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超濾管使用前清洗

發布時間:2024-10-02 00:41:26

超濾離心管怎麼使用

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管(MWCO10kD)。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時,【取50ul國產Bradford溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mg/ml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測】,繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱,導致堵管。若發生沉澱,要確定沉澱的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,後者的方法是換不同的Buffer,直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續三次,最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多於500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,用黃槍頭(200ul)取,輕輕順著邊緣插入槍頭,輕輕吹打、混勻蛋白液,注意不要碰到超濾膜,然後吸取濃縮液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取,否則難度太大,有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中,沒過超濾膜,防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管,重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤洗幾次,【若管底有可見的蛋白沉澱,可以先加入水,然後用槍頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉澱懸起,然後倒掉,不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗,內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯,加至接近滿的MilliQ水,50ml管也加滿MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml
離心管,排出部分水,然後蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來說,按照上述步驟和注意事項,每根管用三四年不會壞。

❷ 浸沒式管式超濾膜如何進行清洗

管式超濾膜正確的清洗方法:
1、對於一般的膜孔不是特別細小的可拆式的回超濾濾芯,可直接拆開答用柔軟物質一邊擦拭一邊用清水沖洗。
2、用海綿球擦洗,根據膜管直徑大小,選擇合適的海綿球,利用專用設備通過膜管進行擦拭清洗,可以反復使用。
3、熱水沖洗法將水加熱到(30-40℃),然後沖洗膜表面,去除那些粘稠或者是熱溶的雜質效果很好。

❸ 選擇管式超濾膜需要注意的問題有哪些

超濾膜使用注意事項:
1、超濾系統要定期滅菌:超濾膜具有截留細菌的作用,但版卻不能殺菌,如果長期權使用不排除會影響到截留率現象的發生,雖然這種可能性比較低,但為保證產水水質而做好預防措施是必要的。因而,必須對過濾系統進行定期的滅菌,同時也要對周轉環境進行定期的滅菌。殺菌周期可根據具體的水質情況而定。
2、注意保護超濾組件:超濾組件屬於精密器材,因而在使用安裝時需要輕拿輕放,注意防護。組件停用時,需要先清洗干凈後再進行密封,在特別地區的冬天,還需要對組件進行防凍處理。
3、在使用超濾膜之前,要仔細閱讀使用說明,按照說明進行操作。
4、過濾系統組件數根據設計總透水量而定,因而在設計時,需要考慮可能影響到超濾組件透水量的相關因素。
5、超濾組件在出廠前會被放入保護液,因此在使用前需要進行沖洗,直至保護液被徹底清除。

❹ 超濾管怎麼重復使用

1、攜拿森首先用吸頭吸取一定量的0.1mol的NaOH清洗濾敏頃膜1-2次。
2、其次用雙蒸水沖洗濾膜2-3次。
3、最後將超辯畝濾管浸泡在20%乙醇里直至下次使用即可。

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