Ⅰ 100kd的膜包超濾的過程可以除掉蛋白核酸嗎
不可以。超濾膜包是一種親水性聚醚碸超濾膜為半透膜,不適用膠黏劑,採用湍流式結構設計,無死體積,無死角,使用方便,回收率高的合適過濾膜組件。根據查詢相關資料顯示,100kd的膜包超濾的過程不可以除掉蛋白核酸。膜並不是一個剛性的篩子,並不是標定100kD的膜包,就表示所有大於100kD的蛋白就全部被截留,小於100kD的蛋白就全部被透過。
Ⅱ 蛋白在超濾管濃縮過程中出現沉澱怎麼辦
1、選擇合抄適的超濾管,主要考慮襲MWCO和濃縮體積,最常見的是Ultra-15(10kD)。
通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。
若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。
注意,一定要等離心機達到目的轉速之後,方可離開
離心機,否則離心機出問題時,無法第一時間處理,後果不可預測!膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
Ⅲ 請問超濾管可以純化胃蛋白酶消化後的IgG嗎。需要F(ab')2片段。
超濾管不建議用復於純化,適制用於去鹽或濃縮,尤其是對於你的這個實驗,問題有3點:
1、胃蛋白酶35KD左右,Fab2有90KD,兩者的分子量相差不到3倍,你很難選到合適孔徑的超濾管能較好分離兩者,用分子篩還是可以的;
2、超濾管總體蛋白回收率比純化技術低;
3、每次超濾,都會有上層濾液殘留,無法高效率去除這部分雜蛋白。
以上意見供您參考,祝愉快!
Ⅳ 超濾離心管能分離蛋白和聚乙二醇嗎
超濾離心管可以用來分離蛋白和聚乙二醇的
聚乙二醇(PEG)是一種分子量內很小的試劑,而超濾管的容截留分子量一般是在3000道爾頓~10000道爾頓之間。絕大多數蛋白可以被截留在超濾管上層,而聚乙二醇可以穿透濾膜到達超濾管下層
所以超濾離心管可以用來分離蛋白和聚乙二醇的
Ⅳ 蛋白用超濾管濃縮容易沉澱怎麼辦
可能是抄這個蛋白的水溶性較差,也就是只能保持在一定濃度不能太高
另外就和這個蛋白的穩定性有關了,超濾時保持低溫,體積縮小一點後就把濾液混勻避免局部濃度過高,選擇更合適的緩沖液,添加一點甘油等小分子物質等都可以增加蛋白的穩定性。
Ⅵ 同一個超濾濃縮管可以用來純化不同的蛋白嗎
不可以的
不管是哪個公司生產超濾濃縮管使用後都會有蛋白殘留在濾膜上,而不管是使回用氯化鈉或答者氫氧化鈉清洗都不能確保可以完全清理掉殘留在膜上的蛋白。
如果不同的蛋白間混合使用,可能前一個蛋白會污染到後一個蛋白,甚至有些某些高活性的酶殘留在上面會造成後一個蛋白被酶切降解,造成不必要的損失。
Ⅶ 取50ul國產Bradford溶液 ,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白.
先回答你的問題:
Bradford溶液現在自己配也行(其實就是考馬斯亮藍溶液),不過買商品化的也很多,可以買Bradford蛋白定量試劑盒之類的東西。可以用這個試劑檢測溶液中蛋白的濃度。如果要自己配,可以參考:http://..com/link?url=7UwTia_b3FPpAaia
在用超濾管的時候,保留在上方的是所需蛋白樣品,超濾膜下方收集到的溶液就是流穿液。
這個意思應該是說,如果超濾完全保留蛋白,流穿液中理論是沒有蛋白的,所以加入bradford溶液(棕紅色)是不應該引起溶液變色的。但是如果有蛋白,會與Bradford溶液反應,變成藍色。但是也有問題,超濾膜只能保留一定分子量以上的蛋白,如果截留分子量比較大,例如30K或者更大,有一些小的蛋白還是會進到流穿液的,會產生變色反應,而且肉眼觀察變色,也沒有辦法給出具體蛋白的量,可能還是用儀器檢測一下比較好。
Ⅷ 超濾濃縮最低濃度
超濾濃縮最低濃度是2毫克每毫升。因為濃縮過快或者過度濃縮會引起蛋白沉澱。蛋白濃縮後最終濃度不超過2毫克每毫升,降低離心速度並改用截留分子量更大的超濾管。
Ⅸ PS中空纖維超濾膜會不會吸附蛋白
1、是否會吸附蛋白抄,這襲個可能性很小,應該超濾膜會截留蛋白,在膜上
截留的蛋白,是截留字 過濾孔裡面呢,還是停留膜表面上,這要看您用的 聚碸(ps)膜的親水性了
如果蛋白滲透到 膜的孔經裡面甚至已經到了 膜的支撐層的,膜就很難清洗出來
您問的 是否會吸附蛋白
這個回答起來 文字太多了
如果您有時間,我們可以多交流一下
Ⅹ 化學合成中的透析能用超濾管代替嗎
除蛋白中的小分子雜質,不知道選用哪種方法,透析袋... 以及蛋白損失量大(尤其不適合微量的樣本溶液),所以目前在很多實驗中都被超濾代替