工艺进行了研究。该工艺中CO 和改性剂可循环使用，对环境无污染。

㈢ 黄酮类化合物的提取方法有哪些

1、醇提取法

黄酮类化合物提取最常用一种方法，常用的有机溶剂主要有乙醇、乙醚、甲醇和乙酸乙酯等，其中乙醇是最常用的。

2、微波提取法

微波提取技术又称微波萃取技术，其最大的优点是耗能耗材少、无污染，尤其对特定的药材提取具有高选择性。

3、超临界萃取技术

超临界萃取是一种较广泛使用的药物提取、分离手段，其最大的优点是无有机溶剂残留，保证了提取成分的100%纯天然。

4、酶解法

酶解法是一种较好的辅助提取方法。酶具有高度的选择性，因此对不同提取材料，选择合适的酶对提取率影响较大。

5、膜分离提取法

膜分离技术也是一种常用的辅助提取技术，其中超滤法作为唯一能用于分子级别的分离方法广泛的应用于黄酮类化合物的提取分离。利用超滤技术分离纯化黄酮化合物最大的优点是操作简便、无需加热、不破坏活性成分的结构，纯化和浓缩一步完成，超滤装置还可反复使用。

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黄酮类化合物的颜色与分子中存在的交叉共轭体系及助色团（-OH）等的类型、数目及取代位置有关。一般来说，黄酮、黄酮醇及其苷类多呈灰黄至黄色，查尔酮为黄色至橙黄色，而二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮类等因不存在共轭体系或共轭很少，故不显色。

花色素及其苷元的颜色，因pH的不同而变，一般呈红（pH<7）、紫（7<8.5）、蓝（PH>8.5）等颜色。

黄酮苷元一般难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂，易溶于稀碱液。黄酮类化合物的羟基糖苷化后，水溶性相应加大，而在有机溶剂中的溶解度相应减少。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、吡啶等溶剂，难溶于乙醚、三氯甲烷、苯等有机溶剂。

黄酮类化合物因分子中多有酚羟基而呈酸性，故可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。有些黄酮类化合物在紫外光（254nm或365nm）下呈不同颜色的荧光，氨蒸汽或碳酸钠溶液处理后荧光更为明显。多数黄酮类化合物可与铝盐、镁盐、铅盐或锆盐生成有色的络合物

㈣ 含花青素多的蔬菜和水果是哪些

一、含花青素多的蔬菜

1、茄子

茄子皮的紫色来源于花青素及其糖苷，带皮吃茄子就会令花青素得以保存。茄子还富含维生素P，这种物质能增强人体细胞间的黏着力，增强毛细血管的弹性，减低毛细血管的脆性及渗透性，防止微血管破裂出血，使心血管保持正常的功能。

2、紫甘蓝

紫甘蓝是天然减肥餐的代名词，富含花青素和各类维生素和矿物质，纤维素更是没的说。花青素具有很好的抗氧化作用，是纯天然的抗衰老营养补充剂，对高血压患者也很有益。想要瘦身快又不缺营养，多吃紫甘蓝绝不会错。

3、紫色洋葱

紫色洋葱花青素含量虽说不是最丰富，却有很好的增强细胞活力的作用。洋葱是含有前列腺素A的食物，能扩张血管、改善血液粘度，降血压、能减少外周血管和改善冠状动脉的血流量，有预防血栓形成作用。硒元素配上花青素，能促进钠盐排泄，龄血液恢复年轻态。

二、含花青素多的水果

1、黑桑葚

微甜多汁的桑葚，从唐朝就已经是宫廷御用补品了，就是因为其中含有丰富的花青素带来抗氧化功效。黑桑葚除了含有丰富的花青素以外，还含有丰富的活性维生素、氨基酸、白藜芦醇等成分。

2、蓝莓

蓝莓是花青素王国当之无愧的皇后，是已经证实的含有花青素最多的水果。蓝莓中富含大量超抗氧化物——OPC花青素，常吃可以让你眼睛明亮、皮肤紧致。蓝莓中的深蓝色色素含有能够促进血液流入大脑的化学元素，有补充头脑活力的作用。

3、杨梅

杨梅味道很酸，含有很多的植物酸，PH也比较低，花青素在这种环境中呈现出紫黑色，杨梅在成熟之后花青素的含量也很高。

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花青素的作用：

1、抗癌症花青素能够有效清除人体自由基，长期口服适量的花青素，能够起到预防癌症的作用。

2、抗氧化花青素对人体而言，是一种很强的抗氧化剂，对人体的衰老有逐步预防和缓解的作用，蓝莓许多抗氧化生化活性都可与左旋维他命C相提并论，天然蓝莓萃取精华花青素的抗氧化性甚至能比维生素E高出50倍，比维生素C高出20倍。

3、改善睡眠花青素具有深入细胞保护细胞膜不被自由基氧化的作用，具有强力抗氧化和抗过敏功能，能穿越血脑屏障，可保护脑神经不被氧化，能稳定脑组织功能，保护大脑不受有害化学物质和毒素的伤害。

4、修复肌肤花青素通过对弹性蛋白酶和胶原蛋白酶的抑制使皮肤变得光滑而富有弹性，从内部和外部同时防止由于过度日晒所导致的皮肤损伤等等。

㈤ 哪些食物含青花素

OPC是一种效力最强的纯天然黄酮类物质，学名为原青花素低聚物。大多从葡萄籽中提取出来，是目前所知的最高效抗氧化的自由基清除剂。

原花青素的几种提取方法

原花青素是植物中广泛存在的一大类多酚类化合物的总称，具有多种生物活性，以其高效、低毒、高生物利用度而著称，是保健食品中使用较多的原料之一。国内使用的原花青素主要来源于葡萄籽，国外还有从葡萄籽、松树皮中提取的。

原花青素的提取方法主要有以下几种：

1、溶剂提取：研究者将葡萄籽脱脂后，采用乙醇、丙酮或水作为溶剂，再用乙酸乙酯或正丁醇萃取分离粗提物，也可用大孔树脂对粗提物进行分级分离，得到成品。

2、超临界CO2萃取法：利用临界温度状态下，CO2能溶解多种物质的特点，以高压下的高密度超临界流涕为溶剂萃取所需组分，然后采用升温、降压及吸附等手段将溶剂与所萃取的组分分离。

3、微波法：可使分子做高速变换运动，从而产生键的震动，同时产生大量热能，促使细胞破裂，使有效成分扩散至溶剂中。

以上几种方法，目前大孔树脂分离纯化法使用最为普遍。
松树、柏树、银杏、红杉、云杉，可以提取出青花素，野生全松茶是从松树、柏树、银杏、红杉、云杉五种寿命超过千年的树种的树皮和树叶中提取的一种活性物质，含有青花素！
其实自己也不是很懂，检索了一点，说的不好请见谅！

㈥ 如何提取花青素

花青素，又称花色素，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，是花色苷水解而得的有颜色的苷元，水果、蔬菜、花卉中的主要呈色物质大部分与之有关，在植物细胞液泡不同的ph值条件下，花青素使花瓣呈现五彩缤纷的颜色，已知花青素有20多种，食物中重要的有6种，即天竺葵色素、矢车菊色素、飞燕草色素、芍药色素、牵牛花色素和锦葵色素，自然状态的花青素都以糖苷形式存在，称为花色苷，很少有游离的花青素存在，随着科技的发展,人们对口服饮料的安全性越来越重视，天然材料的开发利用已成为口服饮料发展使用的总趋势，而花青素作为营养强化剂，在口服饮料中的应用也越来越广泛。

花青素属于生物类黄酮物质，而黄酮物质最主要的生理活性功能是自由基清除能力和抗氧化能力，在口服饮料中花青素作为营养强化剂，受到广泛使用，现有的提取花青素的原料中，花青素的含量有限，花费大量的原料只能提取少量的花青素，这不但增加了花青素的提取成本还严重影响了花青素的产量，现有的花青素产量已经不能满足口服饮料对花青素的需求。

提取方法：

步骤一：花瓣打碎，先使用流动水对重瓣红玫瑰花进行清洗，然后将清洗后的重瓣红玫瑰花放入打碎机中进行打碎；

步骤二：萃取，向打碎机中添加蔗糖，然后使用打碎机继续对重瓣红玫瑰花进行打碎，当蔗糖完全溶解后得到混合溶液；

步骤三：过滤，对混合溶液进行过滤，过滤可以得到固体和溶液，得到的溶液即为花青素半成品；

步骤四：防腐处理，先在花青素半成品中添加柠檬酸，然后再对花青素半成品进行巴氏杀菌，得到花青素成品；

步骤五：包装，将花青素成品装入包装桶中，并将其放入仓库。

以上所述重瓣红玫瑰花为刚采摘下来的新鲜重瓣红玫瑰花花瓣。