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超滤膜除蛋白

发布时间:2020-12-15 16:54:38

A. 利用超滤处理蛋白质溶液时,通常选择亲水性膜材料,其机理是什么

首先,蛋白质、核酸等生物分子通常能溶于水,不兼容有机溶剂

如果用疏水内性的膜,首先容水是不能通过膜的,如果样品还有水,就会在膜的表面形成一层水膜,不能正常过滤或超滤;因此采用亲水性的膜材料。

当然并不是所有亲水性膜都可以用作超滤膜,这个和膜的化学兼容性和生物吸附性能有关。

PALL公司是目前做超滤系统和超滤膜世界上最大的公司,如有购买意向,可联系PALL公司。

B. 利用截留相对分子质量MMCO=100000的超滤膜错流超滤分离发酵清液中的蛋白质,过滤操作采用开路循环方式

额,题出的很没水平,压力,温度,物料特性都不给出,就能做估算,牛逼啊!内按照白痴出题人的容思路,截留蛋白不考虑透过,透过的只是杂蛋白质,透过量是0.5ML/s,起始浓度已知,终点浓度也可以算出来,积分就可以了。

C. 请问用Vivaspin超滤完蛋白质水解液之后应该怎么处理才能恢复其超滤能力(其中的超滤膜不能更换)

很难,一般蛋白多肽类物质可以用1N NAOH处理,不过VIVASPIN的外壳是聚碳酸酯材料,对极性酸碱都不耐受,不过还是欢迎你来电探讨这个问题,我们上海摩速科学器材有限公司是SARTORIUS产品的一级代理021-56902220,VIVASPIN是SARTORIUS的超滤离心管

D. PS中空纤维超滤膜会不会吸附蛋白

1、是否会吸附蛋白抄,这袭个可能性很小,应该超滤膜会截留蛋白,在膜上
截留的蛋白,是截留字 过滤孔里面呢,还是停留膜表面上,这要看您用的 聚砜(ps)膜的亲水性了
如果蛋白渗透到 膜的孔经里面甚至已经到了 膜的支撑层的,膜就很难清洗出来
您问的 是否会吸附蛋白
这个回答起来 文字太多了
如果您有时间,我们可以多交流一下

E. 蛋白在超滤管浓缩过程中出现沉淀怎么办

1、选择合抄适的超滤管,主要考虑袭MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。

2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。

3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。

注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开
离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。

F. 超滤离心管怎么使用

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。

G. 超滤浓缩蛋白溶液时其浓度该从高到低还是有低到高对超滤膜好呢

从低到高,当然首先3瓶中蛋白分子量应该差不多,否则先超滤小分子的,主要是减少超滤膜的堵塞程度

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