㈠ 大孔樹脂濕法裝柱的注意事項
1、做大孔樹脂時應在寬敞的容器中使樹脂充分溶脹，才能裝柱。
2、用之前用乙醇洗脫至流出液與等量水混合不出現沉澱即可，然後用水沖至中性就可上樣。
3、收集樣品洗脫液時應考慮柱床中的死體積。樣品處理完後用百分之95乙醇洗脫再生即可，多次使用後若吸附效果下降，可用酸醇處理。
㈡ 大孔樹脂的上樣量怎麼確定
大孔樹脂的上樣量需要根據料液的進料流量、吸附目標物的含量、溫洞租度、料液PH等諸多因素來確定，通常建議先進行小試試驗確定樹脂對目標物的飽和納飢兆吸附容量，然後再進行樹脂量的設計。大空吸附樹脂和硅膠參析操作是不一樣的，大空吸附樹脂使用前要活化，用水或者醇浸泡12小時，再用酸鹼處理，使用時大多用濕法上樣，它只能粗分，而硅膠是不能見水的，上樣大多用肢絕干法上樣的。可以分離出很多種化合物，一般不較慢。
㈢ 關於羥基蒽醌類化合物的提純
本發明涉及植物葯中有效成分的提取方法，具體涉及從植物葯中提取、分離蒽醌類化合物的方法。
蒽醌(anthraquinone)是具有如下骨架的化合物的總稱。
蒽醌類化合物包括了其不同還原程度的產物和二聚物，如蒽酚(anthranol)、氧化蒽酚(oxanthranol)、蒽酮(anthrone)、二蒽醌 (dianthraquinone)、二蒽酮(dianthrone)等，另外還有這些化合物的甙類。在天然產物中，蒽醌常存在於高等植物的蓼科、豆科、茜草科和低等植物地衣類和菌類的代謝產物中。現代葯理研究證明，蒽醌類化合物具有很強的生物活性及葯理作用。主要有①止血作用：蒽醌類化合物能促進血小板生成，明顯增加纖維蛋白原，使凝血時間縮短，降低毛細血管通透性，改善血管脆性，使血管的收縮活性增加，因此能促進血液凝固。②抗菌作用：蒽醌類化合物對多種細菌均有不同程度的抑製作用，其中以葡萄球菌、鏈球菌最敏感，痢疾桿菌、白喉桿菌、枯草桿菌及傷寒桿菌等也較敏感。抑菌機理主要是抑制菌體糖及代謝中間產物的氧化和脫氫，並能抑制蛋白和核酸的合成，因此可避免臨床上某些抗菌素的毒副反應及耐葯性。③瀉下作用：結合型蒽醌甙類因由糖基的保護，大部分未經吸收直接到達大腸，在腸內被細菌酶分解成甙元和糖。甙元刺激大腸粘膜，並抑制鈉離子從腸腔吸收，使大腸內水分增加，蠕動亢進而致瀉。④利尿作用：蒽醌類化合物能使尿量增加，並促進輸尿管的蠕動，尿中鈉鉀亦明顯增加，而產生利尿降壓作用。其作用是通過減少腸道氨基酸的重吸收，抑制肝腎組織中尿素的合成，提高血中游離必需氨基酸濃度，利用體內尿素氮合成體蛋白和抑制肌蛋白的分解，以及增加尿素和肌酐的排泄來完成的。此外，隨著基礎理論的研究不斷深入，為蒽醌類化合物的臨床應用提供了理論依據。含蒽醌類化合物的中葯制劑在臨床上的應用已涉及到諸多疾病的治療，如可治療冠心病、粘膜潰瘍、淋巴結核、燒燙傷、慢性胃炎、急性膽囊炎、傷骨科疾病、急性腦血管病等危急重症及雜病。
植物葯中存在的蒽醌衍生物多為羥基蒽醌和它們的甙。大多數的蒽醌甙是蒽醌的羥基與糖縮合而成，也有少數是糖與蒽醌的碳原子直接連接而成。通常結合蒽醌分子量小於500，且溶於水和有機溶劑，游離蒽醌分子量約300左右，易溶於有機溶劑如：乙醚、氯仿、苯、乙醇等，還可溶於鹼性水溶液如：氨水、氫氧化鈉溶液等，而不溶於水。目前，從天然產物中提取含蒽醌類化合物的產品主要是中草葯的粗提物，粗提物的總蒽醌含量不大於20％。中草葯中蒽醌類化合物的精製常使用乙醚、苯、氯仿等有機溶劑，雖然所得中葯浸膏的總蒽醌含量可達50％以上。但這些有機溶劑均為易燃易爆的有毒有害試劑，如浸膏中溶劑殘留量不控制好會對人體造成很大傷害，而且該方法危險性大，對環境也有污染不適合大規模生產。
本發明的目的是要提供一種操作簡便、安全、無污染、成本低，從植物葯中提取的蒽醌類化合物選擇性高、有效成分含量高的分離提取方法。
本發明從植物葯中提取、分離蒽醌類化合物的方法是由下列步驟來實現的：
將含有蒽醌類化合物的原葯材用通常方法提取獲得有效成分粗提物，取粗提物加水，用鹼溶液調PH至6.5-10,加入到已裝有大孔吸附樹脂的吸附柱中，粗提物量（g）與樹脂量（ml）重量比為1：10—100；經大孔吸附樹脂柱吸附，以水和洗脫液洗脫，收集洗脫液，濃縮、乾燥即得含有蒽醌類化合物的浸膏，總蒽醌含量≥50％。
本發明所述的粗提物是指含有蒽醌類化合物的原葯材用常規方法經水或有機溶劑提取，去葯渣，提取液適當濃縮或直接濃縮至干製得的有效成分提取物。粗提物亦可用常用精製法進行預處理。粗提物蒽醌總含量為5－30％。
本發明所述的鹼溶液是指氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨水等鹼性水溶液。
本發明所述的有機溶劑是指甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯等。
本發明所述的大孔吸附樹脂為苯乙烯型、2—甲基丙烯酸酯型等大孔吸附樹脂，粒度為210～10080目、比表面積為100～300cm2800cm2、/g、孔徑1020～50A300A。
本發明所述的洗脫液是指甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯以及它們的混合液和氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨水等鹼性水溶液以及鹼性水溶液與上述有機溶劑的混合液。
本發明上柱方式也可是先將粗提物用有機溶劑溶解，拌入大孔吸附樹脂乾粉，然後減壓蒸去有機溶劑後上柱。
大網格吸附劑是70年代發展起來的一項新技術。國外最早用於廢水處理、醫葯工業、分析化學、臨床鑒定和治療等領域。我國在70年代末開始應用大孔吸附樹脂提取、分離中草葯化學成分。
大孔吸附樹脂一般為白色球形顆粒狀，理化性質穩定，不溶於酸、鹼及有機溶媒。對有機物選擇較好，不受無機鹽類及強離子低分子化合物存在的影響。大孔吸附樹脂為吸附性和篩選性原理相結合的分離材料，與以往使用的離子交換樹脂分離原理不同。它本身具有的吸附性，是由於范德華引力或產生氫鍵的結果。篩性原理是由於其本身多孔性結構所決定。正因為這些特性，使得有機化合物尤其是水溶性化合物的提純得以大大的簡化。從顯微形狀上看，大孔吸附樹脂包含有許多具有微觀小球組成的網狀孔穴結構。當這些球體由偶極矩很小的單體聚合製得的不帶任何功能基的吸附樹脂為非極性吸附樹脂，例如，苯乙烯—二乙烯苯體系的吸附樹脂。這類吸附樹脂孔表面的疏水性較強，可通過小分子內的疏水部分的相互作用吸附溶液中的有機物。而中極性吸附樹脂系指含酯基的吸附樹脂，例如，丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯與雙甲基丙烯酸乙二醇酯等交聯的一類共聚物，其表面疏水性部分和親水性部分共存。極性吸附樹脂是指含醯胺基、腈基、酚羥基等含氮、氧、硫極性功能基的吸附樹脂。除此之外，有時把含氮、氧、硫等配體基團的離子交換樹脂稱作強極性吸附樹脂。由於吸附性和篩性原理，有機化合物根據吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附樹脂上經一定的溶劑洗脫而分開。本發明就是利用了大孔吸附樹脂中非極性和中性樹脂的特點，將植物葯中的游離蒽醌和結合蒽醌分離和純化。
本發明用大孔吸附樹脂吸附法替代有機溶劑萃取法，從中葯粗提物中提純、精製蒽醌類化合物，避免使用有毒有害溶劑，操作工藝簡單、成本低、產品質量易於控制，並適用於大規模生產。使中葯制劑有效成分明確、有效成分含量提高到較高水平，為中葯制劑走向國際、走向現代化提供了方便。
實施例一：從大黃中提取蒽醌類化合物
取大黃生葯粗粉500g，加適量95％乙醇浸泡12小時後，加熱迴流提取三次，(三次95％乙醇提取液的量和提取時間分別為800ml、1小時；500ml、0．5小時；500ml、0．5小時)，合並提取液，過濾，濾液濃縮至一定體積，上聚醯胺柱，以水和95％乙醇洗脫，收集醇洗脫液，濃縮、乾燥得大黃粗提物。取大黃粗提物10g5g，用無水乙醇溶解拌樣上大孔吸附樹脂柱(樹脂結構為苯乙烯型、粒度5020~80目、比表面300cm2400cm2/g、孔徑30A100A)，以水和95％乙醇洗脫，收集醇洗脫液，濃縮，乾燥即得，總蒽醌含量≥58%，收率>3．5%。
實施例二：從虎杖中提取蒽醌類化合物
取虎杖生葯粗粉500g，加適量95％乙醇浸泡12小時後，加熱迴流提取三次，(三次95％，乙醇提取液的量和提取時間分別為800ml、1小時；500ml、0．5小時；500ml、0．5小時)，合並提取液，過濾，濾液濃縮至一定體積，上聚醯胺柱，以水和95％乙醇洗脫，收集醇洗脫液，濃縮、乾燥得虎杖粗提物。取虎杖粗提物10g5g，用無水乙醇溶解拌樣上大孔吸附樹脂柱(樹脂結構為苯乙烯型、粒度50目、比表面300cm2400cm2/g、孔徑30A100A)，以水和95％乙醇洗脫，收集醇洗脫液，濃縮，乾燥即得，總蒽醌含量≥52%，收率>3．5％。
實施例三：從何首烏中提取蒽醌類化合物
取何首烏生葯粗粉500g，加適量80％乙醇浸泡12小時後，加熱迴流提取三次，(三次80％乙醇提取液的量和提取時間分別為800ml、1小時；500ml、0．5小時；500ml、0．5小時)，合並提取液，過濾，濾液濃縮至一定體積，上聚醯胺柱，以水和95％乙醇洗脫，收集醇洗脫液，濃縮、乾燥得何首烏粗提物。取何首烏粗提物10g5g，用無水乙醇溶解拌樣上大孔吸附樹脂柱(樹脂結構為苯乙烯型、粒度5020~80目、比表面300cm2400cm2/g、孔徑30A100A，以水和95%乙醇洗脫，收集醇洗脫液，濃縮，乾燥即得，總蒽醌含量≥55%，收率≥3.5%。
實施例一：從大黃中提取蒽醌類化合物
取已處理好的大孔吸附樹脂（樹脂結構為苯乙烯型、粒度5020~80目、比表面300400cm2、孔徑30100A）120ml，濕法裝柱。另取大黃粗提物5g，加水100ml，用4%氫氧化納調節pH至7~8，攪拌溶解後上樣，流速8~15滴/分，待樣品全部加完，先用水洗至流出液幾乎無色或淡黃色不再改變，換95%乙醇洗脫液洗脫，收集醇洗脫液，濃縮，乾燥即得，總蒽醌含量≥58%，收率≥3.5%。
實施例二：從虎杖中提取蒽醌類化合物
取已處理好的大孔吸附樹脂（樹脂結構為苯乙烯型、粒度5020~80目、比表面3400cm2、孔徑30100A）120ml，濕法裝柱。另取虎杖粗提物5g，加水100ml，用4%氫氧化納調節pH至7~8，攪拌溶解後上樣，流速8~15滴/分，待樣品全部加完，先用水洗至流出液幾乎無色或淡黃色不再改變，換95%乙醇洗脫液洗脫，收集醇洗脫液，濃縮，乾燥即得，總蒽醌含量≥52%，收率≥3.5%。
實施例三：從何首烏中提取蒽醌類化合物
取已處理好的大孔吸附樹脂（樹脂結構為苯乙烯型、粒度520~80目、比表面3400cm2、孔徑3100A）120ml，濕法裝柱。另取何首烏粗提物5g，加水100ml，用4%氫氧化納調節pH至7~8，攪拌溶解後上樣，流速8~15滴/分，待樣品全部加完，先用水洗至流出液幾乎無色或淡黃色不再改變，換95%乙醇洗脫液洗脫，收集醇洗脫液，濃縮，乾燥即得，總蒽醌含量≥55%，收率≥3.5%。
1、一種從植物葯中提取、分離蒽醌類化合物的方法，其特徵在於該方法為：將含有蒽醌類化合物的原葯材用通常方法提取獲得有效成分粗提物，取粗提物加水，用鹼溶液調PH至6.5-10,加入到已裝有大孔吸附樹脂的吸附柱中，粗提物量（g）與樹脂量（ml）重量比為1：10—100；經大孔吸附樹脂柱吸附，以水和洗脫液洗脫，收集洗脫液，濃縮、乾燥即得含有蒽醌類化合物的浸膏，總蒽醌含量≥50％。
2、一種如權利要求1所述的從植物葯中提取、分離蒽醌類化合物的方法，其特徵在於其中所述的大孔吸附樹脂為苯乙烯型、2—甲基丙烯酸酯型等大孔吸附樹脂，粒度為2010～80100目、比表面積為100～300cm2800cm2/g、孔徑10～50A400A。
3、一種如權利要求1所述的從植物葯中提取、分離蒽醌類化合物的方法，其特徵在於其中所述的洗脫液是指甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯以及它們的混合液和氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨水等鹼性水溶液以及鹼性水溶液與上述有機溶劑的混合液。
本發明涉及從植物葯中提取、分離蒽醌類化合物的方法。本發明用大孔吸附樹脂吸附法替代有機溶劑萃取法，從中葯粗提物中提純、精製蒽醌類化合物，總蒽醌含量≥50％，避免使用了有毒有害溶劑，操作工藝簡單、成本低、產品質量易於控制，並適用於大規模生產。
㈣ 鋅粉可以與氧化鋁混放嗎
硅膠最適合！因為硅膠的極性最強，孔結構和比表面可以調整，而且沒有有機物污染；相對而言，大孔樹脂因為有有機物材料，早被國家監局列為限制使用產品；而活性氧化鋁的極性不如硅膠，選擇性吸附這一特點上不如硅膠。（1） 硅膠：層析用硅膠為一多孔性物質，分子中具有硅氧烷的交鏈結構，同時在顆
粒表面又有很多硅醇基。硅膠吸附作用的強弱與硅醇基的含量多少有關。硅醇基能夠通過氫鍵的形成而吸附水分，因此硅膠的吸附力隨吸著的水分增加而降低。若吸水量超過17％，吸附力極弱不能用作為吸附劑，但可作為分配層析中的支持劑。對硅膠的活化，當硅膠加熱至100～110℃時，硅膠表面因氫鍵所吸附的水分即能被除去。當溫度升高至500℃時，硅膠表面的硅醇基也能脫水縮台轉變為硅氧烷鍵，從而喪失了因氫鍵吸附水分的活往，就不再有吸附劑的性質，雖用水處理亦不能恢復其吸附活性。所以硅膠的活化不宜在較高溫度進行（一般在170cC以上即有少量結合水失去）。
硅膠是一種酸性吸附劑，適用於中性或酸性成分的層析。同時硅膠又是一種弱酸性陽離子交換劑，其表面上的硅醇基能釋放弱酸性的氫離子，當遇到較強的鹼注化台物，則可因離子交換反應而吸附鹼性化合物。
（2）氧化鋁：氧化鋁可能帶有鹼性（因其中可混有碳酸鈉等成分），對於分離一些鹼性中草成分，如生物鹼類的分離頗為理想。但是鹼性氧化鋁不宜用於醛、酮、醋、內酯等類型的化合物分離。因為有時鹼性氧化鋁可與上述成分發生次級反應，如異構化、氧化、消除反應等。除去氧化鋁中絢鹼性雜質可用水洗至中性，稱為中性氧化鋁。中性氧化鋁仍屬於鹼性吸附劑的范疇，本適用於酸性成分的分離。用稀硝酸或稀鹽酸處理氧化鋁，不僅可中和氧化鋁中含有的鹼性雜質，並可使氧化鋁顆粒表面帶有NO3一或CI一的陰離子，從而具有離於交換劑的性質，適合於酸性成分的層析，這種氧化鋁稱為酸性氧化鋁。供層析用的氧化鋁，用於拄層析的，其粒度要求在100～160目之間。粒度大子100目，分離效果差：小於160目，溶濃流速大慢，易使譜帶擴散。樣品與氧化鋁的用量比，一般在1：20～50之間層析柱的內徑與柱長比例在1：10-20之向。
在用溶劑沖洗柱時，流速不宜過快，洗脫液的流速一般以每半～1小時內流出液體的毫升數與所用吸附劑的重量（克）相等為合適。
（3）活性炭：是使用較多的一種非極性吸附劑。一般需要先用稀鹽酸洗滌，其次用乙醇洗，再以水洗凈，於80℃乾燥後即可供層析用。層析用的活性炭，最好選用顆粒活注炭，若為活性炭細粉，則需加入適量硅藻土作為助濾劑一並裝柱，以免流速太慢。活性炭主要且於分離水溶性成分，如氨基酸、糖類及某些甙。活性炭的有為吸附作用，在水溶液中最強，在有機溶劑中則較低弱。故水的洗脫能力最弱，而有機溶劑則較強。例如以醇-水進行洗脫時，則隨乙醇濃度的遞增而洗脫力增加。活性炭對芳香族化合物的吸附力大於族化合物，對大分子化合物的吸附力大於小分子化合物。利用這些吸附性的差別，可將水溶性芳香族物質與族物質分開，單糖與多糖分開，氨基酸與多肽分開。下邊我就硅膠作為分離提純的介質詳細做以描述：硅膠表面結構概述在色譜和工業水處理領域中，無定形硅膠已得到了廣泛的應用，它具有多孔的無定形結構，不產生任何x 射線衍射[1,4]。硅膠的表面存在著硅醇基團(si-oh)和暴露的硅氧烷鍵(si-o-si)。硅醇基團是強吸附的極性基團，而硅氧烷鍵是疏水基團。硅氧烷鍵上的δ鍵被dπ-pπ作用而加強，氧原子上的孤對電子參與π作用，不能參與給體與受體間的相互作用，不能形成氫鍵。scott和kucera證實硅氧烷基團幾乎不吸附極性溶劑分子。然而，由於硅氧烷鍵的疏水作用性，可以吸附某些非極性溶劑分子。對硅膠改性而言，硅醇基比硅氧烷基重要得多。硅醇基團可以孤立、成對(雙生)和締合(連位)等不同的方式存在於硅膠表面。最近研究表明，不僅兩個或兩個以上的締合硅醇基團可以形成鍵合對，甚至成對硅醇基團也可以形成鍵合對。硅膠表面的結構可以通過許多方法進行測定。一般情況下，隨著比表面積的增加，硅膠表面上硅醇基團的濃度略有降低。通常硅醇含量的測定方法有同位素交換法、滴定法、光譜法和烷基鋁法等。nawrock[1]報道了用同位素交換法測定硅膠表面的硅醇基濃度是8.0±1.0μmol/m2，而且這個數值常常被視為硅膠的物理化學常數。硅醇基團具有明顯的酸性，測定的pka值是7.1。通過對硅膠表面的結構分析，可知硅膠表面硅醇基的類型、濃度和表面分布都會影響所制備鍵合相的性能，而硅膠的預處理則可以改變表面硅醇類型的分布，提高表面的締合硅醇的含量，改善硅膠表面鍵合相的性能。 柱層析硅膠在生物工程技術中應用的突出優勢 （1）具有剛性的骨架結構，機械強度高，可以耐受30MPa以內的壓力；
（2）優良的吸附性能，對性質、結構相似乃至同分異構體都有理想的分離功能；
（3）有良好的熱穩定性和化學穩定性；
（4）與有機柱填料相比，硅膠為固體以SiO2為基質的膠體，結構緻密，在應用中不會發生有機質流失而污染目標產物；
（5）能從多組分溶液中有選擇地吸附提純同分異構體組分；
（6）在制備柱層析硅膠過程中，可以通過控制不同工藝條件生產出平均孔徑20?-20000?的一系列產品以適應不同性質、分子量和分子結構的物質的分離純化。3) 試劑柱層析硅膠及應用
試劑柱層析硅膠是具有固體特性的膠態體系，由形成凝集結構的膠體粒子構成。膠體粒子是水合狀態硅膠（多硅酸）的縮聚物，屬非晶態物質。膠體粒子的集合體的間隙形成試劑柱層析硅膠顆粒內部的微孔隙結構。因此，它是一種具有豐富微孔結構，高比表面積、高純度、高活性的優質吸附材料。
試劑柱層析硅膠的主要性能特點--吸附特性，取決於原料硅膠生產過程中所形成的微孔結構和內孔表面。因此，生產過程中首先注重原料--粗孔塊狀硅膠質量的優選，優選指標應控制：吸附容量80±2%，比表面積約360m2/g，平均孔徑要求在9nm（90 Angstrom)左右。在選擇原料的基礎上，進一步加工。其加工過程主要是：原料粉碎 粒度分級 酸處理 純水洗滌乾燥 包裝檢驗。
試劑柱層析主要控制指標：
氯化物（cl）≤0.004%
鐵 (Fe) ≤0.02%
PH(10%水懸浮液)5-6
試劑柱層析硅膠的主要用途有以下幾個方面：
（1） 用於中草及化學合成物、生物活性物質的分離提取；
（2） 工業上生物發酵過程中用於提取高分子蛋白的多肽等生物活性物質和用於酸工程技術；
（3） 通過柱層析硅膠的吸附分離制備高純物質；
（4） 有機物質的脫水精製；
（5） 食用植物油脫除有害成分；
（6） 用於石油製品的精製，如抽提油（石腦油在600C-900C的食留份）脫除芳烴類雜質的精製等。
柱層析硅膠的分離、提純、脫水精製機理；柱層析硅膠的微觀結構與通用硅膠沒有大的差別，構成膠體骨架的SiO2呈硅氧四面體結合，原子間的力場是平衡的。如前所述，硅膠有很高的比表面積，硅膠粒子內部孔隙的表面結構與形成的骨架內部結構不同，表面的硅原子與膠體所含的結構水形成硅醇基，即，這種結構的不平衡性使硅膠的表面產生自由力場，即對水分子或其他極性分 子有吸附能力，被吸附物質因分子極性強弱不同，膠體粒子表面對其表現的吸附力大小有不同程度的差別。由於這方面原因，硅膠對不同物質的混合物的吸附具有選擇性。當分子極性較強的物質組份通過硅膠表面時，與硅膠產生的吸附力也較強，該物質組份在硅膠表面的保留時間較長；相反，分子極性較弱的組份，其保留時間較短。故不同物質的混合物因在通過硅膠過程中因保留時間的差別而得到分離。對於分子極性很強的物質，硅膠對其吸附能力很強，如水分子即是。在這種情況下，被吸附的物質分子只有在獲得足夠的能量（如熱能）時才能克服硅膠表面產生的引力場的位壘而脫離硅膠表面。這樣，在通常條件下，含有強極性物質組份的混合物在通過硅膠柱層時，其中的強極性物質組份被保留在硅膠孔隙內部，從而表現出硅膠的脫水精製或提純物質的能力。硅膠柱層析技術硅膠柱層析原理
硅膠層析法的分離原理是根據物質在硅膠上的吸附力不同而得到分離， 一般情況下極性較大的物質易被硅膠吸附，極性較弱的物質不易被硅膠吸附，整個層析過程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸過程。 硅膠柱層析流動相
極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統；極性較大的用甲醇：氯仿系統；極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統；拖尾入少量氨水或冰醋酸硅膠柱層析慣用方法
稱量。200-300目硅膠，稱30-70倍於上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。
2.攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預先用無水硫酸鈉久置乾燥。氯仿用無水氯化鈣乾燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。
3.裝柱。將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約1/3體積石油醚（氯仿），裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內。隨著沉降，會有一些硅膠沾在蓄液球內，用石油醚（氯仿）將其沖入柱中。
4.壓實。沉降完成後，加入更多的石油醚，用雙聯球或氣泵加壓，直至流速恆定。柱床約被壓縮至9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應進行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時由於柱床萎縮產生開裂。
5.上樣。干法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣後，加入一些洗脫劑，再將一團脫脂棉塞至接近硅膠表面。然後就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面。
6.過柱和收集。柱層析實際上是在擴散和分離之間的權衡。太低的洗脫強度並不好，用梯度洗脫。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收一餾分；1-2g上樣量，50g硅膠（200-300目），20-50ml收一餾分。
7.檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑底1-2個數量級。
8.送譜。收集的產品旋干，在送譜前通常需要重結晶。如果樣品太少或為液體，可過一小凝膠柱，作為送譜前的最後純化手段。可除去氫譜1.5ppm左右所謂的「硅膠」峰。注意事項
1.先根據TLC方法篩選好洗脫劑，使兩相鄰物質Rf值之差最大化
2.將柱子必須裝平整、均勻
3.考慮有限柱填料的吸附量
4.可考慮用剃度法分開並洗脫