陰離子交換色譜柱純化蛋白質

A. 蛋白質純化技術的方法有哪幾種

電泳是蛋白純化過程中一種檢測方式。
主要步驟：
第一步富集：如果是有標簽的蛋白，一般用親和色譜（affinity chromatography）是利用生物大分子間所具有的特異性親和能力進行富集，然後用咪唑洗脫。要是沒有標簽的，基本是先超濾濃縮，然後再通過鹽析的方式去富集。

第二步初級分離：主要是利用離子交換色譜法，是通過蛋白表面電荷來分離。樓上的說的很清楚。

第三步精細純化：主要通過分子篩，通過蛋白空間結構和分子量不同來達到分離效果。

B. 設計一個ph穩定范圍已知的蛋白分離純化實驗，利用那個類型的離子交換柱

如果不限定純化方法，可以考慮親和層析或離子交換，但根據你問題的意思，是選定離內子交換。容
此時就要考慮你蛋白的等電點了，如果等電點在你穩定pH之上，就用陽離子交換柱：
設計陽離子交換層析：將你的樣品置換到你所指的穩定pH的running
buffer。同時裝柱，平衡，然後上樣，平衡，洗脫（因為你的pH不穩定，建議鹽洗脫），收峰。得你的蛋白；
如果你的等電點在穩定pH之下，就用陰離子交換柱，其步驟如上，只是改變柱子類型。

C. 離子交換介質的結構

使用離子交換色譜進行細分級分離是較為常見的一種蛋白純化方式。它是根據蛋白質的電荷不同來分離蛋白質混合物，被分離的目的蛋白所攜帶的電荷能與離子交換劑中所帶的相反電荷相結合，而且這兩者之間的結合作用是可逆的，通過逐漸增加離子強度或改變洗脫液PH值的方式處理色譜柱，離子交換劑上結念差合的目的蛋白便可與洗脫液中的離子發生交換而被洗脫到溶液當中。由於不同蛋白質的電荷不同，其與離仔則皮子交換劑的結合能力也不同，所以根據蛋白洗脫到溶液中的先後順序來進行提取，就可以輕松分離出我們需要的目標蛋白。

離子交換劑的介質種類還可分為離子交換樹脂、離子交換纖維素和離子交換凝膠等。強離子交換樹脂保持離子化的PH值范圍較寬，而弱離子交換樹脂若想保持離子化，就只能在很窄的PH值范圍內進行處理。離子交換色譜的優點是具有極高的解析度，因此可以通過放大規模的方式直接應用於工業生產中。盯返根據數據統計結果可知，大多數蛋白質的靜電荷是為負值，因此陰離子交換色譜的應用在純化蛋白領域的最為廣泛。選擇離子交換介質時，首先要考慮的一點就是目的蛋白的分子大小，因為蛋白分子的大小不但會影響介質上的帶電基團，還會影響介質對蛋白分子的動力載量，從而影響分離的效果和速度。

D. deae柱子適合純化哪些蛋白

DEAE是陰離子交換柱，一般適合於等電點比較低的酸性蛋白。
另外DEAE在結合內毒素上有很好的效果，所以在很多蛋白去除內毒素時可以用到DEAE。

E. 某蛋白質等電點為8.14,如採用離子交換色譜法來純化,如何選擇填料和緩沖體系

我的話，第一步會選擇pH7.0-7.4左右過陰離子交換，讓大多數雜蛋白（大多數雜蛋白pI在6左右）、核酸、色素等雜質結合，收集流穿液，此時蛋白溶液的純度和澄清度會大大提高，再校pH7.0或更低pH過陽離子交換進行純化。講究一點的話，在緩沖選擇上可以區分一下陰陽離子緩沖，多數情況影響不大，不必糾結。

F. 蛋白質分離純化的四種方法

1、鹽析法：

鹽析法的根據是蛋白質在稀鹽溶液中，溶解度會隨鹽濃度的增高而上升，但當鹽濃度增高到一定數值時，使水活度降低，進而導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，最終引起蛋白質分子間互相凝聚並從溶液中析出。

2、有機溶劑沉澱法：

有機溶劑能降低蛋白質溶解度的原因有二：其一、與鹽溶液一樣具有脫水作用；其二、有機溶劑的介電常數比水小，導致溶劑的極性減小。

3、蛋白質沉澱劑：

蛋白質沉澱劑僅對一類或一種蛋白質沉澱起作用，常見的有鹼性蛋白質、凝集素和重金屬等。

4、聚乙二醇沉澱作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質發生沉澱作用。

(6)陰離子交換色譜柱純化蛋白質擴展閱讀：

蛋白質是生命的物質基礎，是有機大分子，是構成細胞的基本有機物，是生命活動的主要承擔者。沒有蛋白質就沒有生命。氨基酸是蛋白質的基本組成單位。它是與生命及與各種形式的生命活動緊密聯系在一起的物質。

機體中的每一個細胞和所有重要組成部分都有蛋白質參與。蛋白質占人體重量的16%~20% ，即一個60kg重的成年人其體內約有蛋白質9.6~12kg。

人體內蛋白質的種類很多，性質、功能各異，但都是由20多種氨基酸（Amino acid）按不同比例組合而成的，並在體內不斷進行代謝與更新。

G. 蛋白純化陰離子交換，緩沖液帶什麼電荷

既然是陰離子交換，就要讓目標蛋白帶負電，那麼緩沖液PH就要大於等電點。緩沖體系的選擇也很重要，一般用TRIS-HCl，特別是弱陰離子柱不可選用帶負電強的磷酸鹽緩沖液，否則上樣液中被交換的將是磷酸根而不是目標蛋白。一般用NaCl平衡後上樣進行離子交換，然後再用較強的陰離子洗脫。

H. 離子交換層析中流出物質順序是什麼

若用離子交換層析分離物質，以蛋白質為例，離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂；而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。

由於蛋白質也有等電點，當蛋白質處於不同的pH條件下，其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質，所以這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。

反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質，結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。

(8)陰離子交換色譜柱純化蛋白質擴展閱讀：

對於離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉澱的顆粒，以保證有較好的均勻度，對於已溶脹好的產品則不必經這一步驟。

溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀鹼處理，使之成為帶H+或OH-的交換劑型。陰離子交換劑常用「鹼-酸-鹼」處理，使最終轉為-OH-型或鹽型交換劑；對於陽離子交換劑則用「酸-鹼-酸」處理，使最終轉為-H-型交換劑。

梯度不要上升太快，要恰好使移動的區帶在快到柱末端時達到解吸狀態。目的物的過早解吸，會引起區帶擴散；而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。