① 提取DNA之前為什麼用
提取DNA需要在鹼來性條件下的原因如下:源
在酸性條件下,DNA容易被水解,但最不穩定是的嘌呤與脫氧核糖之間的糖苷鍵.在鹼性條件下,RNA由於2'-OH的存在,比DNA要容易水解得多,DNA在鹼性條件下相對穩定.
DNA提取方法:
酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,消化蛋白,然後用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
甲醯胺解聚法:破碎細胞同上,然後用高濃度甲醯胺解聚蛋白質與DNA的結合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪於乙醇上,然後用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沉澱液繞於玻棒。生成DNA約80kb。
異丙醇沉澱法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態)
表面活性劑快速制備法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然後用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉澱或透析。
加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鍾,然後離心後取上清,可用於PCR反應。
鹼變性快速制備:先用NaOH作用20分鍾,再加HCI中和,離心後取上清,含少量DNA。
② DNA變性,溶液摩爾濃度至少為多少
變性的本質是這些化合物與DNA之間發生反應或者氫鍵的重構。
所以理論上只要有這些物質存在,就內會變容性。
但是我們一般是要求DNA完全變性,這就需要一定用量,但DNA含量難以確定,同時為了保證有效,實際用量會大大超出理論。
所以你的問題其實毫無實際意義,參考別人的經驗即可。
另外,你不覺得你說 「『純』的甲醯胺為『29.6mol/L』」 前後矛盾么?
③ DNA測序反應中Hi-Di甲醯胺起什麼作用
這么會有這么笨的答案?而居然其還被採納了?太不專業了。。。
甲醯胺是強變性劑,可以打回斷鹼基間的答氫鍵,阻止測序PCR產物形成2級結構。2級結構的形成將會通過產物的形態,來改變其遷移速度,使最終的結果出現誤差。