A. 純水是否能通過高效液相色譜柱
看是什麼柱子,有一些做糖的柱子就是要求純水做流動相的。但一般的C8或C18柱子不行,要求最少5%有機相,以防對色譜柱傷害
B. 色譜柱為什麼不能用水洗
你說的太籠統,到底是氣相色譜柱,還是液相色譜柱?是其中的哪一類型的?
有的色譜柱是可以用水洗的,這要看固定相的類型。
C. 在沖洗高效液相C18反相柱的時候,為什麼不能用純水
相C18色譜柱(即憎水柱子)如果用純水沖洗後,如果立即停泵則由於其憎水(疏水專)的緣故使得柱子內屬的水因而流失掉,長時間停泵使得柱子幹掉(變干),會造成柱子內固定相填料表面鍵合的硅烷基結構塌陷(也說成是失去支撐倒下),柱子就這樣報廢了。那麼一旦沖洗柱子用了純水相怎麼辦呢?誒!不要驚慌,只要你不停泵,上述情況不會立即發生,我們只要保證最後用有機相沖洗柱子,停泵後使柱子內留存的是有機相,就無大礙,
D. 液相色譜C18柱堵塞後如何沖洗柱子,能用純水 沖柱子嗎
C18柱子不能用純水沖洗,再說本來就堵了,壓力很高應該選擇壓力低的溶劑。
如果內你確定是堵容塞了,就用純乙腈反沖,先用低一點的流速,比如01ml/min,看壓力情況,不要超過200bar,再慢慢提高流速,但不要超過1.的流速,如果是真的堵了,可能會壓力慢慢降下來的。
如果上面方法不行,那還有可能是鹽析堵的,那就用乙腈:水=90:10反沖。
E. 離子色譜柱能用純水沖洗嗎,這樣是否會影響柱子的性能。
按看說明書或咨詢色譜柱廠商,防止損害色譜柱,離子柱都不便宜,小心為上。
用純水短時間內沖洗色譜柱,通常不會對色譜柱造成較大的損傷,但如果長時間用水沖洗色譜柱則
可能引起固定相流失和相塌陷現象,所以若非必要請盡量避免用純水沖洗色譜柱,建議在水中加入一定
量的甲醇或乙腈進行沖洗,通常水的含量<90%不會對色譜柱造成任何影響。
原因分析:
首先,由於目前所用的色譜柱大多以硅膠為基質,硅膠的溶解特點是在純水中的溶解度比在含有一
定濃度有機溶劑的流動相中要大得多,所以長時間的用純水沖洗會導致固定相的流失,引起柱效下降。
其次,對於常規的 C18 柱而言,由於C18 長鏈與水是不互溶的,C18 長鏈之間的相互作用力大於
C18 與水分子的作用力,長時間的用水沖洗,使得C18 長鏈之間相互靠近,水流的沖刷,導致相互聯結
的C18 長鏈倒伏在硅膠基質的表面,對疏水性物質的保留能力下降,即相塌陷。針對用純水沖洗容易出
現相塌陷的現象,有些廠家推出了純水柱(如我公司的UltimateTM AQ-C18 柱),這種純水柱可以用純
水作流動相而不會產生相塌陷,這對只溶於純水的樣品的分析提供了一個很好的選擇。
第三,如使用過含緩沖鹽的流動相的色譜柱,用純水沖洗,並一定能將緩沖鹽完全洗去。因為,由
於緩沖鹽難溶於有機溶劑,C18 反相柱中用的填料是在硅膠表面上接上許許多多的C18 長鏈,相當於一
個疏水的有機相,而硅膠基體被有機物質包裹著,所以用純緩沖鹽水溶液做流動相時也許緩沖鹽不容易
到達硅膠基質,不至損害基體。但所用的流動相通常會含一部分有機溶劑,而且這些有機溶劑與C18
長鏈是互溶的,因此有機溶劑的加入增強了流動相滲入硅膠基質的能力,能使部分緩沖鹽達到硅膠基質。
同樣的道理,用純水沖洗只能洗掉表面的緩沖鹽,而滲入深處的緩沖鹽則仍然殘留在那裡。所以最好在
水中加入部分有機溶劑進行沖洗,一般的C18 柱通常用含水20%~90%都可以,含水的比例要視分析
時使用的流動相來定,原則上,用於沖洗的流動相中水的比例應該等於或高於(緩沖鹽用後清洗的情況,
推薦使用「等於」)分析時所用流動相中水的比例。
F. 為什麼HPLC中不可用純水洗色譜柱
一般液相柱的固定相C18、C8等鍵合相在水中容易發生水解從而與硅膠基質分離,在強酸專性或強鹼性下水解得更快,屬所以一般盡量不要用100%的水洗,可以用95%的水+5%甲醇或乙腈
如必須用100%的水來洗去某種鹽的話,時間不要長,不要斷流,並逐步過渡到有機相
G. 苯基鍵合硅膠色譜柱柱為什麼不能用純水沖洗
這個問題比較難回答。因為注意的東西比較多,比如:
首先是色譜柱的方向問題。大多數色譜柱會標明方向。這個傻子都知道,安裝的時候要順著方向安裝。不過也有一些色譜柱沒有方向,這些是雙相填料的色譜柱。第一次使用時的方向就是它的方向。不過所有的色譜柱都是,一旦開始使用,就不要轉換方向。這樣會損毀色譜柱。
第二個是柱壓問題。一般的色譜柱壓力最好不要超過20MPa,壓力過高會加速損毀色譜柱。
第三,柱溫。色譜柱溫度最好不要超過45℃。也是會加速損毀色譜柱。
還有pH值。色譜柱的pH值范圍是不同的。大多數色譜柱的pH值范圍是4-7左右。有些偏向酸性,有些偏向鹼性的,還有一些pH值廣泛的。這些按照說明書操作即可。
除此之外,色譜柱還有別的一些需要注意的事情。
首先,鍵合硅膠色譜柱分成幾種。比如C18、C8、苯基柱這些的使用方法都差不多。是反相色譜柱。它們的流動相中還有大量的水,還有無機鹽。這個時候需要注意,無機鹽是不能夠長時間留在色譜柱裡面的。色譜柱最好保存在純甲醇或者純乙腈裡面。但是無機鹽不能溶於純甲醇或者純乙腈。所以中間要過渡甲醇水或者乙腈水。
而有些色譜柱比較特殊,比如氨基柱、氰基柱。他們是可以用於正相,也可以用於反相。所以使用的時候注意區分。配置流動相的時候也避免使用大量的水相。
其他的暫時想不到。或者說你想問的問題可以提出來,大家討論討論。