1. 紱誨瓙浜ゆ崲鏍戣剛鐨勯吀紕卞害濡備綍鍒掑垎
闃崇誨瓙鏍戣剛鍒嗕負寮洪吀鎬у拰寮遍吀鎬т袱綾伙紝浜哄伐鍚堟垚鐨勯槼紱誨瓙鏍戣剛鐨勫畼鑳藉洟鏄鏈夋満閰革紝騫舵寜鐓ч吀鎬х殑寮哄急錛屽垎涓哄己閰告у拰寮遍吀鎬т袱綾匯傚己閰告х殑瀹樿兘鍥㈡槸鑻紓洪吀錛屽急閰告х殑瀹樿兘鍥㈠垯鍖呮嫭鏈夋満紓烽吀銆佺緹鍩洪吀鍜岄厷絳夈
閰鎬富瑕佷互H+鐨勫艦寮忎笌鍏朵粬闃崇誨瓙榪涜屼氦鎹銆備緥濡傦紝鐢℉ +涓庨噾灞炵誨瓙浜ゆ崲浼氫嬌鏍戣剛鍙樻垚鐩愮殑褰㈠紡銆傚己闃崇誨瓙鏍戣剛闄や簡閰稿艦寮廟-O 澶栵紝鐢熶駭鍘傚朵篃浼氫互閽犵洂R-O 鐨勫艦寮忓嚭鍞錛屽垎鍒縐頒負姘㈠瀷鍜岄挔鍨嬪己闃崇誨瓙浜ゆ崲鏍戣剛銆
寮洪吀鎬ч槼紱誨瓙鏍戣剛鍚鏈夊ぇ閲忕殑寮洪吀鎬у熀鍥錛屽傜:閰稿熀3−錛屽規槗鍦ㄦ憾娑蹭腑紱昏В鍑篐+錛屾晠鍛堝己閰告с傛爲鑴傜昏В鍚庯紝鏈浣撴墍鍚鐨勮礋鐢靛熀鍥錛屽傜:閰稿熀3− 錛岃兘鍚擱檮緇撳悎婧舵恫涓鐨勫叾浠栭槼紱誨瓙銆傝繖涓や釜鍙嶅簲浣挎爲鑴備腑鐨凥+涓庢憾娑蹭腑鐨勯槼紱誨瓙浜掔浉浜ゆ崲銆傚己閰告ф爲鑴傜殑紱昏В鑳藉姏寰堝己錛屽湪閰告ф垨紕辨ф憾娑蹭腑鍧囪兘紱昏В鍜屼駭鐢熺誨瓙浜ゆ崲浣滅敤銆
鏍戣剛鍦ㄤ嬌鐢ㄤ竴孌墊椂闂村悗錛岃佽繘琛屾佺潄鍐嶇敓澶勭悊錛屽嵆浣跨敤鍖栧﹁嵂鍝佷嬌紱誨瓙浜ゆ崲鍙嶅簲鍚戠浉鍙嶇殑鏂瑰悜榪涜岋紝浣挎爲鑴傜殑瀹樿兘鍩哄洟鎮㈠嶅埌鍘熸潵鐨勭姸鎬侊紝浠ヤ究閲嶅嶅埄鐢ㄣ備緥濡傦紝涓婅堪鐨勯槼鑰呴攢紱誨瓙鏍戣剛涓鑸浣跨敤寮洪吀榪涜屽啀鐢熷勭悊錛屾ゆ椂鏍戣剛閲婃斁鍑鴻鍚擱檮鐨勯槼紱誨瓙騫朵笌H+緇撳悎錛岃繘鑰屾仮澶嶅埌鍘熸潵鐨勭粍鎴愩
姘村勭悊鍘婚櫎閽欓晛紱誨瓙浠庤岃揪鍒拌蔣鍖栫‖姘寸殑榪囩▼涔熸槸鐢ㄩ槼紱誨瓙浜ゆ崲鏍戣剛錛屼笉榪囦竴鑸鏄鐢ㄩ挔鐩愬瀷銆傚啀鐢熶嬌鐢ㄧ殑鏄宸ヤ笟姘鍖栭挔鍗抽熺洂銆
寮遍吀鎬ч槼紱婚栭棴娓稿瓙鏍戣剛鍚鏈夊急閰告у熀鍥錛屽傜晶鍩猴紞 錛岃兘鍦ㄦ按涓紱昏В鍑篐+鑰屽憟閰告э紝浣嗗洜鍏惰В紱葷▼搴︿笉楂橈紝鍥犳や竴鑸浠呯▼寮遍吀鎬э紝鏁呰屽睘浜庡急閰告ч槼紱誨瓙鏍戣剛銆傛爲鑴傜昏В鍚庝綑涓嬬殑璐熺數鍩哄洟錛屽
RCOO錛(R涓虹⒊姘㈤摼鍩哄洟)錛屽彲涓庢憾娑蹭腑鐨勫叾浠栭槼紱誨瓙鍚擱檮緇撳悎錛屼粠鑰屼駭鐢熼槼紱誨瓙浜ゆ崲浣滅敤銆
濡備笂鎵榪幫紝姝ょ被鏍戣剛鐨勯吀鎬у嵆紱昏В鎬ц緝寮憋紝鍦ㄤ綆pH涓嬮毦浠ョ昏В榪涜岃繘琛岀誨瓙浜ゆ崲錛屽彧鑳藉湪紕辨с佷腑鎬ф垨寰閰告ф憾娑蹭腑(濡俻H鍊間負5~14)璧蜂綔鐢ㄣ傝繖綾繪爲鑴備篃鏄鐢ㄩ吀榪涜屽啀鐢燂紝鍏跺啀鐢熸ц緝寮恆
2. 強離子交換柱和弱離子交換柱的區別
陰樹脂和陽樹脂有什麼不同?
交換原理:
陰離子交換樹脂體內含有大量的鹼性基團,是通過氯來與水中的雜質交換,而陽離子交換樹脂則含有大量的酸性基團,是通過鈉離子或者氫離子與水中的雜質進行交換。
交換順序:
1、混床樹脂的交換順序一般是先陽離子,然後才是陰離子,陽離子交換樹脂會釋放出酸性基團,而陰離子交換樹脂則會釋放出鹼性基團,兩者中和,成為純水。
2、離子所帶有的電荷多,就容易被樹脂吸附,而所帶有的電荷較少,則比較難吸附。
3、如果帶有相同電荷量的離子,原子序數大的元素,形成離子的水合半徑小,較易被吸著。
溫度:
陽離子交換樹脂的耐溫性比較好,所以一般陽離子交換樹脂的使用溫度或者儲存溫度都要比陰離子交換樹脂高一些。
預處理:
陰陽離子交換樹脂的功能基團不同,所以樹脂預處理時使用的溶液也不同,陰陽樹脂在使用飽和食鹽水浸泡18-20小時之後,使用清水清洗干凈。
陰樹脂使用濃度為5%的氯化氫進行浸泡4-8小時,清洗干凈,再使用濃度在2%-4%左右的氫氧化鈉浸泡4-8小時,清洗至中性即可。
而陽樹脂則使用濃度在2%-4%左右的氫氧化鈉浸泡2-4小時,清洗干凈後,使用濃度為5%的氯化氫進行浸泡4-8小時,清洗至中性即可。
3. 離子交換實驗中,為什麼陽樹脂柱要放在陰樹脂柱前
陽離子柱提供鈉離子,置換掉水中的多價金屬離子,比如鈣離子,鎂離子等。形成的物質更能溶於水。不會沉澱。可以進入下一級處理。
4. 為什麼通過陽離子交換住ph下降
通過陽離子交換柱ph下降原因是離子交換樹脂的離子交換性能下降了。根據查詢相關資料得知,離子交換樹脂在離子交換過程中,如用氫離子交換水中的鈉離子時,鈉不斷地被交換,離子交換樹脂上的氫離子減少,樹脂與鈉離子結合較穩定,不易電離,其導電率下降。交換柱內載體是陽離子交換樹脂為陽離子交換柱,載體為陰離子交換樹脂就是陰離子交換柱。
5. 用離子交換法純化蛋白如何選定緩沖液
也可以用AEC,主要以流穿模式做。sspxiaoji(站內聯系TA)用陽離子交換柱,可以考慮pH6.0-7.0的緩沖液,因內為容大部分蛋白質的等電點在這附近,帶電荷少,這樣容易穿透除去其他雜蛋白。而你的目的蛋白PI在11,掛柱應該比較牢固。但是有個問題需要注意,PH離你的目標蛋白PI太遠,有可能導致掛柱後難以洗脫。
6. 用陽離子交換柱分離氨基酸,在pH=2.0時,鹼性氨基酸和酸性氨基酸相比,哪一個先被洗脫為什麼
【答案】:酸性氨基酸先被洗脫。
陽離子交換柱層析是一種用陽離子交換樹脂作支持劑的層析法。陽離子交換樹脂上含有酸性或鹼性基團可以解離出氫離子,與溶液中的陽離子發生交換。在pH=2.0時,氨基酸的羧基不發生解離,氨基發生質子化,因此氨基酸主要以陽離子形式存在。鹼性氨基酸帶2個氨基,1個羧基;酸性氨基酸帶2個羧基,1個氨基。發生質子化後,鹼性氨基酸帶正電荷明顯多於酸性氨基酸。氨基酸與樹脂的親和力主要取決於他們之間的靜電吸引,因此鹼性氨基酸與樹脂上的陽離子發生交換而被「掛」在樹脂上的機會多,結合力強,相反,酸性氨基酸結合力弱。因此用緩沖液洗脫氨基酸時,酸性氨基酸先被洗脫。
7. 732陽離子交換樹脂鈉型如何轉氫型 轉型後出水PH 有什麼 變化(鈉型出水PH增高) 轉型的樹脂如何再生
沒有國家標准。原理加經驗就可以了。鈉型轉為H型是用鹽酸,如何操作要看你的版柱的直徑。和權填充的樹脂高度。轉型過程一般是從底部通過入5%左右的鹽酸水溶液。按1米直徑估計,流量大至在每小時3--5個立方米。時間估計在1小時左右即可。然後用同樣流量的清水,也是從底部通入。時間則看你的出水PH接近7即可。然後從上部通入清水,流量估計在10-15立方米左右。一直到出水中基本檢測不出硬度即可。這時出水是酸性的。你可以用兩個柱。一個是鈉型柱,用鹽來再生。一個是H型柱,用酸來再生。實際生產時,兩個柱的出水混合,水就是基本中性的。但是兩個柱各自的出水量是多少要看你當地的水的硬度才能估計。所以你的經驗非常重要。
8. 磺酸基陽離子交換鍵合硅膠色譜柱,怎樣維護保養及活化
在使用系統之前,首要任務是檢查色譜柱是否受到微生物污染,否則可能會導致柱子堵塞,使得柱壓升高到無法接受的水平。首先,不連接檢測器,正向安裝色譜柱,使用純甲醇以0.6ml/min流速沖洗大約10倍柱體積。接著,連接檢測器,繼續使用純甲醇以相同流速沖洗約20倍柱體積。隨後,改用去離子水以相同流速沖洗約20倍柱體積。
為確保色譜柱的最佳性能,建議連接保護柱(通常由製造商提供),然後用選定的洗脫液以0.6ml/min流速平衡柱子至少1小時。在用分析洗脫液進行平衡前,如果洗脫液中含有緩沖鹽,應先使用不含緩沖鹽的同比例洗脫液過渡,沖洗約10倍柱體積,以避免緩沖鹽在分析柱內析出。
在進行洗脫液選擇時,需注意陽離子交換柱多使用檸檬酸或酒石酸緩沖液(或其混合溶液)、鄰苯二甲酸緩沖液,pH范圍從2.5到6.5;陰離子交換柱則多使用磷酸緩沖液、硝酸銨溶液(1mMol/L),鄰苯二甲酸緩沖液,pH范圍同樣從2.5到6.5。絕對禁止使用水楊酸緩沖液,因為水楊酸的分解產物會改變固定相的性質。洗脫液在使用前必須通過0.45um濾膜過濾並徹底脫氣,以避免檢測和泵送問題。
為了提高分析的穩定性,建議在室溫條件下使用色譜柱,如果需要,可以將柱溫設置為高於室溫5~10℃。避免在40℃以上使用,以防損壞色譜柱。
在使用過程中,切勿超過色譜柱的耐受最高壓力。調整流速時,應採取小的間隔變化以避免柱床擾動。更換柱子時,務必先將流量降至0,等待洗脫液完全流出柱子,壓力變化到0(約2min)後再進行更換。
防止將來自流動相或樣品中的疏水性或與流動相極性差別很大的化合物進入色譜柱,尤其要避免導入顆粒雜質,以防止操作壓力增高,污染物難以或不能去除。
分析完畢後,採用與C18柱類似的凈化程序,首先用去離子水以0.6ml/min流速沖洗約20倍柱體積,然後用甲醇以相同流速沖洗約10倍柱體積,確保純甲醇飽和後密封保存。
對於長時間保存後的重新使用,重復上述步驟即可。
9. 離子交換樹脂氫型柱製作方法
1、樹脂裝柱
將樹脂裝入交換器中,用清水反洗樹脂,至出水澄清為止。通入 2 倍樹專脂體積的
5-8%NaCl溶液浸泡4-8h,再用屬清水洗到出水無色無味為止(如樹脂是新樹脂,也未失水,則可免去5-8%NaCl
溶液浸泡)。
2、陽離子交換樹脂
先通入兩倍樹脂體積的約 4%HCl 溶液,將後一倍再生液浸泡樹脂 4-8h,用清水洗到 pH 為 3-5 左右,再用兩倍樹脂體積的約 4%NaOH 溶液,將後一倍再生液浸泡樹脂 4-8h,用清水洗到 pH 為 8-9 左右。之後就可再生使用(通入三倍樹脂體積的約 4%HCl 溶液,將後一倍再生液浸泡樹脂 4-8h,用清水洗到 pH 為 5 -6)
如果嫌麻煩,也可以直接雙倍再生,即通入4倍樹脂體積的約 4%HCl 溶液,將後一倍再生液浸泡樹脂 4-8h,用清水洗到 pH 為 5 -6即可投入使用。
清洗水要注意原水中硬度是否偏高(最好採用軟化水),如果沒有條件採用軟化水沖洗,則建議免去酸鹼預處理過程,以免造成陽樹脂通過NaOH轉型後,用軟化水沖洗時,導致樹脂內部形成Ca(OH)2,Ma(OH)2沉澱,反而造成運行時鈉超標。