trishcl過濾除菌對濾膜的要求

A. 微孔濾膜孔徑0.22和0.45微米分別能過濾什麼主要的微孔濾膜孔徑就這兩種嗎我看網上多數都是這兩種

0.45微孔濾膜能過濾微米除顆粒和大多數細菌微生物，0.22微孔濾膜可以達到GMP或者葯典規定的除菌99.99%的要求。

其他孔徑：

3.0-10.0μm：RO脫鹽前之保安過濾；

0.6-0.8μm：大劑量注射液、大輸液中的微粒過濾，啤酒、飲料過濾，油類光刻膠、噴漆溶劑等的澄清過濾。

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注意事項：

1、 為保護延長濾膜的使用壽命,可用同等大小的濾紙或絹綢布(應先用質量濃度20 g·L - 1磺酸鈉溶液煮沸絹綢布約30 min，然後用注射用水清洗干凈)放在濾膜上,防止濾膜破裂。

2、微孔濾膜之孔徑為錐體狀,光滑的一面孔徑小為正面;粗糙的一面孔徑大為反面，安裝時應將正面(光面)朝上，反面(暗面)朝下，否則易被雜質阻塞孔徑,影響濾速。溫度低時應將處理好的濾膜放於與葯液溫度相同的注射用水中浸泡5～10 min，可避免因溫差使濾膜抗拉強度降低而導致破裂現象。

3、用作起泡點的測定：測定起泡點壓力可以反映微孔濾膜的孔徑大小,這與被濾過的葯液質量密切相關，也是保證微孔濾膜質量的一種重要手段。

使用的微孔濾膜應事先放在70℃左右的注射用水中浸泡1 h。將水傾出後再用溫注射用水浸泡過夜備用。臨用時取出用注射用水淋洗干凈，即可裝入過濾器中使用安裝。時防止濾膜裝歪泄漏。

4、若發現微孔濾膜有小洞孔或小裂縫時,可用原不用的破濾膜漂洗干凈後烘乾，然後撕碎放於少量丙酮的小杯中，攪拌成糊狀粘液,將此粘液滴於平放濾膜的小洞孔或小裂縫處，不宜過多粘液覆蓋而稍大即可，揮干後則可繼續使用而不影響。

B. 濾膜標准品是不是指這個濾膜的含量是有標准值的

問：最近要做一些培養基，有一些糖類需要過濾除菌，但不知道怎麼操作，還需要什麼輔助設備？

答：你只要有濾膜和配套的過濾器就可以了，一般在超凈工作台上進行。濾膜用0.22微米或0.45微米兩種規格，指的是濾膜的孔徑大小吧。一般0.22就夠了！

答：如果溶液的量比較大，超過500ml，可以採用已滅菌的抽濾瓶，預先墊好0.22um 的濾膜。抽濾瓶滅菌前要檢查封口用紗布或棉花堵牢，使用時，不用在無菌室中進行，只要保證收集瓶無菌狀態就可以。抽濾後，過濾好的溶液在無菌條件下倒進已滅菌的空試劑瓶中。

如果用小量的溶液過濾，無菌室內用一次性注射器和一次性0.22um濾膜（millipore或pall都有賣）就可以。

答：看過濾的量，如果量小，用注射器加濾器、0.22微米濾膜過濾，濾器加上濾膜後蓋緊，稍旋松，飯盒密封100度蒸餾水煮沸30分鍾滅菌，用來承接無菌糖水的瓶需高壓。用時在無菌操作台上操作，並先旋緊濾器，注意濾器外流下去的哪怕一滴也會造成染菌；過濾應該是費力的，如果感覺很輕松，則濾膜已破。0.45微米的濾膜一般用於兩次過濾的第一次，以防止0.22堵塞。注射器，若能高壓更好些。

如果量大，正壓可用蠕動泵接皮管接不銹鋼濾器大張濾膜，這些都是要高壓的。負壓可用抽濾。

C. 請問制備培養基時如何過濾除菌

1、滅菌方法
培養基的滅菌方法主要有兩種，高壓除菌及.22um微孔濾膜過濾除菌。與過濾相比，高壓滅菌的工作強度小，成本較低，但易造成營養成分的流失，而且在多次加樣（無菌谷氨醯胺溶液，無菌碳酸氫鈉溶液等）過程中容易造成二次污染。大多數培養基採用0.1～0.2μm孔徑的微孔濾膜進行過濾滅菌，並且已成為培養基除菌的發展方向，它可低限度地減少培養基的營養損失。
1.1 高壓滅菌

某些培養基（如MEM）可進行高壓滅菌，例如清大天一的MEM培養基中的MD605、MD609等。這類培養基一般不含有L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉，一般是在培養基高壓滅菌後加入L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉的無菌的液體。另外可高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨醯-L-谷氨醯胺）可代替L-谷氨醯胺。
可高壓滅菌的培養基在121℃、15psi，15分鍾的條件下完全可達到滅菌效果及營養成分的最小損失，不需將滅菌時間延長。為保證高壓滅菌的效果，滅菌設備的驗證很關鍵。
1.2 過濾滅菌
可供過濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。一般情況下採取正壓過濾，正壓過濾較之負壓過濾具有流速高、過濾快、不易污染，可避免蛋白質產生大量氣泡等優點。一般使用過濾器可參照各供應商的產品說明書。
目前大多數實驗室和制葯企業採用微孔濾膜濾器（如Zeiss濾器）或立式微孔濾器（Millipore、Pall）除菌。微孔濾膜濾器為不銹鋼，中間可夾放0.22um濾膜。使用這種濾器最重要步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。如在使用Zeiss濾器時，先要用培養用水將濾膜充分潤濕，在安裝濾膜時可在其上放置一層定性濾紙再固定。消毒時旋鈕不要扭太緊，凡與空氣接觸部位都要包好（可用牛皮紙、紗布、無紡布等）；高壓滅菌後，在無菌環境中立即將旋鈕扭緊。過濾除菌結束後，要打開濾器，檢查濾膜是否完整，如果濾膜破裂，需重新進行過濾除菌過程。立式微孔濾器可以選用不同的微孔濾柱體積，因為濾膜的折疊，膜面積顯著增大，液體處理量大，而且不容易發生堵塞現象。

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E. 過濾除菌操作時，將菌液注入濾器過濾，時間不宜過長，壓力控制在多少為宜

控制在200～500mmHg。

過濾除菌法為用物理阻留的方法將液體或空氣的細菌除去，以達到無菌目的。所用的器具為含有微小孔徑的濾菌器。主要用於血清、毒素、抗生素等不耐熱生物製品及空氣的除菌。常用的濾菌器有薄膜濾菌器、陶瓷濾菌器、石棉濾菌器、燒結玻璃濾菌器等。

利用濾膜過濾去除細菌的方法。常用的有熔結玻璃細菌濾器、火棉膠、硝化纖維素濾膜等。用最大孔徑不超過1nm的過濾器可得到無菌濾液，常用於對熱不穩定的物質的除菌。空氣或其他氣體也可通過棉花或超細纖維膜達到除菌的目的。

過濾除菌法分為絕對過濾和深層過濾。絕對過濾為過濾介質的濾孔小於固體顆粒，把顆粒截留；深層過濾介質濾孔不一定小於固體顆粒，為藉濾層內的曲折通道，把顆粒截留。

當含有微生物顆粒的空氣通過濾層時，空氣流僅能從纖維間的間隙通過，由於纖維縱橫交錯，層層疊疊，迫使空氣流不斷改變運動方向和速度。由於微生物顆粒的慣性大於空氣，因而當空氣流遇阻而繞道前進時，微生物顆粒未能及時改變它的運動方向，而撞擊並被截留於纖維的表面。

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由於黃酒為一種非蒸餾酒，未經處理的原酒中含有大量的渾濁物、膠體物、細菌及其它微生物。為提高黃酒的品質，延長存放時間，必須對黃酒進行過濾滅菌後方可投入市場銷售。採用過濾除菌法替代傳統的蒸汽滅菌法，由於在較低溫度下即可出去大腸桿菌及其它雜菌、懸浮雜質，對降低原材料消耗和生產成本，提高黃酒的品質有著重要的作用。

使用過濾法去除空氣中的微生物為一種比較簡易的空氣消毒方法。雖然經過濾空氣尚不易達列完全滅菌，但由過濾處理中一般不使用熱力和消毒劑，因此為人們所樂於接受。門前該法已普遍用於建築物均通風、個人防護和生物製品工業中。

F. 我用tris-hcl溶液提取的樣品，問上液相色譜前用有機濾膜過濾還是無機濾膜過濾

保險期間還是用有機膜好，水系膜可以用於不超過10%的有機相過濾。