過濾流動相視頻

A. 為什麼液相色譜實驗中流動相和待測樣品都需要過濾

因為要過濾掉流動相和待測樣品裡面的不溶性物質和氣泡。防止它們堵住儀器。

很多東專西不是你看著澄清就真屬的干凈。液相的管路很細，還有色譜柱的孔徑也很小，萬一堵住了就報廢了。所以一定要過濾。
流動相不單要過濾掉不溶物，還有就是氣泡。這些氣泡可能會堵住泵頭，堵住色譜柱，就算哪兒都不會堵上也會導致流速不準確，柱壓不穩定，基線波動等等。所以一定要過濾。

你的色譜柱是5um粒徑的，用4.5um孔徑濾膜就可以了。如果色譜柱粒徑更小，那麼也應該選擇孔徑更小的濾膜。

另外，如果你的流動相和待測樣品是純的色譜純有機相，其實就沒必要過濾了。

B. 請問HPLC是做什麼的原理操作方法

HPLC是高效液相色譜，英文全稱是High Performance Liquid Chromatography。該方法在化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中被用來做重要的分離分析技術。

用途：高效液相色譜更適宜於分離、分析高沸點、熱穩定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質，因而廣泛應用於核酸、肽類、內酯、稠環芳烴、高聚物、葯物、人體代謝產物、表面活性劑，抗氧化劑、殺蟲劑、除莠劑的分析等物質的分析。

原理：高效液相色譜以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離後，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析和分離。

操作方法：如下圖所示，溶劑貯器中的流動相被泵吸入，經梯度控制器按一定的梯度進行混合然後輸出，經測其壓力和流量，導入進樣閥（器）經保護柱、分離柱後到檢測器檢測，由數據處理設備處理數據或記錄儀記錄色譜圖，餾分收集器收集餾分，廢液瓶收集廢液。

(2)過濾流動相視頻擴展閱讀：

液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經典液相色譜法，此方法柱效低、時間長（常有幾個小時）。高效液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經典液相色譜法的基礎上，於60年代後期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。

HPLC根據固定相和流動相的成分分為正相色譜和反向色譜。

正相色譜法

採用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動相為相對非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節組分的保留時間。常用於分離中等極性和極性較強的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。

反相色譜法

一般用非極性固定相（如C18、C8)；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。適用於分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用最為廣泛，據統計，它占整個HPLC應用的80%左右。

參考資料：網路-高效液相色譜

C. 液相色譜所用流動相使用時應注意哪些問題

1、流動相恢復到室溫後使用。流動相溫度與室溫相差時，流動相在恢復到室溫前，基線水平很難穩定，特別是發生漂移，也容易產生氣泡等現象。水與有機溶劑混合時，混合液變化大，往往會與室溫相差很大，務必注意。

2、做HPLC流動相的試劑應用HPLC級的、水應用二次蒸餾水，水相流動相需經常更換，防止長菌變質。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）並不合適、尤其是做梯度洗脫時，水中的不純物會成為鬼峰，從而干擾分析結果。

3、流動相的pH值過高或過低，流動相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學破壞，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的。

4、用緩沖鹽做流動相時，在使用前和使用後都要用水清洗流路，絕對禁止將緩沖溶液留在流路中靜置或更長時間。

5、在更換兩種互不相容的流動相時，中間要用異丙醇溶液清洗過渡。例如：先用甲醇水做流動相，然後再用正己烷做流動相時，一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然後用正己烷沖洗異丙醇，反之也是一樣。在更換流動相時還要考慮色譜柱是否更換。

D. 高效液相色譜的流動相要經過哪些處理

流動相要先過濾，超聲脫氣後方可使用。
另外選用試劑是要選用色譜級的專，過濾時選擇合屬適的濾膜。流動相最好現配現用，不要保存太長時間。
使用旋轉蒸發儀上的真空泵 抽空氣20min，可以達到脫氣的作用。使用濾膜過濾掉雜質。
流動相必須過濾膜，用前要超聲除氣泡半個小時左右，否則基線不穩
儀器和色譜柱先要用有機溶劑（如乙腈等）好好清洗一下，待基線平衡後才能進一步工作，乙腈和水混合的流動性最好先超聲抽濾脫氣，准備工作做好了會節省好多時間。
若用色譜純的乙腈和超純水做流動相，流動相可以不用過濾膜，但超純水需要超聲約30分鍾脫氣。

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E. 為什麼高效液相色譜儀的流動相在使用前必須過濾，脫氣

用於高效液相色譜的流動相必須事先除氣，否則容易在系統中逸出氣泡，影響泵的工作。氣泡還會影響色譜柱的分離效率、檢測器的靈敏度、基線的穩定性，甚至使其無法檢測。

噪音增加，基線不穩定，突然跳躍。此外，溶解在流動相中的氧可以與樣品、流動相甚至固定相（如烷基胺）發生反應。溶解氣體也會引起溶劑ph值的變化，從而導致分離或分析結果的誤差。

常用的除氣方法有加熱沸騰、抽真空、超聲波、吹氦等。

高效液相色譜（hplc）是色譜的一個重要分支。以液體為流動相，高壓輸液系統，將不同極性的單溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入固定相色譜柱。分離柱中的組分後，用檢測器檢測。實現了樣品的分析。

(5)過濾流動相視頻擴展閱讀：

液相色譜-質譜聯用（LC-MS）可增加額外的分析能力，准確識別和量化細胞和組織裂解物、血液、血漿、尿液和口服液等復雜樣品基質中的微量化合物。

流動相和固定相都是液體。流動相與固定相應不相容（極性不同，避免固定液流失），界面清晰。當樣品進入色譜柱時，溶質分布在兩相之間。達到平衡後，遵循高效液相色譜的計算公式。

公式中cs溶質在固定相的濃度、cm溶質在流動相的濃度、vs固定相的體積和vm流動相的體積。llpc與gpc有相似之處，即分離順序取決於k值較大的組分的保留值，但也存在差異。在gpc中，流量對k的影響較小，而llpc流量對k的影響較大。

F. 過濾操作的詳細過程

過濾操作要求「一貼、二低、三靠」。

一貼

即使濾紙潤濕，緊貼漏斗內壁，不殘留氣泡。（防止氣泡減慢過濾速度。）

二低

1、濾紙邊緣略低於漏斗邊緣。

2、液面低於濾紙邊緣。（防止液體過濾不凈。）

三靠

1、傾倒時燒杯杯口要緊靠玻璃棒上。

2、玻璃棒下端抵靠在三層濾紙處。

3、漏斗下端長的那側管口緊靠燒杯內壁。

(6)過濾流動相視頻擴展閱讀：

注意事項

1、燒杯中的混合物在過濾前應用玻璃棒攪拌，然後進行過濾。

2、過濾後若溶液還顯渾濁，應再過濾一次，直到溶液變得透明為止。

3、過濾器中的沉澱的洗滌方法：用燒瓶或滴管向過濾器中加蒸餾水，使水面蓋沒沉澱物，待溶液全部濾出後，重復2~3次。

4、斗架燒杯玻璃棒，濾紙漏斗角一樣：「斗」指漏斗；「架」指漏斗架。這兩句點明了過濾操作實驗所需要的儀器：漏斗、漏斗架、燒杯、玻璃棒、濾紙，並且強調濾紙折疊的角度要與漏斗的角度一樣。

5、過濾之前要靜置：意思是說在過濾之前須將液體靜置一會兒，使固體和液體充分分離。

6、三靠兩低不要忘：意思是說在過濾時不要忘記了三靠兩低。「三靠」的意思是指漏斗頸的末端要靠在承接濾液的燒杯壁上，要使玻璃棒的底端靠在濾紙上，盛過濾液的燒杯嘴要靠在玻璃棒上；「兩低」的意思是說濾紙邊緣應略低於漏斗的邊緣，所倒入的濾液的液面應略低於濾紙的邊緣。