每克葡萄糖超濾如何計算

1. 請問什麼是活性的超氧化物歧化酶，人工是如何製造出來的

超氧化物歧化酶(SOD) 超濾法生產新工藝

前 言

SOD的中文名稱是超氧化物歧化酶，其英文名為Superoxide dimutase，分子量(牛血紅細胞) 約 32000 是廣泛存在生物體內的金屬蛋白醇 ， 別名有 ： orgotein，ormetein，ontosein； Cu.Zn-SOD；Palosein等，SOD被科學家譽為21世紀最有發展前途的葯用酶。

一、本工藝是從紅細胞，肝和其它哺乳動物組織分離而得的金屬酶；含兩個亞基，每個亞基各含一個銅原子和一個鋅原子，SOD可催化O2，歧化為H2O和O2， 其性質不僅僅取決於酶蛋白，而且還取決於活性部位的金屬離子，按金屬離子類型不同， 可分為Cu.Zn--SOD和Fe--SOD，Mn--SOD三種.在一般條件下，SOD較穩定. 不同來源的 Cu.Zn--SOD，其紫外吸收光譜略有差異，如牛血SOD在258nm處顯示最大吸收，而豬血SOD的最大吸收峰為265nm，在特定條件下，酶的活性可下降，甚至完全喪失， 如氰化物可抑制SOD活性，雙氧水使SOD活性下降，氯化胍能明顯抑制SOD活性等。

二、SOD用途主要是基於SOD是超氧陰離子清除劑，超氧陰離子(O2~)是人體內有毒物質，它能引起多種疾病，故能清除炎症過程中伴同產生的超氧離子， 而顯示出強大的抗炎作用。

在醫葯工業：SOD可以治療由於超氧離子引起的各種疾病，如糖尿病，白內障， 風濕性關節炎等，也是消炎的有效葯物，而且還能抗衰老，抗腫瘤，抗輻射， 抗自身免疫疾病，現代研究表明：SOD還能治高血壓，冠心病，膽囊炎，肺氣腫等難治之症. 日用化學工業：由於SOD有防止細胞老化和解毒等功效， 因此在化妝品和護膚劑等工業產品中，添加SOD之後，具有防曬，祛斑，使皮膚柔嫩的作用.是目前化妝品行業中不可缺少的一種添加劑，國內及同行都已出現大量產品.食品工業：在食品添加劑加 SOD之後，增強營養，解除毒性，延長體內細胞壽命，國內已有SOD營養液產品， 並通過上海科研單位有關專家的鑒定。

三、SOD的開發前景：目前SOD在全國僅有少數科研單位及生化制葯廠研究和開發本產品，而使用SOD產品廠家卻日益增多，遠不能滿足市場需求 . 為鼓勵和大力開發SOD新產品，國家已將其列入重點科技開發項目，並投放大批經費，現已獲得成功， 開始向企業化生產轉移，市場前景十分廣闊。

四、注意事項：(1)我中心熱忱歡迎社會各界朋友現場學習，由生化工程師向您授課，通過現場操作，指導，培訓，使您盡快掌握該技術。(2)本工藝， 技術資料等不經我公司同意，不得擅自轉讓，翻印，銷售給任何單位和個人，違者法律追究。

新法提煉技術

一、主要設備：(1)工業用離心機一台；(2)恆溫水浴鍋(10L--50L)(可自製)1台；(3)冰櫃1台；(4)攪拌機1台；(5)玻璃器皿：1000ml，500ml燒杯各3隻，50ml燒杯 2 只，50ml，500ml量杯各1個；(6)塑料桶若干個。

二、主要試劑：(工業純度)檸檬酸鈉，檸檬酸，葡萄糖，乙醇90%，氯仿，丙酮，氯化鈉，磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉，去離子水或蒸餾水，葡萄糖凝酸膠SephadexG-- 100 和DEAE--纖維素.

三、試劑的配製：

1.抗凝劑配方：(1)檸檬酸鈉30g，檸檬酸10g葡萄糖 25g加水至1升，一般此種是每7ml血液，加1ml(抗凝劑).(2)40g/升檸檬酸鈉溶液：在1升水中加入0.9克的氯化鈉。

2.生理鹽水：(0.9%)在91克水中加入0.9克的氯化鈉。

3.磷酸鹽緩沖溶液的配製：PH7.6，0.2M磷酸鹽緩沖溶液，一般用Na2HPO4.H2O，35. 61 克 / 升和NaH2PO4.2H2O 31.21克/升，前者加87.0ml，後者加13.0ml混合後即為PH=7.6 緩沖溶液，如果用K2HPO4.3H2O為45.644g/升，NaH2PO4.2H2O為31.21克/升，仍是前者87.0ml，後者13.0ml混合後即得。

4.冷卻劑：在本工藝中有使用-15度低溫，一般用如下配方：用33克食鹽加入100克雪或碎冰，以此比例配成混合體可達-21.3度。

四、工藝流程

(一)除血紅蛋白

1.血液抗凝處理，在新鮮牛、馬、豬血中迅速加入ACD1號抗凝劑，並緩慢攪勻，每7毫升血液中加入抗凝劑1毫升或2號抗凝劑。

2.把抗凝處理的血液放入離心機，以3000r/min離心約15--20分鍾， 用吸管把上清液(黃色血清)小心吸去拋掉，下層的紅血球用2--3倍生理鹽水洗2--3次，在每一次洗滌中，用離心機以3000r/min離心，7--8分鍾，反復操作後，得到洗滌血紅細胞，洗滌後的血紅細胞在-15度下冷凍可保存半年並不影響產率和比活，在血液量大， 處理不完時必須這樣做。

3.在洗凈的紅血球中加入等體積去離子水，劇烈攪拌30分鍾，使紅血球細胞壁砍碎，以使其內的SOD浸出.最好在0--4度靜止過夜後，把溶血進行有機提取。

4.接著向溶血中緩緩加入0.2--0.25倍體積的預冷(-15度)95%乙醇和0.1--0.15倍預冷氯仿，攪拌10--15分鍾後，原溶血呈漿糊狀，靜止1--2小時，用濾布除去凝固的血紅蛋白，然後將濾液2500r/min離心約1--5分鍾留上清液拋去沉澱， 此時如果上清液略為微黃色時，可用快速過濾紙過濾，可得到微帶藍色的清澈透明的粗酶液。

(二)粗酶液的初步提純：

1.丙酮提醇：向酶液中加0.8倍量預冷(-15度 ) 丙酮 ， 生成大量白色沉澱 ， 以3000r/min離心2分鍾收集沉澱，上清液可不必吸取，直接傾倒。

2.熱變性：(除雜蛋白)准備好衡溫浴鍋，在本工藝中，提前30分鍾， 注滿水接通電源後，使之加熱到55--60度以省時間，將沉澱量約50倍量體積比加入0.2MPH=7.6磷酸鈉緩沖溶液，水浴加熱至60度，15分鍾後迅速冷卻到室溫.3000r/min離心2 分鍾得上清液，在上清液中，緩緩滴加0.6倍體積的預冷(-15度)丙酮，生成白色沉澱。

3.初純SOD：在上述沉澱中加去離子水，製成20--30%SOD溶液，分裝入樣品瓶中，放入冷凍乾燥機中，於開機後以0.2--0.1Torr真空度，約1.5--2小時， 得到化妝或食品用SOD，該產品比活大於3000u/mg，外觀呈微帶藍色的白色凍干品。

(三)SOD進一步提純：

SOD精品一般是把SOD產品經過柱層析，柱層析後的SOD沒有小分子等雜質， 層析後為高活性的SOD大分子.SOD精品價格更高，它主要作為生物化學試劑， 化驗室標准試劑試用.目前SOD柱層析有兩種，二者可單獨使用，也可結合使用，一般是DEAE-- 纖維素層析和SephadcxG--100葡聚糖凝膠層析，將(二)2，熱變性後SOD丙酮沉澱用PH7.6，0.2MNaH2PO4-NaHPO4緩沖溶液溶解，有不溶的雜蛋白時.離心拋去沉澱，上清液上DEAE--纖維素或SephadsxG--100層析柱(1*20cm或2.5*30cm)，梯度洗脫 ， 洗脫液為PH7.6，0.2M，NaH2PO4--NaHPO4緩沖液，下流速度控制在0.2--0.5ml/min，在分光光度計上用紫外譜325nm處測流出液，合並活力峰，再用蒸餾水反復透析，透析徹底後， 放入樣品皿置於冷凍乾燥機中乾燥後即得SOD精品。

五、注意事項：

1.掌握適當的溫度和時間：雖然SOD對熱較穩定， 但在分離純化過程中最好還是採用較低溫度，一般以0--10度為宜，時間長不要超過3天。

2.注意提取，提純方法：使用有機溶劑或者加熱均能有效沉澱蛋白質， 但掌握適當溶劑和加熱結合的辦法可以達到最佳效果。

六、SOD的檢測方法：活性檢驗，比較方便的辦法是用連笨三酚自氧化法， 先測得連笨三酚的自氧化速率，然後加入SOD再測得加入SOD之後的氧化速率，按照酶活性單位定義，即在最佳條件下，每分鍾抑制連笨三酚自氧化分解速率達50% 的酶量定義為一個酶單位.依次求出活力總值 ，同時也可以用聚丙烯醯胺凝膠電泳來測定其純度，看其分子量32000左右的一條帶是否與有關文獻指導一致.

超氧化物岐化酶(superoxide dimutase 簡稱SOD)是一種重要的氧自由基清除劑，作為一種葯用酶，引起國內外生化屆和醫葯屆的極大關注。SOD應用於醫學臨床上可以治療多種疾病，類風濕性關節炎、心肌梗塞等，在防輻射，抗衰老，抗腫瘤等方面也有積極的作用，而且廣泛用於化妝品和食品添加劑的行列。

自1969年Mccord和Fridovich 首次發現從牛血細胞中發現超氧化物岐化以來，到目前為止，國內已有幾十家科研單位對SOD作了大量的研究和試產工作，而且有些已批量生產。SOD引起了國內生化界的重視，1988年在浙江寧波如開了《全國首屆SOD學術會議》。1989年4月在河南開封《第三屆葯用酶學術會議》上，SOD被列為重點開發項目，90年7月在大連《全國第二屆SOD學術會議》，SOD已作為一種葯用酶發展較快，將成為一種很有前途的生化產物。

SOD是一種廣泛存於動物、植物和微生物的生物酶，國外葯用SOD系從血中提取，國內SOD已開發的品種已超過20種，證明我國對SOD的研究和應用已進入新時期。

我國從牛、馬、豬、雞、狗等動物血中提取SOD來源豐富，成本低，提取和純化較方便，葯細胞膜易破，用常規分離純化法可獲得高純度的SOD。

本技術採用熱變性，超濾新技術，不僅大大簡化了工藝過程，而且產品質量和收率都比老工藝有較大的提高，其提取的SOD均為CuZu-SOD。

一、葯品與儀器：

(1)檸檬酸三鈉：Na3C6H6O7 (2)工業丙酮CaH6O

(3)鄰苯本酚 (4)酸磷鉀K3Poe4

(5)弱鹼性陰離子交換劑DEAE Sephadsxa-50外觀40-120ubrd或者DEAE-cell-ujose(DE-32)二乙基纖維素。 (6)冷凍乾燥器(自己組配)

(7)層折柱(7.5＊30cm) (8)離心機

以上試劑及其它葯劑、儀器可在各省市化學試劑商店、醫療器械商店購買。

二、Cu、Zu-SOD的提取及純化(牛、馬血為例)

1、工業流程：

加抗凝劑 鹽洗

鮮牛血--------------------->紅血球------------------------>

離心除黃色血漿 加NaCL

熱變性1 熱變性2

壓積紅細胞-------------->淡黃色混合液--------------------->

68度30分鍾 60-65度20分鍾

加丙酮 加丙酮 層析

淺藍色清液----------->絮狀沉澱-------------->沉澱------------>

凍干

透析除鹽

洗脫----------------->透析液--------->SOD(凍干品)

2、提取方法

(1)收集紅細胞：鮮牛血100升，加入3. 8％檸檬酸三鈉抗凝劑攪拌均勻，靜置，使紅細胞自然沉降，除去上層大部分血漿，下層液再離心除盡其餘血漿，再加入3倍量0.9％氯化鈉(精製食鹽)洗滌兩次， 離心可收集到壓積紅細胞(40升)。

(2)熱變性1：收集的紅細胞再加入4公斤氯化鈉，40克氯化銅，蒸餾水100升攪勻，水浴加熱到68度恆溫30分鍾，迅速冷卻加至室溫，過濾除沉澱，收集濾液。

(3)熱變性2：濾液在65度恆溫水浴下，向濾液中慢慢中入40克氯化銅，至濾液清澈變為淡藍色為止，保溫20分鍾，迅速冷卻至室溫，離心去沉澱得上清液。

(4)SOD粗品：超濾心清液加入0.75倍全積的丙酮沉澱， 離心收集沉澱於離於水，離心除去不溶物得清液，清液加入0.75倍體積的丙酮沉澱， 離心收集沉澱，沉澱經無水丙酮洗滌脫水兩次，真空乾燥得淡藍色粉末狀SOD粗品

(5)SOD粗品提純：SOD粗品溶於2.5mmol/L，PH值7.6磷酸鉀緩沖液，將該混合液上在7.5＊30cm的層柱上，離子換劑為DEAE-SphadexA-50(該柱事先用緩沖平衡)，以100～200ml/小時速度上樣，完畢後用同一緩沖A280mm值，低於0.02然後用25～200mmol/L，PH值7.6磷酸鉀緩沖液進行直線梯度分段洗脫，流速為100ml/小時。用部分收集器收集， 洗脫液經透析除鹽後，得濃縮的透析液，經冷凍乾燥，得SOD成品，(呈淺綠色)。

三、SOD活性測定：

SOD的測定方法很多，常見的有化學法，免疫法等電點聚焦法等，化學法測定的原理主要是利用有些化合物如鄰苯三酚，在自氧化過程中會產生有色中間物降超氧游離基(O2)這樣就可以利用SOD分例(O2)。阻止中間物的積累而測定其酶活性。

1、試劑及儀器

(1)鄰苯本酚分析純，用10mmol/LECL配成50mmol/L溶液。

(2)UV－754紫外分光光度計。

2、測定方法：

(1)鄰苯三酚自氧化速度的測定。

在25度、45ml`50mmol/L、PH值8.3、K2HPO4－KH2PO4緩沖液中加入10mmol/L的鄰苯三酚，迅速搖勻，倒入光徑1cm的比色杯內，在325mm波長下每隔30秒測A值一次，要求自氧化速度控制在0.0700d/mm 左右。

(2)SOD或粗酶抽提液活性測定：

測定方法同測鄰苯三酚自氧化速度，在加入鄰苯三酚前加入待測SOD樣液，測得數據按以下公式計算酶活性。

0.0700－A325mm/min

----------------------------------------＊100％度

0.70

樣液稀釋倍數 樣液稀釋倍數

酶活性(u/m1)＝------------＊反應液總體積＊----------------

50％ 樣液體積

3、蛋白濃度(mg/ml)和蛋白的計算：

SOD或粗酶抽提液，經280mm紫外比色測定後，查牛轎清白蛋的標准曲線，由此算出每ml含ug蛋白的量。

蛋白濃度＝ug蛋白/ml＊樣液稀釋倍數＊10負3次方＝mg蛋白/ml總蛋白＝mg蛋白/ml＊原液總體積＝mg蛋白。

4、比活(u/mg蛋白)的計算：

單位活力(u/ml) 總活力

比活＝-----------------------＝-----------------＝u/mg蛋白

蛋白的濃度(mg蛋白/ml) 總蛋白

四、Cu、Zn－SOD性質：

1、Cu、Z n－SOD呈藍綠色，分子量在3200左右，由兩個中一個Cu和一個Zn。

2、對熱穩定，天然牛血SOD，75度下加熱數分鍾其酶活喪失很小。

3、PH值對SOD的影響，SOD在PH5.3～10.5范圍內，其催化速度不受影響，PH3.6時SODZn脫落95％，PH12SOD構象發生不可遞的構象，導致酶活性喪失。

4、SOD的紫外線吸收特徵：SOD在280mm處沒有吸收高峰。

5、金屬輔其與酶活性。SOD屬金屬酶Zn僅於分子結構有關，而Cu與催化活性有關。

6、SOD是其具有還有和失活作用的。

五、葯品與儀器：

檸檬三鈉，分析純：江蘇花橋北工四廠；

工業丙酮：上海溶劑廠；

鄰苯三酚，分析純：貴州遵義化工廠；

六、SOD的包銷單位：

(1)河南鄭州國營聖科研究所鄭州南陽路14號 郵編：450053《河南科技報》91年10月3日

(2)四川省金堂縣工藝製品技校生化科接待室：金堂准口執行的院內，政府辦公大樓1樓 郵編：610404 聯系人：鄧勇 彭麗 《四川農村報》 91年3月1日

(3)廣東省深圳市上步區石夏東二蒼14號科技所 郵編：518031聯系人：黃秋林 《科技消息報》92年7月10日

說明：1、資料後附的產品銷售地址信息均為我們從近兩年的報刊上摘錄的各單位廣告，並註明有出處。

2、你先看完資料後，行根據自己的實際情況，先小量試驗， 並事先聯系好產品的收購單位，待取得經驗後再批量生產。

3、讀者在聯系收購單位時，請一定事先去聯系，並附上郵資， 待得到明確答復後再根據情況去人辦理，千萬不要冒然前往，以免造成不必要的經濟負擔。

4、原料及儀器各地經營原料店供應，廣州市人民南路，上九路等地均有供應。

附：詳細SOD收購信息

1、廣西南寧市生物化學制葯廠

地址：魯班路1號

2、上海生物化學制葯廠

地址：海主路513號

3、江蘇徐州市生物化學葯廠

地址：海沛路86號

4、山東兗州市生物化學制葯廠

地址：肉聯廠內

5、湖南常德生物化學制葯廠

地址：肉聯廠內

6、佛山市生物化學制葯廠

地址：佛山市

7、廣州市明興制葯廠

地址：廣州市河南路工業大道北48號

8、廣州市白雲制葯廠

地址：從廣州越綉公園坐21路車到三元里北展下車沿著礦泉別墅側入200米

9、哈爾濱生化葯廠哈肉聯廠

地址：哈爾濱道外南極街12號院；電話：88423轉制葯廠

10、沈陽市生物化學制葯廠

地址：哈爾濱皇姑區明廉路2號；

11、江蘇省南京生物制葯廠

地址：江蘇省南京市下關區寶塔橋附近；

12、浙江省金華生物化學制葯廠

地址：浙江省金華市河盤橋路51號

13、廣東生物制葯廠

地址：廣州市三元里

14、廣東汕頭市生物化學制葯廠

地址：湖山路西巷3號2號；電話：666124

11、江蘇省南京生物制葯廠

地址：江蘇省南京市下關區寶塔橋附近

12、浙江省金華生物化學制葯廠

地址：浙江省金華市河盤橋路51號

13、廣東生物制葯廠

地址：廣州市三元里

14、廣東汕頭市生物化學制葯廠

地址：湖山路西巷3號15.上海霞飛日用化工廠

16.北京麗源日用化工廠

17.南京化妝品廠

18.上海日用化學品二廠

19廣州美容化妝品廠

20南京第二葯物化學制葯廠

上海永芳日用化學品廠

廣州化妝品廠

杭州市鳳喜化妝品廠

上海日用化學品四廠

天津市津樂制葯廠

杭州第一生物化學制葯廠

上海葯物研究所實驗葯廠

天津市南開區美容化妝品廠

蘇州市昊縣生物化學廠

上海生物化學制葯廠

天津生物醫學技術開發中心

上海香海美容品廠

北京日用化學品四廠

武漢市辛安渡制葯總廠

湖北沙市生化制葯廠

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注各大制葯廠化妝品廠美容院均為銷售對象

電話：010-68150495，68212139

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2. 如何建立新葯的細菌內毒素檢查方法

[摘要] 目的：建立新葯的細菌內毒素檢查方法。方法：採用鱟試驗檢查法對新葯中的細菌內毒素進行檢查。結果：介紹了如何建立新葯的細菌內毒素檢查方法，重點是細菌內毒素檢查限值的確認以及如何進行干擾試驗。結論：細菌內毒素檢查法為新葯的質量控制以及應急檢驗提供了有益的基礎。

[關鍵詞] 新葯；細菌內毒素檢查法；干擾試驗
[中圖分類號] R927.12 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-7210（2011）11（b）-159-03

How to establish the method of bacterial endotoxin test for new drugs
XIAO Guinan, SUN Qingping, SHENG Yingmei
Guangdong Institute for Drug Control in Guangdong Province, Guangzhou 510180, China
[Abstract] Objective: To establish the method of bacterial endotoxin test for new drugs. Methods: Tachepleus amebocyte lysate test was applied to detect bacterial endotoxins in new drugs. Results: How to establish the method of bacterial endotoxin test for new drugs was introced, and especially focused on how to define the limit of bacterial endotoxins and carry out the interference test. Conclusion: Bacterial endotoxin test provides useful bases in quality control and emergency test for new drugs.
[Key words] New drugs; Bacterial endotoxin test; Interference test

新葯以細菌內毒素檢查方法代替既往的家兔熱原檢查法是一個趨勢，在葯害事件的應急處理中有一定的應用價值，這也符合國際上對動物實驗的「3R」原則（優化、減少、替代）的要求。現行細菌內毒素檢查方法是1968年美國科學家Levin和Bang所建立的鱟試驗法[1]。從開展內毒素檢查的現狀來看，部分單位未能參照《中國葯典》2010年版二部的要求進行實驗和設計，本文著重介紹在建立新葯細菌內毒素檢查法中容易出現問題的細菌內毒素限值的確定及干擾試驗這兩個環節，力圖為新葯的質量控制以及應急檢驗提供有益的參考依據。
1 新葯細菌內毒素檢查限值的確認
1.1 細菌內毒素檢查限值的計算公式
新葯細菌內毒素檢查限值（L）的確定是整個方法學建立的前提和基礎，現在一般按照《中國葯典》2010版二部附錄XI E進行確定[2]。計算公式為L=K/M，K為人每千克體重每小時最大可接受的內毒素劑量，以EU/（kg・h）表示，非放射性注射劑K=5 EU/（kg・h），放射性注射劑K=2.5 EU/（kg・h），鞘內用注射劑K=0.2 EU/（kg・h）；M為人用每千克體重每小時的最大供試品劑量，成人體重按60 kg計算，體表面積為1.62 m2。部分抗腫瘤葯物及抗生素的使用劑量以體表面積描述時，可將每平方米體表面積劑量乘以0.027，即可轉換為每千克體重劑量。
1.2 細菌內毒素檢查限值的確認程序
首先根據所研究的新葯品種說明書，通過查閱最新版《臨床用葯須知》等相關權威資料，得到人用每千克體重每小時的最大供試品劑量（M值）並求出L值，將所求得的L值與相關的質量標准（《美國葯典》、《英國葯典》、《日本葯局方》、《歐洲葯典》）以及國家食品葯品監督管理局頒布的轉正標准或注冊標准散件中關於該品種的細菌內毒素限值進行參考對比。
還有一種方法是參考該品種的熱原檢查劑量（可視為M值），因為熱原劑量的設置一般為成人臨床用量的1～3倍，與常用的安全系數3～10倍較為接近，這種參考熱原檢查劑量的做法在以前頗為盛行，現在已逐漸少用。
1.3 細菌內毒素限值計算的常見誤區
1.3.1 將成人日均用量誤作最大用量 大多數情況下，說明書或資料往往只提供了某葯的單次或每日用量，實踐中不少人往往將單次用量誤作最大用量進行限值計算，所得限值明顯偏寬。眾所周知，除極少數情況（急性、重症患者用葯）下的單次用量可作為最大用量外，多數情況的日常用量換算成最大用量，還需考慮一定的安全系數（一般取3～10倍）。
1.3.2 誤將每日總用量當成每次最大用量 只根據說明書或資料提供的某葯的每日總用量，未考慮該葯品總量的靜脈滴注時間已經遠不止1 h，這樣求得的限值難於真實反映實際限值，因為M值是反映人用每千克體重每小時能接受的最大供試品劑量，而非全日的總用量。
1.3.3 對於大輸液的細菌內毒素限值確定過於按部就班 沒有考慮大輸液的特殊要求，大輸液的主葯成分只佔其中很少的一部分，實際多為葡萄糖注射液或生理鹽水注射液，如果按主葯成分計算細菌內毒素限值的話，容易偏寬，因而如無特殊情況一般將熱原檢查劑量10 ml/kg視為最大臨床用量，將大輸液細菌內毒素限值定為0.5 EU/ml。
1.3.4 忽視滴注時帶入的外源性細菌內毒素 某些新葯在臨床使用時是溶於大輸液進行滴注的。假設某抗生素葯品的規格是1 g/支，其使用方法是溶於5%葡萄糖注射液250 ml，在1 h內滴注完畢。可參照下述方法計算該抗生素細菌內毒素限值，此時K=5 EU/（kg・h），因而60 kg的成人每小時體內可以接受細菌內毒素的最大量為300 EU，而在1 h內250 ml的5%葡萄糖注射液最大可帶來125 EU的細菌內毒素，1 g的該葯最多隻能帶入175 EU（125～300 EU）的細菌內毒素，因而該抗生素其細菌內毒素限值可定為0.175 EU/mg。如果按常規計算的話，求得限值為0.300 EU/mg。
1.3.5 沒有考慮到主葯外的其他成分 在細菌內毒素限值的確定過程中，特別是原料，要注意扣除主葯外的其他成分（如金屬離子：頭孢噻肟鈉中的鈉，西司他丁鈉中的鈉），因為標准一般規定為每毫克中頭孢噻肟或西司他丁所含的細菌內毒素量不得過多少EU，而製成的原料往往是含鈉等其他成分的。
2 鱟試劑靈敏度復核試驗
2.1 前期准備工作
試驗所用的器皿需經處理，以去除可能存在的外源性內毒素。若使用塑料器械，如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等，應選用標明無內毒素並且對試驗無干擾的器械。耐熱器皿常用乾熱滅菌法（250℃，30 min以上）去除，部分物品也可採用其他確證不幹擾細菌內毒素檢查的適宜方法（如強酸強鹼浸泡法），但需經過確證不幹擾鱟試驗檢查。
2.2 靈敏度復核試驗

當使用新批號的鱟試劑或試驗條件發生了任何可能影響檢驗結果的改變時，應進行鱟試劑靈敏度復核試驗。需要注意的是，當實測靈敏度λc在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ～2.0λ，λ為鱟試劑靈敏度的標示值）時，方可用於細菌內毒素檢查，並以標示靈敏度λ為該批鱟試劑的靈敏度，日常檢驗中部分檢驗者誤將實測的靈敏度作為批鱟試劑的靈敏度來進行常規檢查或干擾試驗。
3 鱟試驗檢查的干擾試驗
3.1 最大有效稀釋倍數（MVD）的確認
MVD是指在試驗中供試品溶液被允許達到稀釋的最大倍數，計算公式為MVD=C・L/λ，式中L為供試品的內毒素限值，λ為鱟試劑的標示靈敏度（EU/ml），或是在光度測定法中所使用的標准曲線上最低的內毒素濃度；C為供試品液的濃度，當L以EU/ml表示時，則C等於1.0；如供試品為注射用無菌粉末或原料葯，則MVD取1，可計算供試品的最小有效稀釋濃度C=λ/L。
此處往往根據市售主要的鱟試劑靈敏度范圍（0.03～1.00 EU/ml）來計算干擾試驗中的有效濃度稀釋范圍。
3.2 干擾預試驗
取本品1支（原料精密稱取不低於10 mg的量），按照擬定內毒素限值，原料或注射用粉針加內毒素檢查用水溶解並稀釋至不超過MVD規定的系列濃度，注射液直接稀釋至不超過最小有效稀釋濃度的系列濃度，預試驗時一般可取一個廠家靈敏度為0.125 EU/ml或0.250 EU/ml的鱟試劑，對供試品原液及其系列稀釋液（供試品陰性對照，NPC）進行干擾檢驗，另外設立陽性對照（PC）、陰性對照（NC）、供試品陽性對照（PPC），每個濃度平行做兩管，最終得出供試品（批號：20100802）在某濃度及以下濃度對鱟試驗檢查不產生干擾作用（PPC首次出現「++」的濃度）的結論。供試液的干擾預試驗結果，見表1。
由表1可以看出，供試品在不高於20 mg/ml的濃度下不幹擾鱟試驗的檢查。
3.3 正式干擾試驗
按表2制備各系列溶液，使用的供試品溶液應為未檢驗出內毒素且不超過MVD的溶液，參照鱟試劑靈敏度復核試驗項下操作，記錄供試液的干擾情況。

只有當供試品溶液和陰性對照溶液的平行管都為陰性，且鱟試劑標示靈敏度的對照系列溶液的結果在鱟試劑靈敏度范圍內時，試驗方為有效，計算系列鱟試劑標示靈敏度的對照系列溶液和干擾試劑系列溶液的反應終點濃度的幾何平均值（Es和Et）。當Es在0.5λ～2.0λ及Et在0.5Es～2.0Es時，認為供試品在該濃度下無干擾作用。若供試品溶液在小於MVD的稀釋倍數下對試驗有干擾，應將供試品溶液進行不超過MVD的進一步稀釋，再重復干擾試驗。
當進行新葯的內毒素檢查試驗前或無內毒素檢查項的品種建立內毒素檢查法時，須進行干擾試驗；當鱟試劑、供試品的處方、生產工藝改變或試驗環境中發生了任何有可能影響試驗結果的變化時，須重新進行干擾試驗。
4 排除供試液干擾的方法[3]
4.1 樣品稀釋法
選用較高靈敏度的鱟試劑，將供試品進一步稀釋（低於最大有效稀釋倍數）後進行干擾試驗，一般情況下大部分的干擾作用均能得到有效控制。
4.2 調節pH法
測定供試液的pH值，若不在鱟試劑的有效緩沖pH范圍（6.0～8.0），可選用一定濃度的HCl或NaOH將pH值調節至6.0～8.0，但要注意應進行方法學驗證（干擾試驗），確保不幹擾鱟試驗檢查，且對內毒素檢查結果無影響。
4.3 超濾法
通過專用超濾系統，將影響內毒素檢查的葯物小分子雜質濾除，內毒素則留存於濾器內，濾器內加入相應的內毒素檢查用水進行檢查，可在幾乎不影響內毒素濃度的前提下盡量避免小分子葯物的干擾作用。
4.4 其他方法
微溫保持加熱法；使用去G因子鱟試劑或廠家提供的專用抗增液對樣品進行稀釋（此時須進行干擾試驗）。
5 常規檢查
使用最大有效稀釋倍數（MVD） 並且已經排除干擾的供試品溶液來制備溶液供試品溶液和供試品陽性對照溶液，進行細菌內毒素的常規檢測。
6 討論
建立新葯品種的細菌內毒素檢查法，首先要結合臨床最大用量確定其細菌內毒素限值，應用兩個廠家的鱟試劑對3批樣品進行鱟試驗檢查（普通凝膠法或動態濁度法定量試驗），如結果能證實樣品在不低於最大有效稀釋濃度時對細菌內毒素檢查無干擾作用，且樣品的細菌內毒素常規檢查結果為陰性，此時方可建立該品種的細菌內毒素檢查法[4-7]。
根據臨床最大用量規定及實驗結果，將所研究的新葯細菌內毒素限值定為每毫克主葯（或每毫升）中含內毒素的量應小於若干EU。經干擾實驗確證，該新葯在某個濃度或低於該濃度時（但不低於最大有效稀釋濃度MVC）對細菌內毒素檢查無干擾作用。取本品3批，按擬定的標准檢驗，其內毒素檢查結果均符合規定。

3. 果酒鑒別的基本方法是什麼

由於梨皮較厚，肉質堅硬，石細胞含量多，因而破碎工序是提高出汁率的重要工序，破碎果塊的大小要適宜，一般為3～4毫米。為防止果實與空氣接觸發生氧化褐變，破碎工序要採取護色措施，可加入50～70 mg/ L SO2 + 10 mg/ L Vc 。
榨汁：由於果實中果膠含量較高，破碎後直接取汁時出汁率低，且汁液混濁，可加入0.2％的果膠酶使果膠分解，酶解溫度35～45℃，處理2小時。殺菌：為達到果酒的生物穩定, 果實榨汁後要馬上添加SO2以抑菌, 或榨汁後進行巴氏殺菌, 巴氏殺菌同時還可起到抑制酶活性的作用成分調整：（1）濃縮原汁：原梨汁本身的總糖含量低, 直接發酵酒精度偏低, 為了提高酒精度, 在原梨汁中加入原汁量5%的果膠酶,酶解後，調整總糖含量。調糖可採用加入白砂糖和濃縮梨汁的方法，用18g轉化為1°酒，計算製作12°酒需要加的白砂糖，充分搖晃使分布均勻。（2）調酸加入一定量亞硫酸鈉, 當果汁中含有0.1%的二氧化硫時，即可抑制雜菌活動。甜酒0.8%-1%，一般PH>3.6或可滴定酸<0.65%時加入檸檬酸調整酸度，以利正常發酵。
活化酵母：添加0.3%-0.5%活性乾酵母，使用前應放入3%-5%的葡萄糖溶液，37℃水浴0.5-1h後添加到果汁中，30℃的發酵溫度，充分發酵5天。在發酵過程中, 每天定時對梨酒中的還原糖和酒精度進行測定, 直至還原糖和酒精度變化很小, 結束發酵。發酵中每天要輕輕搖瓶一、二次，將泡帽搖入發酵酒液中
陳釀、倒灌：主發酵結束，及時進行酒渣分離，防止酒、渣接觸時間過長而產生較大的苦雜味。分離後，進入後發酵即陳釀階段，繼續完成殘糖發酵、產生香味和老熟。其溫度的掌握是低於主發酵溫度。此階段（約10天）形成的沉渣即酒腳，因其中的酵母菌體開始死亡自溶，會影響酒的風味和導致蛋白質渾濁，也要及時倒桶除去。在此後，一般要再倒一次桶，間隔時間可以延長。倒桶後要裝滿酒液，並用酒精或酒渣（腳）蒸餾的白酒封口，防止雜菌污染和空氣氧化增強了酒的營養和保健功能。或用硅藻土澄清法：用量不超過420克／1000升；明膠—單寧法：0.5％的明膠液和1％的單寧液的最適用量分別為7.5％和7％
過濾：澄清後的梨汁還需除去沉澱及不穩定的懸浮顆粒，可用硅藻土過濾機過濾，硅藻土用量0.01％左右，採用0.3～0.35兆帕的過濾壓力。板框式過濾機、超濾設備、薄板過濾、微孔薄膜過濾。

4. 白酒有什麼營養為什麼那麼多人喝

白酒對身而言沒有營養可言，但適量地喝些白酒對身體會有下列好處：
1.使循環系統發生興奮效能。
2.有失眠症者睡前飲少量白酒，有利於睡眠。
3.能刺激胃液分泌與唾液分泌，起到健胃作用。
4.有通風、散寒、舒筋、活血作用
5.適量飲用可延緩衰老、預防心腦血管病、預防癌症。

5. 得尿毒症國家有什麼補助政策嗎

尿毒症不是什麼神秘的疾病，它是所有慢性腎臟病進入晚期的統稱，醫學專業術語稱之為「慢性腎功能衰竭」。晚期腎臟病可以涉及到多個方面的功能紊亂，如水、電解質平衡與酸-鹼平衡的紊亂、心與肺功能的下降、造血功能的下降、礦物質與骨代謝功能異常帶來的骨質疏鬆、內分泌、免疫功能紊亂引起的月經異常和全身抵抗力下降等。那麼尿毒症該如何治療呢？

一、飲食治療

盡量避免攝入含植物蛋白較高的食物，盡可能進食高生物價值的優質蛋白。其攝入量應根據腎小球濾過率（GFR）作適當調整：GFR為10～20 ml/min時，予以低蛋白飲食(LPP)，蛋白量0.6g/㎏/d)，可基本滿足生理需要，並能減輕尿毒症症狀，延緩腎功能不全的進展；GFR＜5ml/min者，蛋白量應控制在20g/d左右。尿毒症的飲食治療具體概括為以下幾點：1.合理的低蛋白飲食；2.充分的熱量攝入；3.必需氨基酸、a-酮酸的合理攝入；4.各種營養素攝入的綜合平衡和某些特殊營養素（如鐵、鋅等微量元素，L-肉鹼等）的額外補充；5.改善食慾，以保證營養素的足量攝入；6.改善機體內環境，糾正各種營養素的代謝至基本正常，或恢復正常。

二、多休息，避免體力勞動和時間過長的鍛煉

尿毒症患者合理鍛煉是必須的，但運動強度及頻率應依據腎功能狀態因人而異，最好在專業醫護人員指導下進行。

三、葯物治療

1.糾正代謝性酸中毒主要為口服碳酸氫鈉(NaHCO3)，必要時靜脈輸入。2.高鉀血症的防治首先應積極預防高鉀血症的發生。在限制鉀攝入的同時，還必須注意及時糾正酸中毒，以防止細胞內鉀向細胞外轉移；部分病人可適當應用利尿葯，增加尿鉀排出，口服降鉀樹酯增加腸道鉀排出，以更有效的防治高鉀血症發生。3.低鉀血症的防治由於攝入不足、胃腸道丟失（嘔吐、腹瀉）、補鹼過多、利尿過度等原因，患者發生低鉀血症並不少見。部分透析患者因透析液中失鉀過多，且未能及時補充者，也易發生低鉀血症。可給予口服補鉀，或根據需要考慮並予以靜脈滴入葡萄糖氯化鉀溶液。4.糾正腎性貧血臨床上提倡使用促紅細胞生長素（EPO）小劑量每周每千克體重150u皮下注射，使血紅蛋白逐漸上升，並維持在100～120g/L水平。使用過程中80%～90%患者需補充鐵劑、葉酸等造血原料。

四、腎臟替代治療

1.血液透析利用半透膜原理，將患者血液與透析液同時引進透析器，在透析膜兩側作反方向流動，藉助膜兩側的溶質梯度，滲透梯度和水壓梯度，通過擴散、對流、吸附以清除溶質中的毒素；通過超濾和滲透清除體內瀦留過多的水分；同時補充身體需要的物質，糾正電解質和酸鹼平衡的紊亂。血液透析一般每周做2～3次，每次4～5小時，每次透析時間的長短視透析膜性能及臨床病情綜合決定。2.腹膜透析利用腹膜作為半透膜，通過腹膜透析導管向腹腔內注入透析液，藉助腹膜兩側的毛細血管內血漿和腹腔內的透析液中的溶質濃度和滲透梯度，通過彌散和滲透原理以清除機體代謝廢物、毒物和過多的水分（隨廢舊透析液排除體外），糾正電解質紊亂。3.腎移植成功的腎移植會恢復正常的腎功能(包括內分泌和代謝功能)，腎可由捐獻者或親屬供腎（由兄弟姐妹或父母供腎），親屬腎移植的效果較好。腎移植需長期使用免疫抑制葯，以抗排斥反應。