1. 配置depc水時,為什麼一定要過夜處理呢,而不是說幾個小時後就可以用了呢
主要原因就是為了DEPC能被分解,而不至於殘留到耗材上對下游實驗有影響,或是對人身健康有危害,因此才會過夜處理的。
DEPC(處理)水是指用DEPC處理過並經高溫高壓消毒的MiliQ純水。MiliQ純水加0.1% DEPC,混勻過夜,121℃,20min。而後DEPC即降解成二氧化碳和酒精,失去毒性。
DEPC是一種有效的核酸酶抑制劑,它能夠與很多酶的-NH,-SH或-OH等基團發生反應,從而破壞酶的活性中心。DEPC溶液濃度約為0.1% (v/v)時可使RNase失活,從而防止RNA被降解。在進行RNA實驗時,常用DEPC處理實驗所用的各種試劑。
(1)depc水處理tip頭擴展閱讀:
DEPC水可以用於RNA沉澱的溶解,含有RNA的各種反應體系如反轉錄、siRNA的退火等,以及其它各種要求無RNase、DNAase和proteinase的反應體系。
但是DEPC有刺激性,對眼睛和氣道粘膜有強刺激,在操作中應盡量在通風的條件下進行,DEPC毒性並不是很強,但吸入的毒性最強。且通過和RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環結合使蛋白質變性,從而抑制酶的活性,常用於生物實驗中RNA的提取等。
2. depc處理水和depc水處理的區別
DEPC處理水是用DEPC(diethyl pyrocarbonate,焦碳酸二乙酯)處理過並經高溫高壓滅菌的MiliQ純水。不含雜質RNA、DNA和蛋內白質。
depc水處理是用DEPC對水進行容處理的手段方法。