『壹』 請問羧甲基纖維素和DEAE纖維素分離蛋白有什麼區別
羧甲基纖維素是弱陽離子交換填料,要求使用時的pH值要低於目的蛋白質等電點起碼0.5個pH值單位,為了達到較好的分離效果,實際使用時最好是低於1個以上pH值單位。在低pH值下,有的不耐酸的雜質蛋白質會變性,屆時離心除去,可首先去除一部分雜質蛋白質。
DEAE纖維素是弱陰離子交換層析填料,要求使用時的pH值要高於目的蛋白質等電點起碼0.5個pH值單位,為了達到較好的分離效果,實際使用時最好是高於1個以上pH值單位。大多數蛋白質的等電點在6.0左右,可以耐受8.0,所以依據pH提高使得某些雜質蛋白質變性的做法多數情況下不可行。
這兩種填料的工作pH值不同,但都可以用氯化鈉來洗脫。交換基團不同,分離效果也不同,可以先用一種來純化,得到初步純化的產物之後再用另一種來純化。因為有些蛋白質不能耐受酸,所以我建議先用羧甲基纖維素弱陰離子交換層析,再用DEAE纖維素弱陽離子交換層析,產物的純度比單用一種時更高。
在對蛋白質的破壞方面,弱交換填料比強交換填料好,有的蛋白質用強離子交換來純化,蛋白質結合再交換之後會損失很多活力,但是弱離子交換則損失的活力較少。但是弱離子交換的解析度比強離子交換差一些。如果純化得不好,又有強離子交換的,就試一下吧。lxj341401(站內聯系TA)一個是陽離子交換填料,一個是陰離子交換填料,用哪個跟蛋白值的等電點pI還有所用緩沖液的pH有關,pH>pI時帶負電荷,蛋白質能吸附到陰離子交換填料,相反的用陽離子交換。所以能不能代替看具體情況了。悅迷008(站內聯系TA)Originally posted by 冼亮澱粉酶 at 2011-07-15 06:00:21:
這兩個填料雖然都是離子交換用的,但一個是弱陰一個是弱陽,效果不同,沒有一個能代替另一個的說法。
『貳』 我要分離純化一種未知酶,一切未知,想用凝膠層析和離子交換層析分離,不知選用什麼填料合適有好的建議
建議用離子交換層析。凝膠過濾層析流速慢,上樣量低,而且分離效果一般,凝膠回過濾答一般用於層析的後期包括除鹽,去除降解片段之類的。
離子交換一般就用到DEAE,因為大部分蛋白都偏酸。要是你的酶是鹼性蛋白,那就更好辦,上個CM柱,其他雜蛋白就留不下多少了。
所以先拿DEAE試試吧。
『叄』 沸石有什麼作用
天然沸石是一種新興材料,被廣泛應用於工業、農業、國防等部門,並且它的用途還在不斷地開拓。沸石被用作離子交換劑、吸附分離劑、乾燥劑、催化劑、水泥混合材料。
1、在石油、化學工業中,用作石油煉制的催化裂化、氫化裂化和石油的化學異構化、重整、烷基化、歧化;氣、液凈化、分離和儲存劑;硬水軟化、海水淡化劑;特殊乾燥劑(乾燥空氣、氮、烴類等)。
2、在輕工行業用於造紙、合成橡膠、塑料、樹脂、塗料充填劑和素質顏色等。在國防、空間技術、超真空技術、開發能源、電子工業等方面,用作吸附分離劑和乾燥劑。
3、在建材工業中,用作水泥水硬性活性摻和料,燒制人工輕骨料,製作輕質高強度板材和磚。
4、在農業上用作土壤改良劑,能起保肥、保水、防止病蟲害的作用。在禽畜業中,作飼料(豬、雞)的添加劑和除臭劑等,可促進牲口成長,提高小雞成活率。
5、在環境保護方面,用來處理廢氣、廢水,從廢水廢液中脫除或回收金屬離子,脫除廢水中放射性污染物。
6、在醫學上沸石用於血液、尿中氮量的測定。沸石還被開發成為保健用品,用於抗衰老,去除體內積累的重金屬。
7、在供應中沸石常用於砂糖的精製。
8、新型牆材(加氣混凝土砌塊)原料:隨著實心黏土磚逐步退出舞台,新型牆體材料應用比例目前已達到80%牆體材料供應企業以煤矸石、粉煤灰、陶粒、爐渣、輕質工業廢渣、重質建築垃圾、沸石等為主料,積極開發新型牆體材料。
9、在化學蒸餾或加熱實驗當中常用來防止暴沸,沸石的結構當中有大量的小孔,可作為氣泡的凝結核,使反應液平穩沸騰。可用敲碎至米粒大小的素燒瓷片代替。
10、在水產養殖中可以用作魚蝦飼料添加劑,也可以做魚塘修建材料,凈化水質。
『肆』 離子交換色譜法的原理,裝置及應用
原理:
離子交換色譜(ion exchange chromatography,IEC)以離子交換樹脂作為固定相,樹脂上具有固定離子基團及可交換的離子基團。當流動相帶著組分電離生成的離子通過固定相時,組分離子與樹脂上可交換的離子基團進行可逆變換。根據組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。
裝置:
(1)分離柱 裝有離子交換樹脂,如陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂或螯合離子交換樹脂。為了減小擴散阻力,提高色譜分離效率,要使用均勻粒度的小球形樹脂。最常用的陽離子交換樹脂是在有機聚合物分子(如苯乙烯-二乙烯基苯共聚物)上連接磺酸基官能團(─SO3─)。最常用的陰離子交換劑是在有機聚合物分子上連接季銨官能團(─NH4)。這些都是常規高交換容量的離子交換樹脂,由於它們的傳質速度低,使柱效和分離速度都低。C.霍瓦特描述了一種薄膜陰離子交換樹脂,它是在苯乙烯-二乙烯基苯共聚物核心上沉澱一薄層陰離子交換樹脂,就象雞蛋有一薄層外皮那樣,離子交換反應只在外皮上進行,因此縮短了擴散的路徑,所以離子交換速度高,傳質快,提高了柱效。同樣,在小顆粒多孔硅膠上塗一薄層離子交換材料也可得到相同類型的樹脂。螯合離子交換樹脂具有絡合某些金屬離子而同時排斥另一些金屬離子的能力,因此這種樹脂具有很高的選擇性。除了離子交換柱外,其他高效液相色譜柱也可用於分離離子。
(2)抑制柱和柱後衍生作用 常用的檢測器不僅能檢測樣品離子,而且也對移動相中的離子有響應,所以必須消除移動相離子的干擾。在離子色譜中,消除(抑制)移動相離子干擾的常用方法有兩種。
①抑制反應,用抑制反應來改變移動相,使移動相離子不被檢測器測出。離子色譜通常使用電導檢測器。在抑制反應中??綞匝衾胱佣?裕?把高電導率移動相的氫氧化物轉變成水,而樣品離子則轉變成它們相應的酸:
NaOH+H+─→Na++H2O
NaX+H+─→HX+Na+
在裝有強酸性陽離子交換樹脂的柱中進行抑制反應,使用一段時間後,這種樹脂就需要再生,很不方便。改用連接有磺酸基(─SO3H)的離子交換膜(陽離子交換膜)或用連接有銨基(─NH4)的離子交換膜(陰離子交換膜),就可以連續進行抑制反應。例如,陽離子交換膜可使陽離子通過它擴散過去,而陰離子則不能擴散過去。
1981年,T.S.史蒂文斯和斯莫爾等報道了中空纖維抑製法。這種纖維是由陽離子交換膜材料拉制而成。用這種方法不僅不需要再生抑制柱而且減小了峰的加寬,提高了柱效。一種比較新的膜技術是加一電場以加速離子的傳遞,該法與中空纖維法比較,其優點是反應時間短、交換能力高,並且可以用於陽離子和陰離子兩者。
②柱後衍生作用,將從柱子流出的洗出液與對被測物有特效作用的試劑相混合,在一反應器中生成帶色的絡合物(見配位化合物)。對衍生試劑最重要的要求是它們與被測物能生成絡合物,但不與移動相生成絡合物。柱後衍生法能用於測定重金屬離子,所用的衍生試劑有茜素紅S等。
(3)檢測器 分為通用型和專用型。通用型檢測器對存在於檢測池中的所有離子都有響應。離子色譜中最常用的電導檢測器就是通用型的一種。紫外-可見分光光度計是專用型的檢測器,對離子具有選擇性響應。可變波長紫外檢測器與電導檢測器聯用,能幫助鑒定未知峰,分辨重疊峰和提供電導檢測器不能測定的陰離子,如硫化物及亞砷酸中的陰離子的檢測。
在離子色譜中,電導檢測法總是和抑制反應配合使用。這種檢測器對分子不響應,如水、乙醇或者不離解的弱酸分子等。對於電導檢測器,一個重要的條件是溫度要穩定,所以檢測池要放在恆溫箱中,1982年H.薩托設計一種雙示差電導檢測器,消除了溫度變化對檢測的影響,可測定10-9摩爾的陰離子。
應用:
離子色譜主要用於測定各種離子的含量,特別適於測定水溶液中低濃度的陰離子,例如飲用水水質分析,高純水的離子分析,礦泉水、雨水、各種廢水和電廠水的分析,紙漿和漂白液的分析,食品分析,生物體液(尿和血等)中的離子測定,以及鋼鐵工業、環境保護等方面的應用。離子色譜能測定下列類型的離子:有機陰離子、鹼金屬、鹼土金屬、重金屬、稀土離子和有機酸,以及胺和銨鹽等。
『伍』 有關固相萃取填料的離子交換容量
名稱: Macro-Prep50系列離子交換填料
詳細信息
貨號 名稱 包裝 功能基團 載量mg/ml pH范圍 高溫消毒 最高流速cm/h
158-0040 Macro-Prep High Q 25ml ―N+(CH3)3 40(BSA) 1~14 可以 3000
156-0040 100 ml ―N+(CH3)3 40(BSA) 1~14 可以 3000
156-0041 500 ml ―N+(CH3)3 40(BSA) 1~14 可以 3000
156-0042 5L ―N+(CH3)3 40(BSA) 1~14 可以 3000
156-0043 10L ―N+(CH3)3 40(BSA) 1~14 可以 3000
158-0020 Macro-Prep DEAE 25 ml ―N+(C2H5)2 35 (BSA) 1~14 可以 3000
156-0020 100 ml ―N+(C2H5)2 35(BSA) 1~14 可以 3000
156-0021 500 ml ―N+(C2H5)2 35(BSA) 1~14 可以 3000
156-0022 5L ―N+(C2H5)2 35(BSA) 1~14 可以 3000
156-0023 10L ―N+(C2H5)2 35(BSA) 1~14 可以 3000
158-0030 Macro-Prep High S 25 ml ―SO3- 70(lgG) 1~14 可以 3000
156-0030 100 ml ―SO3- 70(lgG) 1~14 可以 3000
156-0031 500 ml ―SO3- 70(lgG) 1~14 可以 3000
156-0032 5L ―SO3- 70(lgG) 1~14 可以 3000
156-0033 10L ―SO3- 70(lgG) 1~14 可以 3000
158-0070 Macro-Prep CM 25 ml
―COO- 35 1~14 可以 3000
156-0070 100 ml ―COO- 35
1~14 可以 3000
156-0071 500 ml ―COO- 35
1~14 可以 3000
156-0072 5L ―COO- 35 1~14 可以 3000
156-0073 10L ―COO- 35 1~14 可以 3000
Macro-Prep 50系列:
在低壓和中壓下操作良好,在不同pH和離子強度時仍具有最小的體積變化。
l.對生物分子具有較高載量
2.對復雜生物混合物具有高解析度
3.堅硬的多聚物基質,為中壓介質中最耐壓者,從而流速最高
4.親水基質減少了非特異結合
5.大孔徑增強了離子進入位點
6.化學、機械和熱穩定性優異
7.孔徑均為50μm
『陸』 離子交換樹脂作為葯物載體應具備哪些優點
1、高效離子交換色譜 應用離子交換的原理,採用低交換容量的離子交換樹脂來分離離子,這在離子色譜中應用最廣泛,其主要填料類型為有機離子交換樹脂,以苯乙烯二乙烯苯共聚體為骨架,在苯環上引入磺酸基,形成強酸型陽離子交換樹脂,引入叔胺基而成季胺型強鹼性陰離子交換樹脂,此交換樹脂具有大孔或薄殼型或多孔表面層型的物理結構,以便於快速達到交換平衡,離子交換樹脂耐酸鹼可在任何pH范圍內使用,易再生處理、使用壽命長,缺點是機械強度差、易溶脹易、受有機物污染。 硅質鍵合離子交換劑以硅膠為載體,將有離子交換基的有機硅烷與基表面的硅醇基反應,形成化學鍵合型離子交換劑,其特點是柱效高、交換平衡快、機械強度高,缺點是不耐酸鹼、只宜在pH28范圍內使用。離子交換色譜是最常用的離子色譜。 2、離子排斥色譜 它主要根據Donnon膜排斥效應,電離組分受排斥不被保留,而弱酸則有一定保留的原理,製成離子排斥色譜主要用於分離有機酸以及無機含氧酸根,如硼酸根碳酸根和硫酸根有機酸等。它主要採用高交換容量的磺化H型陽離子交換樹脂為填料以稀鹽酸為淋洗液。3、離子對色譜 離子對色譜的固定相為疏水型的中性填料,可用苯乙烯二乙烯苯樹脂或十八烷基硅膠(ODS),也有用C8硅膠或CN,固定相流動相由含有所謂對離子試劑和含適量有機溶劑的水溶液組成,對離子是指其電荷與待測離子相反,並能與之生成疏水性離子,對化合物的表面活性劑離子,用於陰離子分離的對離子是烷基胺類如氫氧化四丁基銨氫氧化十六烷基三甲烷等,用於陽離子分離的對離子是烷基磺酸類,如己烷磺酸鈉,庚烷磺酸鈉等對離子的非極性端親脂極性端親水,其CH2鍵越長則離子對化合物在固定相的保留越強,在極性流動相中,往往加入一些有機溶劑,以加快淋洗速度,此法主要用於疏水性陰離子以及金屬絡合物的分離,至於其分離機理則有3種不同的假說,反相離子對分配離子交換以及離子相互作用。 二、離子色譜系統IC系統的構成與HPLC相同,儀器由流動相傳送部分、分離柱、檢測器和數據處理4個部分組成,在需要抑制背景電導的情況下通常還配有MSM或類似抑制器。其主要不同之處是IC的流動相要求耐酸鹼腐蝕以及在可與水互溶的有機溶劑(如乙腈、甲醇和丙酮等)中不溶脹的系統。因此,凡是流動相通過的管道、閥門、泵、柱子及接頭等均不宜用不銹鋼材料,而是用耐酸鹼腐蝕的PEEK材料的全塑IC系統。離子色譜的最重要的部件是分離柱。柱管材料應是惰性的,一般均在室溫下使用。高效柱和特殊性能分離柱的研製成功,是離子色譜迅速發展的關鍵。
『柒』 高效液相色譜的原理及使用方法
高效液相色譜是色譜法的一個重要分支,以液體為流動相,採用高壓輸液系統,將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內各成分被分離後,進入檢測器進行檢測,從而實現對試樣的分析。
使用方法:色譜柱的填料和流動相的組分應按各品種項下的規定.常用的色譜柱填料有硅膠和化學鍵合硅膠。後者以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用辛基鍵合硅膠次之,氰基或氨基鍵合硅膠也有使用;離子交換填料用於離子交換色譜;凝膠或玻璃微球等,用於分子排阻色譜等。注樣量一般為數微升。除另有規定外,柱溫為室溫,檢測器為紫外吸收檢測器。
在用紫外吸收檢測器時,所用流動相應符合紫外分光光度法項下對溶劑的要求。
正文中各品種項下規定的條件除固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任意改變外,其餘如色譜柱內徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組分的比例、柱溫、進 化學鍵合固定相反應
樣量、檢測器的靈敏度等,均可適當改變
以適應具體品種並達到系統適用性試驗的要求。一般色譜圖約於20分鍾內記錄完畢。2.系統適用性試驗
按各品種項下要求對儀器進行適用性試驗,即用規定的對照品對儀器進行試驗和調整,應達到規定的要求;或規定分析狀態下色譜柱的最小理論板數、分離度和拖尾因子.
『捌』 離子層析中nacl能用硫酸銨代替嗎
離子層析中nacl能用硫酸銨代替
陰離子交換柱的填料是正電填料,在低鹽條件下可以通過電荷相互作用吸附樣品中的陰離子和負電荷物質(如DNA).這些帶負電的物質由於其帶電量不同,分子大小不同,因而與正電填料之間的結合力也就不同.用梯度的氯離子(一般用氯化鈉梯度,例如從100mM氯化鈉線性梯度升高到1M氯化鈉)洗脫掛柱樣品時,氯離子會和結合上的物質競爭結合正電填料,伴隨著氯離子濃度的不斷升高,氯離子的競爭作用越來越強,與填料結合的物質會按照親和力從弱到強依次洗脫下來,形成獨立的洗脫峰,從而將這些物質分開.
陽離子交換柱與之正好相反,柱子填料為負電荷,用鈉離子洗脫結合的正電物質.