① 10%新生牛血清的DMEM完全培養配置方法
你培養基買的液體的還是粉狀的?如果液體的加10%血清不就行了,如果粉狀的要用ddH2O配,配好調PH值,然後0.22uM濾膜過濾除菌,再加10%血清就行了
如果你什麼都沒有買准備自己配,我就無語了……
② 如何配DMEM培養基
這里是一份GIBCO的低糖DMEM粉劑配製說明(普通高糖的DMEM培養基配法是一樣的):
TO PREPARE 1*LIQUID
1. Measrue out 5% less distilled water than desired total volume of medium using a mixing container that is as close to the final volume as possible.
2. Add powdered medium to 15 to 30℃ (room temperature)water with gentle stirring. (Do not heat water)
3. Rinse out inside of package to remove all traces of powder.
4. Add 3.7g of NaHCO3 per liter of medium.
5. Dilute to a desired volume with water. Stir until dissolved. (Do not over-mix)
6. Adjust pH of medium to 0.20.3 below desired final working pH* use of IN NaOH or IN HCl is recommended. (Add slowly with stirring) After pH has been adjuste keep container closed until medium is filtered.
7. Sterilize immediately by membrane filtration. (Positive pressure recommended) *pH unite will usually rise 0.1-0.3upon filtration.
另外,在李玲、李雪峰編著的《細胞生物學實驗》中配製方法如下:
1 制備新鮮三蒸水或Millipore超純水。
2 稱取所需量的乾粉培養基,加入約終體積一半的三蒸水中;若配製一個包裝的培養液,在將整個包裝的乾粉倒入三蒸水後,需用水洗包裝袋內面2次,倒入培養液中,以保證所有乾粉都溶解成培養液。磁力攪拌或人工攪拌使之完全溶解。
3 根據包裝袋上的要求補加所需量的碳酸氫鈉;根據實驗需要,添HEPES(5-20mmol/L)、谷氨醯胺和其他特殊物質。
4 加水定容到終體積。
5 必要時用1 mol/L 鹽酸和1 mol/L 氫氧化鈉調節pH。
6 用無菌0.22um濾膜過濾除菌,分裝於無菌血清瓶中,4℃冰箱保存。 配製好的培養液用前加入100U/mL青黴素和100U/mL鏈黴素,並根據需要加入血清(5%-20%)。
③ DMEM培養液中加血清時過膜的目的是什麼
除去污染和雜質,同時過濾膜後可以除菌,因為DMEM不能高壓滅菌,對於不能經過高壓蒸汽滅菌法滅菌的試劑都需要採用濾膜除菌方法。濾膜分0.22和0.45的,0.45除顆粒和大多數細菌微生物,0.22可以達到GMP或者葯典規定的除菌99.99%的要求,希望對你有幫助,望採納。
④ 20%BSA應該怎麼配置
在化學上有二種百分比濃度,一是重量/體積百分濃度,另一種是重量/重量百分濃度,二種配法如下:
一、重量/體積百分濃度:先稱取20gBSA用適量水(固液總體積小於100ml,) 完全溶解,冷卻後補加水至100ml刻度,攪勻或搖勻。這是最常用的方法。
二、重量/重量百分濃度:先稱取20gBSA,再稱取用適量水(固液總體積小於100g)完全溶解,冷卻後補加水至總重為120g,攪勻或搖勻。
⑤ DMEM培養基為什麼要通過0.2um微膜過濾
DMEM培養基中含有大量的不耐高壓高溫的有機物,無法通過溫度來滅菌,只能通過過濾除菌,而過濾除菌通常採用0.2微米孔徑的過濾膜過濾。