紫外差值光譜法測定廢水中的微量酚

㈠ 求工業污水中氮磷鉀的具體測定方法，謝謝

總磷的測定 鉬酸銨分光光度法
用過硫酸鉀（或硝酸－高氯酸）為氧化劑，將未經過濾的水樣消解，用鉬酸銨分光光度測定總磷的方法。
總磷包括溶解的、顆粒的、有機的和無機磷。
本標准適用於地面水、污水和工業廢水。
取25mL試料，本標準的最低檢出濃度為0.01mg/L，測定上限為0.6mg/L。
在酸性條件下，砷、鉻、硫干擾測定。
2 原理
在中性條件下用過硫酸鉀（或硝酸－高氯酸）使試樣消解，將所含磷全部氧化為正磷酸鹽。在酸性介質中，正磷酸鹽與鉬酸銨反應，在銻鹽存在下生成磷鉬雜多酸後，立即被抗壞血酸還原，生成藍色的絡合物。
3 試劑
本標准所用試劑除另有說明外，均應使用符合國家標准或專業標準的分析試劑和蒸餾水或同等純度的水。
3.1 硫酸(H2SO4)，密度為1.84g/mL。
3.2 硝酸(HNO3)，密度為1.4g/mL。
3.3 高氯酸(HClO4)，優級純，密度為1.68g/mL。
3.4 硫酸(H2SO4)，1：1。
3.5 硫酸，約c(1/2H2SO4)＝1mo1/L：將27mL硫酸(3.1)加入到973mL水中。
3.6 氫氧化鈉(NaOH)，1mo1/L溶液：將40g氫氧化鈉溶於水並稀釋至1000mL。
3.7 氫氧化鈉(NaOH)，6mo1/L溶液；將240g氫氧化鈉溶於水並稀釋至1000mL。
3.8 過硫酸鉀，50g/L溶液：將5g過硫酸鉀(K2S2O8)溶解干水，並稀釋至100mL。
3.9 抗壞血酸，100g/L溶液：溶解10g抗壞血酸(C6H8O6)於水中，並稀釋至100mL。
此溶液貯於棕色的試劑瓶中，在冷處可穩定幾周。如不變色可長時間使用。
3.10 鉬酸鹽溶液：溶解13g鉬酸銨[(NH4)6Mo7O24·4H2O]於100mL水中。溶解0.35g酒石酸銻鉀[KSbC4H4O7· 1 H2O]於100mL水中。在不斷攪拌下把鉬酸銨溶液徐徐加到300mL硫酸(3.4)中，加酒石酸銻鉀溶液並且混合均勻。
此溶液貯存於棕色試劑瓶中，在冷處可保存二個月。
3.11 濁度-色度補償液：混合兩個體積硫酸(3.4)和一個體積抗壞血酸溶液(3.9)。使用當天配製。
3.12 磷標准貯備溶液：稱取0.2197±0.001g於110℃乾燥2h在乾燥器中放冷的磷酸二氫鉀(KH2PO4)，用水溶解後轉移至1000mL容量瓶中，加入大約800mL水、加5mL硫酸(3.4)用水稀釋至標線並混勻。1.00mL此標准溶液含50.0μg磷。
本溶液在玻璃瓶中可貯存至少六個月。
3.13 磷標准使用溶液：將10.0mL的磷標准溶液(3.12)轉移至250mL容量瓶中，用水稀釋至標線並混勻。1.00mL此標准溶液含2.0μg磷。
使用當天配製。
3.14 酚酞，10g/L溶液：0.5g酚酞溶於50mL95％乙醇中。
4 儀器
實驗室常用儀器設備和下列儀器。
4.1 醫用手提式蒸汽消毒器或一般壓力鍋(1.1～1.4kg/cm2)。
4.2 50mL具塞(磨口)刻度管。
4.3 分光光度計。
註：所有玻璃器皿均應用稀鹽酸或稀硝酸浸泡。
5 采樣和樣品
5.1 採取500mL水樣後加入1mL硫酸(3.1)調節樣品的pH值，使之低於或等於1，或不加任何試劑於冷處保存。
註：含磷量較少的水樣，不要用塑料瓶采樣，因易磷酸鹽吸附在塑料瓶壁上。
5.2 試樣的制備：
取25mL樣品(5.1)於具塞刻度管中(4.2)。取時應仔細搖勻，以得到溶解部分和懸浮部分均具有代表性的試樣。如樣品中含磷濃度較高，試樣體積可以減少。
6 分析步驟
6.1 空白試樣
按(6.2)的規定進行空白試驗，用水代替試樣，並加入與測定時相同體積的試劑。
6.2 測定
6.2.1 消解
6.2.1.1 過硫酸鉀消解：向(5.2)試樣中加4mL過硫酸鉀(3.8)，將具塞刻度管的蓋塞緊後，用一小塊布和線將玻璃塞扎緊(或用其他方法固定)，放在大燒杯中置於高壓蒸汽消毒器(4.1)中加熱，待壓力達1.1kg/cm2，相應溫度為120℃時、保持30min後停止加熱。待壓力表讀數降至零後，取出放冷。然後用水稀釋至標線。
註：如用硫酸保存水樣。當用過硫酸鉀消解時，需先將試樣調至中性。
6.2.1.2 硝酸-高氯酸消解：取25mL試樣(5.1)於錐形瓶中，加數粒玻璃珠，加2mL硝酸(3.2)在電熱板上加熱濃縮至10mL。冷後加5mL硝酸(3.2)，再加熱濃縮至10mL，放冷。加3mL高氯酸(3.3)，加熱至高氯酸冒白煙，此時可在錐形瓶上加小漏斗或調節電熱板溫度，使消解液在錐形瓶內壁保持迴流狀態，直至剩下3～4mL，放冷。
加水10mL，加1滴酚酞指示劑(3.14)。滴加氫氧化鈉溶液(3.6或3.7)至剛呈微紅色，再滴加硫酸溶液(3.5)使微紅剛好退去，充分混勻。移至具塞刻度管中(4.2)，用水稀釋至標線。
註：①用硝酸-高氯酸消解需要在通風櫥中進行。高氯酸和有機物的混合物經加熱易發
生危險，需將試樣先用硝酸消解，然後再加入硝酸-高氯酸進行消解。
②絕不可把消解的試作蒸干。
③如消解後有殘渣時，用濾紙過濾於具塞刻度管中，並用水充分清洗錐形瓶及濾
紙，一並移到具塞刻度管中。
④水樣中的有機物用過硫酸鉀氧化不能完全破壞時，可用此法消解。
6.2.2 發色
分別向各份消解液中加入1mL抗壞血酸溶液(3.9)混勻，30s後加2mL鉬酸鹽溶液(3.10)充分混勻。
註：①如試樣中含有濁度或色度時，需配製一個空白試樣(消解後用水稀釋至標線)然
後向試料中加入3mL濁度-色度補償液(3.11)，但不加抗壞血酸溶液和鉬酸鹽溶液。然
後從試料的吸光度中扣除空白試料的吸光度。
②砷大於2mg/L干擾測定，用硫代硫酸鈉去除。硫化物大於2mg/L干擾測定，
通氮氣去除。鉻大於50mg/L干擾測定，用亞硫酸鈉去除。
6.2.3 分光光度測量
室溫下放置15min後，使用光程為30mm比色皿，在700nm波長下，以水做參比，測定吸光度。扣除空白試驗的吸光度後，從工作曲線(6.2.4)上查得磷的含量。
註：如顯色時室溫低於13℃，可在20～30℃水花上顯色15min即可。
6.2.4 工作曲線的繪制
取7支具塞刻度管(4.2)分別加入0.0，0.50，1.00，3.00，5.00，10.0，15.0mL磷酸鹽標准溶液(3.14)。加水至25mL。然後按測定步驟(6.2)進行處理。以水做參比，測定吸光度。扣除空白試驗的吸光度後，和對應的磷的含量繪制工作曲線。
7 結果的表示
總磷含量以C(mg/L)表示，按下式計算：C=m/v

式中：m——試樣測得含磷量，μg；
V——測定用試樣體積，mL。
8 精密度與准確度
8.1 十三個實驗室測定(採用6.2.1.1消解)含磷2.06mg/L的統一樣品。
8.1.1 重復性
實驗室內相對標准偏差為0.75％。
8.1.2 再現性
實驗室間相對標准偏差為1.5％。
8.1.3 准確度
相對誤差為＋1.9％。
8.2 六個實驗室測定(採用6.2.1.2消解)含磷量2.06mg/L的統一樣品。
8.2.1 重復性
實驗室內相對標准偏差為1.4％。
8.2.2 再現性
實驗室間相對標准偏差為1.4％。
8.2.3 准確度
相對誤差為1.9％。
質控樣品主要成分是乙氨酸(NH2CH2COOH)和甘油磷酸鈉。

㈡ 為什麼要採用苯酚的差值光譜法測定未知樣品中苯酚的含量

苯酚差值光譜法測定未知樣品中苯酚的含量：
（1）具有快速、靈敏,實驗結果穩定、可靠之特點,而且有效地消除了紫外-可見分光光度法中有機雜質的干擾
（2）可以消除因為系統的光源不穩定,檢測器靈敏度變化等由於系統本身的原因而引起的系統誤差.
從而測定結果更准確,結果更具可靠性.

㈢ 為什麼採取苯酚差值光譜法測定未知樣品中苯酚的含量

苯酚差值光譜法測定未知樣品中苯酚的含量：
（1）具有快速、靈敏,實驗結果穩定、可靠之特點,而且有效地消除了紫外-可見分光光度法中有機雜質的干擾
（2）可以消除因為系統的光源不穩定，檢測器靈敏度變化等由於系統本身的原因而引起的系統誤差。
從而測定結果更准確，結果更具可靠性。

㈣ 甘油三酯的測定方法

血清甘油三酯/三醯甘油（TG）是一項重要的臨床血脂常規測定指標，特別是隨著對其致動脈粥樣硬化（AS）作用研究的深入，TG作為冠心病的一項獨立的危險因素日益受到重視。但是血清TG測定及其臨床應用尚存在很多問題，如生物學變異、游離甘油對測定的影響、測定的標准化系統不完善等等。本文僅對TG的生物化學、測定方法與標准化、臨床意義等方面的近況作一簡述。 血清TG測定方法一般可分為化學法、酶法和色譜法3大類。早期測定方法是以總脂質與膽固醇和磷脂之差估算。化學法用有機溶劑抽提標本中的TG，去除抽提液中磷脂等干擾物後，用鹼水解（皂化）TG，以過碘酸氧化甘油生成甲醛，然後用顯色反應測甲醛。比較准確的是二氯甲烷-硅酸-變色酸法（Van Handel-Caslson法），此法抽提完全、能去除磷脂及甘油干擾、變色酸顯色靈敏度高、顯色穩定，至今還是美國疾病控制與預防中心（CDC）的內部參考方法。但因操作步驟繁多、技術要求高而不適於常規工作應用。核素稀釋/氣相色譜/質譜技術（ID/GC/MS）主要用作參考系統中決定性方法的建立及參考物質的制備與定值，此法費用昂貴，樣品處理復雜，難以推廣應用。
所有的臨床實驗室都用酶法檢測血清TG水平，雖然方法各異，但一般都包括3個基本步驟[3,5～7]：用最合適的LPL水解TG生成甘油和FFA；接著是轉化，該步驟一般只用一種酶，例如甘油激酶，將甘油磷酸化以進行下一步反應，或者生成中間待測物；最後是有色染料（常為醌亞胺等）或者紫外吸收物質的形成，再通過分光光度法計算相應的TG濃度。如脂蛋白脂肪酶-甘油磷酸氧化酶- 過氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法（GPO-PAP 法）等。此法具有簡便快速、微量、精密度高的優點，且特異性強，易於達到終點，線性范圍寬。用一步法測定的是血清總甘油酯（定義為TG和FG及少量甘油二酯、甘油一酯之和，習慣統稱為TG）。為了消除FG的干擾，中華醫學會檢驗分會曾推薦GPO-PAP 法的兩步酶法作為血清TG常規測定方法[7]，該法不增加試劑成本和工作量，適合自動化分析，由於試劑分成兩部分加入，對正確設置分析測定參數有較高要求。對此法能否去凈游離甘油方面有人提出質疑。針對這一情況，中華醫學會檢驗分會在《關於臨床血脂測定的建議》文件中建議酶法如GPO-PAP 法作為臨床實驗室測定血清TG的常規方法。普通臨床常規實驗室可採用一步GPO-PAP法，有條件的實驗室（如三級以上醫院）應考慮開展游離甘油的測定。
血清FG對TG測定結果的影響一直是臨床十分關注的問題。國外資料顯示，正常人體血清FG含量為0.06～0.22mmol/L，約占總TG的6%～14%[3]。國內的研究結果與此相近，中國正常人血清FG 水平平均約為0.08mmol/L（0.02～ 0.33mmol/L），約占總TG7.19%（0.81% ～21.64%）。雖然臨床標本中FG顯著升高者很少見，但有些異常或病理情況下如應激反應（腎上腺素激活LPL促進體內脂肪水解），劇烈運動，服用含甘油的葯物如硝酸甘油，靜脈輸入含甘油的營養液，肝素治療，某些嚴重的糖尿病、肝病與腎病，取血器材或試管塞上帶有甘油等時，可見血清FG顯著升高，並給臨床決策帶來誤導[3]。因此，可採取測定「真」TG的方法減少其影響：一種是同時測定總甘油和FG，兩個結果的差值反應了真TG濃度（外空白法），另一種是用上文所述的兩步酶法直接測定TG（內空白法）。前者國內外應用較少，後者國外（如日本）使用較多，已有許多臨床實驗室開展。
對於FG空白的設置建議採取如下措施：
⑴臨床實驗室應備有可以做FG空白的檢測系統，在任何情況下都可以做FG空白；
⑵TG報告單中應標明是否為FG空白結果，實驗室應告知臨床醫生FG空白的意義；
⑶臨床及基礎研究、參加CDC脂質標准化計劃的實驗室都要做FG空白；
⑷住院病人中內源性甘油過高群體的標本都應做FG空白；
⑸體檢及門診患者可以不做FG空白，但糖尿病或其他特殊門診例外；
⑹FG>2.3mmol/L者最好做FG空白；
⑺對某些可疑情況，如TG高而血清不混濁應排除高FG的可能。
此外，一些物質如抗氧化物質（維生素C等）、黃疸、溶血、脂血等對酶法測定TG有干擾，可採用設置血清空白予以消除。
在應用自動生化分析儀進行臨床常規TG測定時，還要特別注意交叉污染和基質效應。最易對TG測定產生交叉污染的是總蛋白和鐵試劑，因其還原物質濃度可影響Trinder反應。如果接著TG測定直接膽紅素，也會因表面活性劑的導入產生誤差。鐵測定對TG的影響與亞鐵氰化鉀的量有關。此外，還要注意常規酶法測定TG對制備物的基質效應。Halani等用24份新鮮血清為對照，對5份CAP制備的凍干血清及9份CDC冰凍混合血清進行了評價。以3種商品TG酶試劑測定，以CDC參考方法為對比方法，校正游離甘油後，2種商品試劑對CAP及CDC血清均無基質效應，另一種商品試劑對4份CAP血清有基質效應。也有資料表明，各種質控血清中FG佔TG的12%～85%。我們的研究也發現，臨床使用的各種TG檢測試劑盒、不同的測定/校準系統、質控血清之間存在明顯的基質效應，因此對於不同方法/試劑的選擇，如選用兩步酶法試劑和質控物時要注意其反應的通用性與適用性。 TG測定的結果受取樣時個體生物學變異（CVb）和分析不精密度（CVa）的影響[3]。一般情況下，CVa相對較小（約為3%），而CVb占總變異的90%多[6]。即使嚴格按美國膽固醇教育計劃（NCEP）要求控制的個體，在2周內2次所測的TG結果差異百分比約為膽固醇的5倍，75%以上的個體在兩周內的變異大於10%。李健齋等[9]研究發現，中國人群血清TG個體間變異為28%，居所有血脂項目之首。國外資料表明，空腹2.5月的人群TG變異約25%，非空腹狀態的變異更大，日間約為6.3%～65%，月內為12.9%～34.8%，一年為12.9% ～39.9%，以上數據均為正常個體穩定飲食狀態的結果，某些病理狀態下的波動會更大。
為減少上述變異對TG測定的影響，NCEP建議受試者在兩月內分次測定，兩次間至少間隔一周，測定結果取均值。但當血脂水平遠離醫學決定水平時，則無需多次取樣。標本採集要求受檢者在前三周內不改變飲食習慣，采血前至少12h不進食，72h不飲酒。抽血後應盡快檢測，某些含有高活性LPL的標本，如用肝素治療的病人標本，TG常會過度水解。標本最好放在冰浴中，2h內分離血清。室溫放置1天TG下降達34%。Eberly等研究發現非空腹高TG血症的發生明顯多於空腹，而兩種狀態高TG血症所致冠心病的危險基本相同，因此測非空腹TG更有利於冠心病危險預測。
臨床上常見到肉眼脂血標本，這常與一些潛在的錯誤有關。其中之一是LPL水解TG時產生的「清除效應」。在用血清而非試劑作空白時，大顆粒TRL散射引起假性高基線吸收。隨著反應的進行，TG被水解，脂蛋白顆粒變小，濁度也減小，總的效應是在吸光度上升（產生NADH）的反應中，結果輕微偏低。這種誤差所佔比率較小，且只發生於高濃度TG標本中，其誤差通常是可接受的。另外，肉眼脂血標本特別是CM含量過高者，由於CM漂到樣品杯上層使標本成為多相。因此對於肉眼脂血標本，應充分混勻且盡快檢測。TG水解產生大量脂肪酸，特別是脂血標本，由於其濁度和產物的抑製作用，對分析也有影響。在反應的緩沖液中加入牛血清白蛋白或α-環式糊精可以避免上述情況。 美國的TG測定的參考系統較為完善，其推薦的決定性方法是由美國國家標准與技術研究所（NIST）建立的ID/GC/MS法，以13C3甘油三軟脂酸酯為內標，可測總甘油酯和「凈」TG，一級參考物質為NIST的SRM1595（三軟脂酸甘油酯）；參考方法為CDC的二氯甲烷-硅酸-變色酸法，一直被用作美國CDC-NHLBI血脂標准化計劃中的參考方法，該法用Supelco的三油酸酯和NIST的三軟脂酸甘油酯標准物質SRM 1595的2：1混合物作標准，測定值不僅是TG，還包括（或部分包括）甘油二酯和甘油一酯。二級參考物質有NIST的SRM1951a、CAP RM026及CDC的多種冰凍血清。此法此參考方法步驟繁瑣，實驗室間進行方法學轉移比較困難，CDC擬對其進行改進，以期在膽固醇參考方法實驗室網路（CRMLN）建立一個結合提取、水解步驟的酶法作為「指定參考方法」。
國內陳文祥等建立了高效液相色譜（HPLC）測定總甘油和游離甘油的方法，測定總甘油酯的相對不精密度小於2%，游離甘油小於4%，總甘油平均回收率100.0%，游離甘油99.7%，與ID/GC/MS法相對偏差不大於±2%。此法擬推薦為中國TG測定的參考方法。
血脂測定標准化並非要求統一測定方法，而是要求實驗室測定結果達到所制定的技術目標。對於TG測定，國內外要求不精密度（用CV表示）應不大於5%，不準確度（用偏差表示）應不大於±5%，總誤差應不大於15%。總誤差=偏差%+1.96CV（與參考血清的靶值比較）。特別值得一提的是衛生部北京老年醫學研究所血脂實驗室已於2002年3月被接納CDC的CRMLN成員（全球共12家），在血脂測定的標准化方面積累了豐富的經驗，中國TG測定的參考系統正在建立之中。