① 離子交換柱層析法分離氨基酸實驗裝柱有哪些注意事項
氨基酸的分離鑒定——紙層析法
一,實驗目的
掌握氨基酸紙層析的方法和原理,學會分析待
測樣品的氨基酸成分.
二,實驗原理
紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析.濾紙纖維上的羥基具有親水性,吸附一層水作為固定相,有機溶劑為流動相.當有機相流經固定相時,物質在兩相間不斷分配而得到分離.
溶質在濾紙上的移動速度用Rf值表示:
Rf=原點到層析斑點中心的距離/原點到溶劑前沿的距離
在一定的條件下某種物質的Rf值是常數.Rf值的大小與物質的結構,性質,溶劑系統,層析濾紙的質量和層析溫度等因素有關.本實驗利用紙層析法分離氨基酸.
三,實驗器材
(1)大燒杯(5000mL):1隻/組
(2)微量注射器(100 L):1隻/ 組.
(3)噴霧器:公用.
(4)培養皿:1隻/組.
(5)層析濾紙(長22cm,寬14cm的新華一號濾紙):1張/組.
(6)直尺,鉛筆:自備.
(7)電吹風:1隻/組.
(8)托盤,針,白線:1套/組.
(9)手套:1雙/組.
(10)塑料薄膜:公用.
(11)小燒杯:50mL,1隻/組.
四,實驗試劑
(1)擴展劑:將4體積正丁醇和1體積冰醋酸放入分液漏斗中,與5體積水混合,充分振盪,靜置後分層,棄去下層水層.
(2)氨基酸溶液:0.5%的已知氨基酸溶液3種(賴氨酸,苯丙氨酸,纈氨酸),0.5%的待測氨基酸液1種.
(3)顯色劑:0.1%水合茚三酮正丁醇溶液.
實驗試劑
五,實驗操作
檢查培養皿是否乾燥,潔凈;若否,將其洗凈並置於乾燥箱內120℃烘乾.
(1)平衡:剪一大塊塑料薄膜鋪在桌面上,將層析缸或大燒杯到置於塑料薄膜上,再把盛有約20mL展層溶液的小燒杯置於倒置的層析缸或大燒杯中,用塑料薄膜密封起來,平衡20min.
(2)規劃:帶上手套,取寬約14cm,高約22cm的層析濾紙一張.在紙的下端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃一條平行於底邊的直線A,在直線上做4個記號,記號之間間隔2cm,這就是原點的位置.另在距左邊緣1cm處畫一條平行於左邊緣的直線B,在B線上以A,B兩線的交點為原點標明刻度(以厘米為單位),參見左圖.
(3)點樣:用微量注射器分別取10mL左右的氨基酸樣品(每取一個樣之前都要用蒸餾水洗滌微量注射器,以免交叉污染),點在這四個位置上.擠一滴點一次,同一位置上需點2～3次,2～3mL/次,每點完一點,立刻用電吹風熱風吹乾後再點,以保證每點在紙上擴散的直徑最大不超過3mm.每人須點4個樣,其中3個是已知樣,1個是待測樣品.
(4)層析:用針,線將濾紙縫成筒狀,紙的兩側
邊緣不能接觸且要保持平行,參見圖3-3.向培養皿中加入擴展劑,使其液面高度達到1cm左右,將點好樣的濾紙筒直立於培養皿中(點樣的一端在下,擴展劑的液面在A線下約1cm),罩上大燒杯,仍用塑料薄膜密封.當擴展劑上升到A線時開始計時,每隔一定時間測定一下擴展劑上升的高度,填入表3-1中.當上升到15～18cm,取出濾紙,剪斷連線,立即用鉛筆描出溶劑前沿線,迅速用電吹風熱風吹乾.
(5)顯色:用噴霧器在通風廚中向濾紙上均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液,然後立即用熱風吹乾,即可顯出各層析斑點,參見左圖.
(6)計算各種氨基酸的Rf值,並判斷混合樣品中都有哪些氨基酸,各人將自己的實驗結果貼在實驗報告上,見表3-2.
(7)以層析時間為橫坐標,擴展劑上升高度為縱坐標畫圖,求出擴展劑上升到18cm時所需要的時間.
(8)將微量注射器內外用蒸餾水清洗干凈,倒掉用過的展層液和平衡液,將培養皿洗凈,整理好桌面上的儀器和試劑
② 離子交換柱層析法分離氨基酸實驗的結論是
氨基酸有不同的等電點
③ 生化氨基酸的離子交換色譜分離實驗為什麼要在570納米下測吸光度，曲線怎麼分析
一般測定需要在最大吸收波長處測定吸光度，提高靈敏度和准確度，每一種物質都有自己的最大吸收波長，這個數據就可以分辨哪章氨基酸了
④ 氨基酸的離子交換柱色譜分離中為什麼會拖尾
色譜產生拖尾的原因太多了，建議你去「色譜世界」網站看看，這個網站在色譜方面非常專業，高手較多，應該能幫到你的。
⑤ 氨基酸用離子交換柱，色譜柱為什麼需要平衡啊
如果你用的是一般的液相色譜儀，需要很長的時間平衡柱子和系統，因為離子交換柱對流動相中的離子很敏感，一般的液相色譜儀內壁是金屬的，多會產生離子或靜電荷，對分析造成干擾。推薦用離子色譜儀，或氨基酸分析儀，不過也要平衡一定的時間
⑥ 急求：離子交換柱層析分離氨基酸的講義
一、目的
學慣用陽離子交換樹脂柱分離氦基酸的操作方法和基本原理。
二、原理
各種氨基酸分子的結構不同，在同一PH時與離子交換樹脂的親和力有差異，因此可依親和力從小到大的順序被洗脫液洗脫下來，達到分離的效果。
三、器材
1、20cmX 1cm層析管 2、試管
3、吸管． 4、恆壓洗脫瓶
5、部分收集器 6、搪磁杯
7、電爐 8、分光光度計
四、試劑和材料
1、．苯乙烯磺酸鈉型樹脂（強酸 lx 8，l00一200目，可用上海華東化工學院產品）
2 、2 mol／L鹽酸溶液
3、2mol／L氫氧化鈉溶液
4、標准氨基酸溶液 天冬氨酸、賴氨酸和組氨酸均配製成 2 mg／mL的0.1M鹽酸溶液。
5、混合氫基酸溶液將上述天冬氨酸、賴氨酸和組氨酸溶液按1：2．5：10的比例混合。
6、檸檬酸－氫氧化鈉一鹽酸沖液（pH5.8），鈉離子濃度0 .45M）
取檸檬酸（C6O7H8.H20 ）14.25g、氫氧化鈉9.30g和 濃鹽酸 5．25 mL溶於少量水後，定容至 500 mL，冰箱保存。
7、顯色劑 2 g水合茚三酮溶於 75mL乙二醇單甲醚中．加水至 100 mL。
8、50%乙醇水溶液
五、操作
1、層析柱的准備：將強酸型陽離子交換樹脂用氫氧化鈉處理成Na+型後洗至中性（處理方法見第三篇實驗十二）．攪拌一小時後裝成一個直徑1cm．高 16～18 cm的層析柱。
2、氨基酸的洗脫：用P H5.8的檸檬酸緩沖液流洗平衡交換住（裝置如圖）。調節流速為 0.5 mL／min，流出液達床體積的4倍時即可上樣。由柱上端仔細加人氨基酸混合液0．25—0．5 mL，同時開始收集流出液。當樣品液彎月面靠近樹脂頂端時，即刻加入0.5 mL擰檬酸緩沖液沖洗加樣品處。待緩沖液彎月面靠近樹脂頂端時。再加入0．5 mL緩沖液。如此重復兩次，然後用滴管小心注入檸檬酸緩沖液（切勿攪動床面），並將柱與洗脫瓶和部分收集器相連。開始用試管收集洗脫液，每管收集lmL．共收集60一80管。
3、氨基酸的鑒定：向各管收集液中加lmL水合茚三酮顯色劑並混勻，在沸水浴中淮確加熱15分鍾後冷卻至室溫．再加15 mL的50％乙醇液。放置10分鍾。以收集液第2管為空白，測定A570nm波長的光吸收值。以光吸收值為縱坐標，以柱洗脫體積為橫坐標繪制洗脫曲線。以已知3種氨基酸的純溶液為樣品，按上述方法和條件分別操作，將得到的洗脫曲線與混合氨基酸的洗脫曲線對照．可確定3個峰的大致位置及各蜂為何種氨基酸。
⑦ 利用陽離子交換層析分離下列每一對氨基酸，哪一種氨基酸首先被PH7緩沖液從離子交換柱上洗脫出來。
氨基酸與粒子抄交換樹脂的吸附力襲大小取決於它們之間的電荷引力和疏水作用。第一組中甘氨酸和亮氨酸均為非極性氨基酸，但是相比之下甘氨酸的極性要更強，也就是疏水性更弱，它會先被洗脫。第二組中，絲氨酸是中性條件下不帶電荷的極性氨基酸，丙氨酸是非極性氨基酸，所以絲氨酸疏水性差，先被洗脫。
⑧ 請問一下離子交換柱層析分離氨基酸的洗脫曲線用什麼軟體能做出來謝謝了
EXCEL就可以
⑨ 20種氨基酸用離子交換層析法分離順序
這看你用什麼填料進行交換層析了，還有離子交換緩沖液的pH多少。
因為氨基酸有酸性氨基酸、鹼性氨基酸以及中性氨基酸。不同交換條件分離順序不同。