amicon超濾系統

❶ 蛋白質的純化實驗

一、儀器設備
色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、鐵架、鐵夾及水平儀；部分收集器（fraction collector, 需准備干凈試管約100 支）；濃縮用離心機 （低速5,000 rpm）；濃縮用離心管Centriprep-30 （Amicon 4322） 請注意其使用方法。

二、葯品試劑
膠體Sephacryl S-300 （Pharmacia）：a. 預先以緩沖液buffer A-150 平衡好，並且使完全沈降後的膠體體積，佔全部體積的七至八成；要先預估好膠體的使用量。b. 膠體溫度要與操作場所的溫度一致，否則溫度變化會產生氣泡。c. Sephacryl 系列膠體有相當大的吸附力，因此要在緩沖液加入0.15 M 以上的NaCl 以除去非專一性吸附。Buffer A-150:注意使用時的溫度要與管柱膠體的溫度一致標準分子量組合 （Bio-Rad 151-1901）：溶於1 mL 後每組取0.4 mL.含有thyroglobulin （670 kD）， bovine gamma globulin （158 kD）， chicken ovalbumin （44 kD）， equine myoglobin （17 kD）， vitamin B12 （1 350）。

三、管柱裝填

1. 以純水沖洗玻璃管柱 （以純水上下沖洗即可，嚴禁使用試管刷）；並請了解管柱的構造與拆裝方法，垂直架好管柱，以軟管連接部分收集器，並以bufferA-150 試看管路是否通暢；可以用止血鉗或長尾文書夾夾住出口軟管，則可控制溶離的進行。 注意系統的擺設要適當，不要裝置於交通要沖。

2. 依預估量取出Sephacryl 膠體，注意膠體的溫度與緩沖液是否已平衡；將瓶中的膠體上下震盪，使的完全懸浮，但勿產生太多氣泡。

3. 在管柱內加入約10 cm 高緩沖液，然後將膠體慢慢沿著管壁倒入管柱，一直加到管柱頂端，開始流洗後膠體沈降很快。當膠體上方的液面逐漸降低時，可於頂端添加膠體，以達所要高度；膠體高度約90 cm。

4. 膠體完全沈降後，小心以buffer A-150 加滿管柱，關閉出口，裝上頂端端蓋並連通緩沖液瓶，打開出口以重力流洗。 調整緩沖液瓶高度，使流速約每五~六秒一滴，並設定收集體積為2.5 mL/tube。

5. 膠柱流洗約100 mL 後，關閉出口，拆開頂端端蓋，先以滴管吸出膠體上方的溶液到剩約1 cm 高，注意勿破壞膠體表面平整； 然後打開出口，使液面下降至膠體面，再關閉出口，准備注入樣本。

四、樣本色析進行

1. 以微量移液器或滴管吸取樣本 （樣本體積不得超過膠體總體積的3%），沿著膠體上方管壁緩慢加入，注意切勿破壞膠體的平整表面。

2. 打開出口，同時開啟部分收集器；當樣本完全沒入膠體時，關閉出口，緩緩加入與樣本相等體積的buffer A-150，打開出口待其慢慢進入膠體中，如此重復二次。不得擾動膠體表面，造成凹陷。

3. 暫時關閉出口，將液面高度加滿至管柱頂端，並把頂端端蓋鎖上；然後打開出口開始溶離，調整緩沖液瓶的高度，使流速為6 s 一滴。

4. 要留心觀察前面幾個分劃，確定整個系統運轉無礙，小心部分收集器最容易出問題。管柱預計將流洗過夜，收集約80 管。
10） 收集試管，進行蛋白質定量分析以及GUS 活性測定，並請作圖。

5. 收集GUS 活性區，以Centriprep-30 濃縮至10 mL 後，加buffer A-0 稀釋至20 mL，保留100 μL。

6. 管柱請再以buffer A-150 流洗100 mL 後，小心放置一旁，准備以後進行分子量測定。

五、分子量測定

1. 進行分子量測定前一天，請先以buffer A-150 流洗100 mL，並檢查膠柱內有無氣泡產生，若有嚴重的氣泡或乾裂，必須重新裝填管柱。

2. 取標準分子量溶液0.4 mL,加上純質目標酶0.5 mL （以親和層析法所得的AF 部份），如上法注入管柱中，立刻開始進行膠體過濾，並收集各分劃。請依循上述所有管柱及分劃收集器的操作要點。

3. 收集所得，進行蛋白質定量分析，可定出數個蛋白質尖峰，以作為分子量依據；另以目測法，決定紅色高峰的管數，則可定出vitamin B12的溶離管數。利用以上數據，可畫出分子量與溶離管數間的直線關系，作為分子量判定的標准校正線。

4. 同樣的一批分劃，請進行酶活性分析 （GUS），則可定出酶的溶離體積，對照上述標准校正線，則可求出酶的分子量。

六、拆除管柱及保存膠體
1. 若管柱長期不用，應當自管柱中取出膠體，以緩沖液清洗後，置冷藏室中保存，但絕對不要放在冷凍箱中。膠體若裝填太緊，有時可能不易取出，要有耐心地以緩沖液慢慢沖出來。

2. 膠體可以加0.01% NaN3防止黴菌生長，但使用前記得要洗去；再度使用時，請檢查膠體中有無灰黑色黴菌顆粒，若有結塊而不易打散者，也不要使用。

❷ 超濾離心管怎麼使用

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱，導致堵管。若發生沉澱，要確定沉澱的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，後者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾），再濃縮至1ml左右，連續三次，最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多於500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然後吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉澱，可以先加入水，然後用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉澱懸起，然後倒掉，不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml
離心管，排出部分水，然後蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。

❸ 血液凈化的其他幾種方法

主要技術：血液透析血液濾過脈管濾過血液灌流置換療法腹膜透析

1、血液透析

血液透析系將患者血液引入透析器中，利用半滲透膜兩側溶質濃度差，經滲透，擴散與超濾作用，達到清除代謝產物及毒性物質，糾正水、電解質平衡紊亂的目的。

方法：動靜脈通道的制備及其類型透析前先建立動靜脈通道，將動脈端血液引入透析器，經透析作用，使血液凈化。然後將凈化了的血液再由靜脈端回輸體內。

①動靜脈保留插管法。一般選用足背動脈和內踝大隱靜脈插管；亦可採用Seldinger擴張性導管穿刺股動、靜脈。適用於急性葯物中毒或急性腎功能衰竭的緊急透析者。

②動、靜脈外瘺。可選用橈動脈及其伴行的頭靜脈，用兩根硅橡膠管分別插入動、靜脈的向心端，行皮膚外連接，形成體外分流。適用於急、慢性腎功能衰竭需作長期透析者。

③動、靜脈外瘺。可選用橈動脈及其伴行靜脈作側側或端側吻合；亦可用鈦制輪釘（孔徑為2.0～2.5mm）行吻合術。吻合兩周後，即可在靜脈動脈化處作穿刺，以供血液透析用。適用於長期透析者。

④鎖骨下靜脈導管法。將雙腔導管插入鎖骨下靜脈，血經外套管側孔吸出，流經透析器後，再由內管回輸體內。

2、血液濾過

HF是依照腎小球濾過功能而設計的一種模擬裝置。HF設備由血液濾過器、血泵、負壓吸引裝置三部分組成。

方法

1．建立動靜脈血管通道及肝素化法：同血透。

2．血液濾過器裝置：常用有聚丙烯腈膜多層小平板濾過器（如RP6濾過器）、聚碸膜空心纖維濾過器（如DiafilterTM30Amicon)、聚甲基丙烯酸甲酯膜濾過器（如FiltryzerB1型、GambroMF202型）等。

3．將患者的動靜脈端分別與血液濾過器動靜脈管道連接，依靠血泵和濾過器靜脈管道夾子使濾過器血液側產生13.33～26.66kpa(100～200mmHg)正壓，調節負壓裝置，使負壓達到26.66kpa，便可獲得60～100ml/分濾過液，與此同時補充置換液。如每次要求去除體內1000ml液體，則濾出液總量減去1000ml，即為置換液的輸入量。

4．置換液的組成及輸入方法：由Na+140mmol/L、k+2.0mmol/L、Ca++1.85mmol/L、Mg++0.75～1.0mmol/L、Cl－105～110mmol/L、乳酸根33.75mmol/L配成。可由濾過器動脈管道內輸入（前稀釋型）或靜脈管道內輸入（後稀釋型）。

5．根據患者病情，HF2～3次/周，4～5小時/次。[1]

3、脈管濾過

連續性動靜脈血液濾過（,CAVH)，CAVH是利用動靜脈壓正常壓力梯度差，連續性地使血液通過小型濾過器，以達到血液濾過的作用。其特點為：低濾過率，不需用血液濾過機和補充大量置換液。特別適用急性腎功能衰竭現場救護。

方法

1．建立動、靜脈通道及肝素化法：同血透。

2．濾過器：常用的有聚碸膜血液濾過器，聚胺膜血液濾過器等。

3．將患者的動、靜脈端分別與血液濾過器的動、靜脈管道相連接，收集超濾液的容器置於病床最低處，使其負壓為392.15Pa(40cmH2O),便可獲得濾出液300～500ml/小時。

4、血液灌流

HP是將患者動脈血引入儲有吸附材料的血液灌流裝置，通過接觸血液使其中的毒物、代謝產物被吸附而凈化，然後再回輸體內。

方法

1．建立動、靜脈通道及肝素化法：同血透。

2．血液灌流裝置由灌流罐、吸附劑、微囊膜組成。用於臨床的主要有白蛋白火棉膠包裹活性炭、丙烯酸水凝膠包裹活性炭和醋酸纖維包裹活性炭等。活性炭通常是8～14目的椰殼炭。

3．將患者的動、靜脈分別與血液灌流裝置的動、靜脈管道相連接，利用血泵維持血液流速200ml/分左右。每日或隔日一次，每次2～3小時，直至臨床症狀好轉。

5、置換療法

血漿置換療法（PlasmaExchangetherapy,PE)

PE系將患者血液引入血漿交換裝置，將分離出的血漿棄去，並補回一定量的血漿，藉以清除患者血漿中抗體，激活免疫反應的介質和免疫復合物。

方法

1．建立血管通道及肝素化法，同血透。

2．血漿分離裝置：多採用醋酸纖維素膜、聚甲基丙烯酸甲脂膜或聚碸膜所製成的空心纖維型分離器。膜面積為0.4～0.6m2，孔徑0.2～0.6μm，最大截流分子量為300道爾頓。

3．將患者的動、靜脈分別與血漿分離器動、靜脈管道連接，調整血泵速度與負壓，維持血液流速200ml/分，控制超濾血漿量30～60ml/分，裝置時間為90～120分鍾，2次/周，每次超濾血漿總量為4升左右。從血漿濾過器靜脈端回輸4%人體白蛋白林格氏液3.8升（即20%白蛋白400～800ml，其餘為復方氯化鈉溶液）。

6、腹膜透析

腹膜透析是利用腹膜作為半滲透膜，根據多南膜平衡原理，將配製好的透析液經導管灌入患者的腹膜腔，這樣，在腹膜兩側存在溶質的濃度梯度差，高濃度一側的溶質向低濃度一側移動（擴散作用）；水分則從低滲一側向高滲一側移動（滲透作用）。通過腹腔透析液不斷地更換，以達到清除體內代謝產物、毒性物質及糾正水、電解質平衡紊亂的目的。

方法

1。腹膜透析法選擇①緊急腹膜透析。短期內作整日持續性透析。多作為急性腎功能衰竭及急性葯物中毒的搶救措施。②間歇腹膜透析。每周透析5～7日，每日用透析液6000～10000ml，分4～8次輸入腹腔內，每次留置1～2小時，每日透析10～12小時。用於慢性腎功能衰竭伴明顯體液瀦留者。③不卧床持續腹膜透析（CAPD）。每周透析5～7日，每日透析4～5次，每次用透析液1500～2000ml，輸入腹腔，每3～4小時更換1次，夜間1次可留置腹腔內10～12小時。在腹腔灌入透析液後，夾緊輸液管，並將原盛透析液袋摺起放入腰間口袋內，放液時取出，置於低處，讓透析液從腹腔內通過腹膜透析管流出，然後再換新的腹膜透析液袋。患者在透析時不需卧床，病人可自由活動。④持續循環腹膜透析（CCPD）。系採用計算機程序控制的自動循環腹膜透析機。患者在夜間睡眠時，腹腔內留置的腹膜透析管端與自動循環腹膜透析機連接，用6～8升透析液持續透析9～10小時，清晨在腹腔內存留2升透析液，脫離機器，整個白天（10～14小時）不更換透析液，白天患者可自由活動。

2．腹膜透析管常用的有單毛套（cuff)、雙毛套及無毛套等三種硅橡膠腹膜透析管。

3．置管方法用套管針在臍與趾骨聯合線上1/3處穿刺，然後通過套針將透析管送入腹腔直腸膀胱窩中，或手術分層切開腹膜，將腹膜透析管插入直腸膀胱窩中，即可行透析。對慢性腎功能衰竭需作長期腹膜透析者，可在腹壁下作一隧道，並用帶毛套的腹膜透析管通過隧道穿出皮膚外，以助固定。

4．透析液的配方透析液可臨時自行配置或使用商品化透析液。

臨時透析液配方：5%葡萄糖液500ml，生理鹽水1000ml，5%碳酸氫鈉100ml，5%氯化鈣12ml，滲透壓359.4mmol/L。

上海長征制葯廠透析配方：氯化鈉5.5g，氯化鈣0.3g，氯化鎂0.15g，醋酸鈉5.0g，偏焦亞硫酸鈉0.15g，葡萄糖20g，加水至1000ml，滲透壓374.3mmol/L。

5．透析注意事項要嚴格無菌操作，注意有無傷口滲漏：記錄透析液輸入及流出量（若流出量<輸入量，應暫停透析尋找原因）；觀察流出液的色澤及澄清度，並做常規檢查，細菌培養及蛋白定量；遇有腹膜炎跡象時要立即採取措施控制

❹ amicon ultra-4離心時濃度太高無法置換緩沖液怎麼辦

解決這種情況，有以下方法：
1. 選擇具有合適NMWL和體積的離心超濾裝置；
2. 把樣品置於過濾裝置的儲液管中；
3. 如果樣品體積小於過濾裝置的最大體積，則可以把它稀釋到最大體積後再離心，這有助於更有效地除去鹽分；
4. 在特定的離心力下和推薦的時間進行離心；
5. 將濾過液從濾管中取出，放置一旁；
6. 加入水或緩沖液使樣品體積達到4ml(Amicon Ultra-4)或15ml(Amicon Ultra-15);
7. 再次離心；
8. 取出濾過液，放置一旁；
9. 回收濃縮的已脫鹽樣品。
注意：請將兩次的濾過液一直保留到濃縮的樣品分析測試完成。

❺ 腎小管壞死的治療措施

少尿期常用急性肺水腫、高鉀血症、上消化道出血和並發感染等導致死亡。故治療重點為調節水、電解質和酸鹼平衡，控制氮質瀦留，供給適當營養，防治並發症和治療原發病。
1.卧床休息所有ATN患者都應卧床休息。
2.飲食能進食者盡量利用胃腸道補充營養，給予清淡流質或半流質食物為主。酌情限制水份、鈉鹽和鉀鹽。早期應限制蛋白質（高生物效價蛋白質0.5g/kg）重症ATN患者常有明顯胃腸道症狀，從胃腸道補充部份營養不能操之過急。第一步先讓患者胃腸道適應，以恢復胃腸道功能為目的，不出現腹脹和腹瀉為原則。然後循序漸進補充部份熱量以2.2～4.4kJ/d(500～1000大卡）為度。過快、過多補充食料多不能吸收，導致腹瀉。根據可允許補充液體量適量補充氨基酸液和葡萄糖液，以6.6～8.7kJ/d(1500～2000大卡）熱量，減少體內蛋白質分解。若患者必須攝入6.6kJ/d(1500大卡）以上，則應考慮採用連續性血液濾過方法以保證每日所必須的體液補充量。
3.維護水平衡少尿期患者應嚴格計算24小時出入水量。24小時補液量為顯性失液量及不顯性失液量之和減去內生水量。顯性失液量系指前一日24小時內的尿量、糞、嘔吐、出汗、引流液及創面滲液等丟失液量的總和；不顯性失液量系指每日從呼氣失去水分（約400～500ml）和從皮膚蒸發失去水分（約300～400ml）。但不顯性失液量估計常有困難，故亦可按12ml/kg計算，並考慮體溫、氣溫和濕度等。一般認為體溫每升高1℃，每小時失水量為0.1ml/kg；室溫超過30℃，每升高1℃，不顯性失液量增加13%；呼吸困難或氣管切開均增加呼吸道水份丟失。內生水系指24小時內體內組織代謝、食物氧化和補液中葡萄糖氧化所生成的水總和。食物氧化生成水的計算為1克蛋白質產生0.43ml水，1克脂肪產生1.07ml水和1克葡萄糖產生0.55ml水。由於內生水的計算常被忽略，不顯性失水量計算常屬估計量，致使少尿期補液的准確性受到影響。為此，過去多採用「量出為入，寧少勿多」的補液原則，以防止體液過多。但必須注意有無血容量不足因素，以免過份限制補液量，加重缺血性腎損害，延長少尿期。
下列幾點可作為觀察補液量適中的指標：
①皮下無脫水或水腫現象；
②每日體重不增加，若超過0.5kg或以上，提示體液過多；
③血清鈉濃度正常。若偏低，且無失鹽基礎，提示體液瀦留；
④中心靜脈壓在0.59～0.98kPa(6～10cmH2O)之間。若高於1.17kPa(12cmH2O)，提示體液過多；
⑤胸部X片血管影正常。若顯示肺充血徵象，提示體液瀦留；⑥心率快、血壓升高，呼吸頻速，若無感染徵象，應懷疑體液過多。
4.高鉀血症的處理
最有效的方法為血液透析或腹膜透析。若有嚴重高鉀血症或高分解代謝狀態，以血液透析為宜。高鉀血症是臨床危急情況，在准備透析治療前應予以急症處理：
①11.2%乳酸鈉80～320ml靜脈注射，伴代謝性酸中毒者可給5%碳酸氫鈉250ml靜脈滴注；
②10%葡萄糖酸鈣10ml靜脈注射，以拮抗鉀離子對心肌的毒性作用；
③25%葡萄糖液200ml加胰島素16～20U靜脈滴注，可促使葡萄糖和鉀離子等轉移至細胞內合成糖原。但ATN患者常因少尿限制液體攝入，此方法常受限制；④鈉型離子交換樹脂15～20g加入25%山梨醇溶液100ml口服，每日3～4次。由於離子交換樹脂作用較慢，故不能作為緊急降低血鉀的治療措施，對預防和治療非高分解代謝型高鉀血症有效。1克樹脂可吸附1mmol鉀離子。此外，限制飲食中含高鉀的食物，糾正酸中毒，不輸庫存血和清除體內壞死組織，均為防治高鉀血症的重要措施。對擠壓傷患者出現難以控制的高鉀血症，應細心、認真排隊深部壞死肌肉，只有清除壞死組織，才能控制高鉀血症。
5.代謝性酸中毒對非高分解代謝的少尿期，補充足夠熱量，減少體內組織分解，一般代謝性酸中毒並不嚴重。但高分解代謝型代謝性酸中毒發生早，程度嚴重，有時不易糾正。嚴重酸中毒可加重高鉀血症，應及時治療。當血漿實際碳酸氫根低於15mmol/L，應予5%碳酸氫鈉100～250ml靜脈滴注，根據心功能情況控制滴速，並動態隨訪監測血氣分析。有時每日需補充500ml（含鈉鹽60mmol/L），故嚴重代謝性酸中毒應盡早做血液透析，糾正酸中毒較為安全。
6.速尿和甘露醇的應用
ATN少尿病例在判無血容量不足的因素後，可以試用速尿。速尿可擴張血管、降低腎小血管阻力，增加腎血流量和腎小球濾過率，並調節腎內血流分布，減輕腎小管和間質水腫。早期使用有預防急腎衰的作用，減少急性腎小管壞死的機會。對少尿型急腎衰，速尿尚可用於診斷急腎衰屬於功能性或器質性的鑒別。用速尿4mg/kg靜脈注射，一小時內尿量明顯增加，可能屬於功能性。但關於劑量標準是多少，各樹一幟，大劑量有效是否仍屬功能性也有爭議，筆者主張200～400mg靜脈滴注為度，一次無效停止繼續給葯。曾有報道每日超過1g甚至4g可以達到利尿作用，如此大劑量速尿對腎實質有損害，延長腎臟病變恢復時間，目前血液凈化技術已普遍應用，對利尿無反應者有透析指征時應早期透析。過多依賴速尿增加尿量的同時也增加速尿的耳源性毒性。
甘露醇作為滲透性利尿葯可應用於預防各種原因引起的ATN，如擠壓傷後休克已糾正尚無尿的病例強迫性利尿，並用於鑒別腎前性因素或急性腎功能衰竭引起的少尿。用法為20%甘露醇100～200ml靜脈滴注，若1小時內仍無尿量增加或已確診為ATN的少尿（無尿）患者應停止使用甘露醇，以免血容量過多，誘發心力衰竭、肺水腫。
7.感染開展早期預防性透析以來，少尿期患者死於急性肺水腫和高鉀血症者顯著減少，而感染則成為少尿期主要死亡原因。常見為血液、肺部、尿路、膽道等部位感染，可根據細菌培養和葯物敏感試驗合理選用對腎臟無毒性作用的抗生素治療。並注意在急腎衰時抗菌葯物的劑量。
8.營養支持急腎衰患者特別是敗血症、嚴重創傷、多臟器衰竭等伴有高分解代謝狀態，每日分解自體蛋白質常在200g以上，故一旦少尿期延長，每日熱量攝入不足，勢必導致氮質血症快速進展和高鉀血症。營養支持可提供足夠熱量，減少體內蛋白分解，從而減慢血氮質升高速度，增加機體抵抗力，降低少尿期死亡率，並可能減少透析次數。營養補充盡可能部分利用胃腸道循序漸增熱卡量；但重危患者由於患者常有消化道症狀或因外科手術後，部分或全部熱卡常需經胃腸道外補充。以高滲葡萄糖提供約2/3熱量，由脂類供應1/3。但急腎衰患者能否負荷乳化脂肪及其用量極限，均需進一步研究。由必需氨基酸為主體補充氮源。靜脈營養液每單位750ml，其中氨基酸250ml，內含8種必需氨基酸，總氮量1.46g；25%～50%葡萄糖500ml，及各種維生素，並適量給予胰島素。隨訪血糖濃度。可接受補液者尚可用10%乳化脂肪（intralipid）500ml，可提供熱量500大卡。每次靜脈滴注至少4小時，過速速速度可引起胃腸道症狀以及其他可能不良反應。使用時應觀察血電解質，對無高分解代謝狀態的患者，治療數天後常見血鉀、血磷降低，故應適當補充，以免發生症狀性低鉀低磷血症。未施行透析病例常難做到靜脈營養支持，應特別注意容量過多性心力衰竭。對迫切需要全靜脈營養支持者必須施行連續性動-靜脈血液濾過，才能保證每日5L以上液體攝入。
9.血液透析或腹膜透析
早期預防性血液透析或腹膜透析可減少急性腎功能衰竭發生感染、出血或昏迷等威脅生命的並發症。所謂預防性透析，系指在出現並發症之前施行透析，這樣可迅速清除體內過多代謝產物，維持水、電解質和酸鹼平衡，從而有利於維持細胞生理功能和機體內環境穩定，治療和預防原發病的各種並發症。
緊急透析指征：
①急性肺水腫，或充血性心力衰竭；
②嚴重高鉀血症，血鉀在6.5mmol/L以上，或心電圖已出現明顯異位心律，伴QRS波增寬。
一般透析指征：
①少尿或無尿2日以上；
②已出現尿毒症狀如嘔吐、神志淡漠、煩躁或嗜睡；
③高分解代謝狀態；
④出現體液瀦留現象；
⑤血pH在7.25以下，實驗重碳酸氫鹽在15mmol/L以下或二氧化碳結合力在13mmol/L以下；
⑥血尿素氮17.8mmol/L(50mg/dl）以上，除外單純腎外因素引起，或血肌酐442µmol/L(5mg/dl）以上；⑦對非少尿患者出現體液過多、眼結膜水腫、心奔馬律或中心靜脈壓高於正常；血鉀5.5mmol/L以上；心電圖疑有高鉀圖形等任何一種情況者，亦應透析治療。
至於選用血液透析抑或腹膜透析，主要根據醫療單位臨床經驗而定，但在下列情況選用血液透析為宜：存在高分解狀態者，近期腹部手術特別是有引流者，以及呼吸困難者。腹膜透析適合於伴有活動性出血或創傷、血管通道建立有困難、老年、心血管功能不穩定或兒童病例。
腹膜透析在急腎衰伴心力衰竭中的應用：伴有心力衰竭、水瀦留時根據心衰程度及急需超濾速度可選用2.5%～4.25%葡萄糖透析液，一般以3%為度。每次灌入2L留30分鍾，用4%葡萄糖透析液者每次雖可清除水份300～500ml，每日10次即可在10小時內超濾3L，但易造成高糖血症，甚至高滲性昏迷，故只適用於急性肺水腫的搶救。用2.5%葡萄糖透析液，每小時可超濾100～300ml，5次即可超濾1L左右，對輕、中度心力衰竭者可採取此濃度。病情重篤，脫水量不理想，應即改為單純超濾或CAVH。在使用高滲4.25%葡萄糖透析液時，應密切觀察血糖濃度。對糖尿病、隱性糖尿病或老年病例，尤應注意。當血糖超過300mg/dl時，應改用2%葡萄糖透析液及腹腔內注入胰島素，對糖尿病患者亦應加用胰島素腹腔內注射。推薦的使用劑量為1.5%者4～5U/L、2.5%者5～7U/L、而4.25%者為7～10U/L，但應根據血糖濃度調節，最後一次透析不宜加胰島素。在治療中，對無高分解狀態患者尚應注意低鉀血症的發生。特別是糾正代謝性酸中毒之後，透析液中加氯化鉀4mmol/L，有時仍會發生體內缺鉀。故仍應嚴密隨訪心電圖和血鉀濃度，以免發生缺鉀性嚴重心律失常和心跳驟停。
10.連續性動（靜）-靜脈血液濾過（continuous arteriovenous hemofiltration,CAVH）具有操作簡便，持續低流率替代腎小球濾過的特點。並可在床旁進行急救。它系採用高鏟能小型濾過器，及由股靜脈或頸內靜脈插入留置靜脈導管，以及選用前壁靜脈內直接穿刺術建立血管通路，血液人股或頸內靜脈，用一血泵推動血液，引入濾過器，依賴血液在濾過器內存在靜水壓力差作為動力，每小時可超濾600～1000ml體液，然後血液經濾過器靜脈端經前臂靜脈回輸到體內，如此24小時不斷進行超濾，每日可清除水份10～14L。這樣可防止急腎衰少尿期體液瀦留導致肺水腫，並保證了靜脈內高營養療法。該方法懟主血管系統影響甚微亦為其主要優點之一，故特別適用於既不能做血液透析亦不適宜腹膜透析的急腎衰或多臟器衰竭患者。由於24小時連續濾過，液體交換量大，及24小時連續使用肝素，有引起或加重出血的可能，故必須強調24小時監護，密切觀察和精細調節水和電解質平衡。對有活動性出血的病例要控制血液濾過時肝素用量。
日間連續性動（靜）靜脈血液濾過透析（day time continuous arterio(venous)-venous hemofiltration dialysis,CA(V)VHD) 連續性靜脈-靜脈血液濾過（CVVH）正被全球公認為治療急性腎功能衰竭，特別是伴有多臟器衰竭和需要全靜脈營養患者較為有效的方法，但這一治療方法有三個缺點：
①需要連續24小時治療和監護；
②需要連續24小時補充肝素和監護；
③清除血氮質不夠理想。為了克服前述三個缺點，作者等從1991年起對200例次以上重危急腎衰患者，採用Amicon DM·20或30濾過器施行白天8～12小時連續性動靜脈（或靜脈-靜脈）血液濾過透析獲得滿意療效，每日超濾出體內水6～8L，保證了靜脈內營養的補充，並減少了肝素用量至每小時1～2mg,減少了出血機會，並防止大量補液和補充電解質的治療復雜性。日間連續性血液濾過的缺點是由於減少超濾量從而造成清除氮質不足。
為了提高氮質清除，可選用下列各種方法分別或交替進行：
①在濾過同時進行透析，即所謂連續性靜脈-靜脈血液濾過透析（CVVHD）。CVVHD是為彌補CVVH不足而設計。CAVH或CVVH主要為對流過程，CVVHD則兼有對流和彌散雙重作用，故可增加尿不經清除。CVVHD與常規血透不同者在於透析液量僅為血透的3%，不需人工腎供液裝置，故亦可用於床旁急救。一般應選用乳酸鹽和含鉀（除高鉀血症和高分解代謝型外）透析液，每分鍾透析液流量為16.6ml/min，即每小時1L，加上超濾液8～16ml/min，故清除率約為25～33ml/min。用不同濾器對尿素清除量稍異。有時為增加氮質清除，每分鍾透析液流量為100～150ml，4～5小時。對高分解狀態患者每日或隔日進行彌散透析，可使每日血肌酐維持在442µmol/L（5mg/dl）或以下；
②隔日或隔2日改做一次常規血液透析；
③使用Amicon濾器和醋酸纖維素膜透析器進行配對濾過透析（PFD），CVVHD透析流量為150ml/min，透析時間為4～6小時。對穩定病例可選用②式方法，對重危高分解病例可選用CAVHD或CVVHD；有出血傾向或消化道出血病例以CVVHD為宜，可不增加每小時肝素量。每日日間施行CVVHD不僅可滿足每日必需補液量，消除一定的氮質量，且可減少夜間醫護監護，又可較從容將撤下濾過器及時沖洗，重復使用，節省費用。
個別重危ATN患者接受血液透析治療後，少尿期和急性腎功能損害可維持3個月或更長，故應耐心積極治療，等待腎功能恢復。 多尿期開始，威脅生命的並發症依然存在。治療重點仍為維持水、電解質和酸鹼平衡，控制氮質血症，治療原發病和防止各種並發症。部分急性腎小管壞死病例多尿期持續較長，每日尿量多在4L以上，補充液體量應逐漸減少（比出量少500～1000ml），並盡可能經胃腸道補充，以縮短多尿期。對不能起床的病人，尤應防治肺部感染和尿路感染。
多尿期開始即使尿量超過2500ml/日，血尿素氮仍可繼續上升。故已施行透析治療者，此時仍應繼續透析，使尿素氮不超過17.9mmol/L(50mg/dl），血肌酐漸降至354µmol/L(4mg/dl）以下並穩定在此水平。臨床一般情況明顯改善者可試暫停透析觀察，病情穩定後停止透析。 一般無需特殊處理，定期隨訪腎功能，避免使用對腎臟有損害的葯物。 急性腎小管壞死中醫治療方法 暫無相關信息 急性腎小管壞死西醫治療方法。

❻ 請問什麼是透析

可以，大分子物質如蛋白質不能通過，但葡萄糖分子是小分子物質可以通過．所謂透析就是大分子物質不能通過只有小分子物質能通過．就象網一樣大魚不能過小魚能過．

❼ 膜分離設備的前景如何

膜分離技術是指在分子水平上不同粒徑分子的混合物在通過半透膜時，實現選擇性分離的技術，在飲用水凈化、工業用水處理，食品、飲料用水凈化、除菌，生物活性物質回收、精製等方面得到廣泛應用，並迅速推廣到紡織、化工、電力、食品、冶金、石油、機械、生物、制葯、發酵等各個領域。分離膜因其獨特的結構和性能，在環境保護和水資源再生方面異軍突起，在環境工程，特別是廢水處理和中水回用方面有著廣泛的應用前景。 膜在大自然中，特別是在生物體內是廣泛存在的，首先出現的是超濾膜和微孔過濾，然後才出現反滲透。
1748年Abble Nelkt發現水能自然地擴散到裝有酒精溶液的豬膀胱內，首次揭示了膜分離現象，但是直到本世紀60年代中期，膜分離技術才應用在工業上。
1861年Schmidt首先提出超過濾的概念，他指出，當溶液用比濾紙孔徑更小的棉膠膜或賽璐玢膜過濾時，如果對接觸膜的溶液施加壓力並使膜兩側產生壓力差，那麼它可以過濾分離溶液中如細菌、蛋白質、膠體那樣的微小粒子，這種過濾精度要比通常的濾紙過濾高的多，因此稱這種膜過濾法為超過濾。
在截留分子量級重要概念提出後，關於截留各種不同分子量的超過濾膜，是Machaelis等用各種比例的酸性和鹼性高分子電解質混合物，以水-丙酮-溴化鈉為溶劑首先製成的。此後，一些國家又相繼用各種高分子材料研製了具有不同用途的超過濾膜，並由美國Amicon公司首先進行了商品化生產。將各種形狀的大面積的超過濾膜放在耐壓裝置中的膜組件中，隨著反滲透組件的研製而發展起來的。
幾種主要膜技術發展近況大致如下：
微濾在20世紀30年代硝酸纖維素微濾膜商品化，60年代主要開發新品種。雖然早在100多年前已在實驗室製造微孔濾膜，但是直到1918年才由Zsigmondy提出商品微孔過濾膜的製造法，並報道了在分離和富集微生物、微粒方面的應用。1925年在德國建立世界上第一個微孔濾膜公司「Sartorius」，專門經銷和生產微孔濾膜。第二次世界大戰後，美國對微孔濾膜的製造技術和應用技術進行了廣泛的研究研究微孔濾膜主要是發展新品種，擴大應用范圍。使用溫度在－100～260℃。
超濾從20世紀70年代進入工業化應用後發展迅速，已成為應用領域最廣的技術。日本開發出孔徑為5～50nm的陶瓷超濾膜，截留分子量為2萬，並開發成功直徑為1～2mm，壁厚200～400um的陶瓷中空纖維超濾膜，特別適合於生物製品的分離提純。
離子交換膜和電滲析技術主要用於苦鹹水脫鹽，引起氯鹼工業的深刻變化。離子膜法比傳統的隔膜法節約總能耗30%，節約投資20%。90年世界上已有34個國家近140套離子膜電解裝置投產，到2000年全世界將1/3氯鹼生產轉向膜法。
20世紀60年代Loeb與Sourirajan發明了第一代高性能的非對稱性醋酸纖維素膜，把反滲透首次用於海波及苦鹹水淡化。70年代開發成功高效芳香聚醯胺中空纖維反滲透膜，使RO膜性能進一步提高。90年代出現低壓反滲透復合膜，為第三代RO膜，膜性能大幅度提高，為RO技術發展開辟了廣闊的前景。超純水製造、鍋爐水軟化，食品、醫葯的濃縮，城市污水處理，化工廢液中有用物質回收。
1979年Monsanto公司用於H2/N2分離的Prism系統的建立，將氣體分離推向工業化應用。1985年Dow化學公司向市場提供以富N2為目的空氣分離器「Generon」氣體分離用於石油、化工、天然氣生產等領域，大大提高了過程的經濟效益。
20世紀80年代後期進入工業應用的膜分離技術是用滲透汽化進行醇類等恆沸物脫水，由於該過程的能耗僅為恆沸精餾的1/3～1/2，且不使用苯等挾帶劑，在取代恆沸精餾及其它脫水技術上具有很大的經濟優勢。德國GFT公司是率先開發成功唯一商品GFT膜的公司。90年代初向巴西、德、法、美、英等國出售了100多套生產裝置，其中最大的為年產4萬噸無水乙醇的工業裝置，建於法國。除此之外，用PV法進行水中少量有機物脫除及某些有機/有機混合物分離，例如水中微量含氯有機物分離，MTBE/甲醇分離，我國膜科學技術的發展是從1958年研究離子交換膜開始的。60年代進入開創階段。1965年著手反滲透的探索，1967年開始的全國海水淡化會戰，大大促進了我國膜科技的發展。70年代進入開發階段。這時期，微濾、電滲析、反滲透和超濾等各種膜和組器件都相繼研究開發出來，80年代跨入了推廣應用階段。80年代又是氣體分離和其他新膜開發階段。 隨著我國膜科學技術的發展，相應的學術、技術團體也相繼成立。她們的成立為規范膜行業的標准、促進膜行業的發展起著舉足輕重的作用。半個世紀以來，膜分離完成了從實驗室到大規模工業應用的轉變，成為一項高效節能的新型分離技術。1925年以來，差不多每十年就有一項新的膜過程在工業上得到應用。
由於膜分離技術本身具有的優越性能，產業界和科技界把膜過程視為二十一世紀工業技術改造中的一項極為重要的新技術。曾有專家指出：誰掌握了膜技術誰就掌握了化學工業的明天。
80年代以來我國膜技術跨入應用階段，同時也是新膜過程的開發階段。在這一時期，膜技術在食品加工、海水淡化、純水、超純水制備、醫葯、生物、環保等領域得到了較大規模的開發和應用。並且，在這一時期，國家重點科技攻關項目和自然科學基金中也都有了膜的課題。
為眾多的企業帶來了較為顯著的經濟效益、社會效益和環境效益。

❽ 血液凈化技術的血液濾過

1 血液濾過的原理
生理情況下腎臟產生尿液依賴腎小球的濾過和腎小管的重吸收。腎小球濾過率取決於腎血流量、濾過壓力、濾過膜面積和通透性等因素。兩個腎臟腎小球基膜面積總和為1.5m2，血漿流量600ml／min，腎小球有效濾過壓6.0kPa，濾過率125m1／min。全日的原尿量為180L，經腎小管將大部分的水和有用物質重吸收後，最後排出的尿液僅為原尿量的1％左右，約1500ml。
血液濾過（HF）是模仿腎單位的這種濾過重吸收原理設計的一種血液凈化方法，以對流轉運的方式清除溶質。它是將患者的血液引入具有良好通透性並與腎小球濾過面積相當的半透膜濾器中，當血液通過濾過器時，在負壓的牽引下，濾過膜孔徑范圍內的所有溶質均以相同的速度跨過濾器，血漿內除蛋白質、細胞以外的溶質及大量水分被濾出，從而清除瀦留於血中的有毒代謝產物（溶質）及過多的水分，在清除溶質的同時補入一定量的置換液，維持體液平衡。
血液濾過（HF）的濾過率大小取決於濾過膜的面積、跨膜壓、篩選系數和血流量，由於濾過器的膜面積可以接近於腎小球的膜面積，但由於體外循環的血流量僅為腎血流量的1/6～1/3，單純依靠動脈血壓不能在短時間內濾出足夠的溶質，因此必須有較大的壓差才能獲得與腎小球可比的濾過率，而每一次HF治療中的濾液量要達到15～20L左右，才能達到較好的治療效果。
為了補償被濾出的液體和電解質，保持患者機體內環境的平衡需要補回一定的液體和電解質以代替腎小管的重吸收功能。一般的計算方式是：
濾出總量（廢液量）＝超濾量＋補液量。
在進行血液濾過時，既可先進行（單純）超濾，然後一邊濾出一邊補液，或者在開機就進行邊濾邊補，也可以先（單純）超濾後再進行補液，依次循環進行。不管採用哪種方式濾過，超濾速度都不能超過2000ml/h，如有心功能不全或低血壓、呼吸衰竭等症狀的患者不能超過1000ml/h，超濾的總量不超過5000ml,但最重要的還是患者身體能承受這種脫水速度和總量。對於超濾的總量和速度問題，醫護人員應根據每個患者的具體情況而定，並且在平時的血液濾過中注意積累經驗。
血液與血透主要區別在於：血透是依賴半透膜兩側的溶質濃度差所產生的彌散作用進行溶質清除，其清除效能很差。正常人腎小球對不同分子量的物質如肌酐和菊粉的清除率幾乎都一樣。血液濾過模仿正常腎小球清除溶質原理，以對流的方式濾過血液中的水分和溶質，其清除率與分子量大小無關，對肌酐和菊粉的清除率均為100～120ml/min。故血濾在清除中分子物質方面優於血透，與正常人腎小球相似。
2 血液濾過溶質的清除方式
血液濾過（HF）與傳統的血液透析（HD）清除溶質的機制不同。前者主要利用壓力梯度，通過對流原理，清除中、小分子能力相等，而血液透析通過彌散原理，清除率與分子量成反比，對小分子的清除優於中分子，因此可見血液濾過對中分子的清除優於血液透析。
腎小球濾過膜的截留分子質量為80000u，目前使用的血液濾過器濾過膜的分子截留量為10000～50000u，最近已有報告新合成的膜分子截留量達60000u。透析膜的孔徑則很小，分子質量300u上的物質均不能通過。下表列出了某些物質的分子質量。一些中分子物質如甲狀旁腺素（PTH）、β2－微球蛋白（β2—MG）等均小於濾過器膜分子截留量，故HF時可被清除。
表2 低分子蛋白和某些中分子毒素的分子質量（u）
β2－MG 11 800
轉鐵蛋白 76 000
溶菌酶 15 000
a1－糖蛋白 44 000
前白蛋白 54 980
白蛋白 66 500
維生素B12 1 335
甲狀旁腺激素 9 000
菊酚 4 200
3 血液濾過的適應症
（1）頑固性高血壓：葯物和血液透析不能控制的頑固性高血壓患者，應用血濾後，血壓都恢復正常。可能與血濾時清除了血漿中某些加壓物質有關。也可能與血濾時心血管系統及細胞外液比較穩定，減少了對腎素-血管緊張素系統的剌激有關。
（2）水瀦留和低血壓：對於水瀦留伴有低血壓的患者，不可能通過血透排除足夠的水分，因為透析早期即出現低血壓和虛脫。這些患者如果改換血液濾過，循環障礙的表現明顯改善。血濾最主要的優點就是能清除大量的液體而不引起低血壓。
（3）高血容量性心力衰竭
這類病人在血液透析時往往會加重病情，而血液濾過則可減輕或治療這類心衰，原因為：① 血液濾迅可迅速清除過多的水分，減輕心臟前負荷。② 雖然脫水效果好，使血容量減少，但它屬於等滲脫水，使外周血管阻力增高，保持了血壓穩定性。③ 清除大量水分後，血漿白蛋白濃度相對升高，有利於周圍組織水分進入血管內，減輕水腫。④ 不需使用醋酸鹽透析液，避免了由此引起的血管擴張和心臟收縮力抑制。由於上述種種優點，故對於利尿劑無厙應的心功能不全患者，血液濾過是一個有效的治療方法。
（4）尿毒症心包炎：在持續血透病人，尿毒症心包炎發病率達20%～25%，原因未明，改作血濾後，發現心包炎治療時間較血透短，可能是血濾脫水性能好，清除中分子毒性物質較好之故。
（5）周圍神經病變
（6）急性腎衰竭：持續或間歇的血濾是急性腎衰的有效措施。CAVH對心血管功能不穩定、多臟器功能衰竭、病情危重的老年患者有獨特的優點。
（7）肝昏迷：許多學者認為血濾對肝昏迷治療效果比血透好，但比血漿置換、血液灌流差。
（8）對HD耐受差者。
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❾ amicon ultra-4 centrifugal filter devices 有0.22um的嗎

先離心一次超純水，去掉新膜上的甘油，打開膜上的孔。然後加入你的樣品，濃縮到你需要的濃度。取出樣品，洗一下超濾管，10-20%乙醇4度保存。有錢的話就當一次性的用。水平轉子最大4000g,角轉最大7500g。在這個離心力以下使用，離心力太大膜會壞，導致漏液。試驗順利。