『壹』 污水中大腸桿菌怎麼快速檢測
水質（糞）大腸菌群快速檢驗紙片II 1份/包 適用於河水、生活用水、醫療機構處理後排污水、禽畜養殖業等排放廢水中大腸菌群的快速檢測。
1、適用范圍 水質（糞）大腸菌群的測定 紙片快速法
本標准適用於地表水、生活污水、醫療機構及禽畜養殖業等其他行業排放的廢水中（糞）大腸菌群的快速篩查。
本方法的檢出限為20MPN/L。
2、規范性引用文件
本標准內容引用了下列文件或其中的條款。凡是不註明日期的引用文件，其有效版本適用於本標准。HJ/T91地表水和污水監測技術規范。
3、術語和定義
下列術語和定義適用於本標准。
3.1總大腸菌群（total coliforms）
在37℃培養，24h內能發酵乳糖酸產氣的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。
3.2 糞大腸菌群（fecal coliforms）
44.5℃培養，24h內能發酵乳糖產酸氣的總大腸菌群，屬糞行來源，稱為糞大腸菌群。
4、方法原理
將一定量的乳糖、指示劑（溴甲酚紫和2，3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC）以及營養成分等吸附於一定面積的無菌濾紙上，當細菌生長繁殖時，產酸使PH值降低，溴甲酚紫指示劑由紫色變黃色。同時，產氣過程相應的脫氫酶在適宜的PH范圍內，催化底物脫氫還原TTC形成紅色的不溶性三苯甲臢（TTF），即可在產酸後的黃色背景下顯示出紅色斑點（或紅暈）。通過上述指示劑的顏色變化就可對是否產酸產氣作出判斷，從而確定是否有（糞）大腸菌群存在，再通過查MPN表就可得出相應（糞）大腸菌群的濃度值。
5、試劑和材料
除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純化學試劑。
5.1市售水質總大腸菌群、糞大腸菌群測試片：
1、0ml水樣量紙片按附錄A的方法進行質量鑒定，達到要求後方可使用。
5.2無菌水
用新制備的去離子水或蒸餾水，按無菌操作要求，121℃高壓蒸汽滅菌20min，備用。
5.3硫代硫酸鈉溶液：ρ(Na2S2O3)=0.10g/ml
稱取硫代硫酸鈉10g，溶於適量蒸餾水（或去離子）中，稀釋至100ml，現配。
5.4乙二胺四乙酸二鈉（EDTA- Na2）溶液：ρ(C10H14N2O8Na2。 2H2O)=0.15g/ml
稱取EDTA-Na2 15g,溶於適量蒸餾水（或去離子水）中，稀釋至100ml，此溶液保質期為30d
『貳』 水中糞大腸菌群的測定
化妝品檢測項目中糞大腸菌群的檢測流程：
10g/mL樣品+90mL滅菌生理鹽水 →10mL+10mL雙倍乳糖膽（含中和劑）培養基→糞大腸菌群 44.5℃，48h培養
註：在化妝品檢測項目中，如果樣品含有油脂性的成分，如精油，在樣品前處理中需加入液體石蠟、吐溫80、生理鹽水進行均質，使樣品能夠均勻分散開來。
糞大腸菌群又是一個什麼樣的微生物呢？下面我們來詳細介紹下：
大腸菌群：大腸菌群並非細菌學分類命名，而是衛生細菌領域的用語，它不代表某一個或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌，這些細菌在生化及血清學方面並非完全一致。
定義（GB2010）：在一定培養條件下能發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌。
糞大腸菌群：大腸菌群的一種，又稱耐熱大腸菌群，培養溫度：44.5±0.5℃，糞大腸菌群是化妝品檢測項目中必檢的微生物項目。
大腸埃希氏菌：（(Escherichia. coli )通常稱為大腸桿菌。根據不同的生物學特性將致病性大腸桿菌分為5類：
致病性大腸桿菌(EPEC)、
腸產毒性大腸桿菌(ETEC)、
腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、
腸出血性大腸桿菌(EHEC)、
腸黏附性大腸桿菌(EAEC)。
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『叄』 地表水的糞大腸菌群用個/L表示。為什麼污水糞大腸菌群要用MPN表示呢。
大腸菌群測定的操作細則
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100mL(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。
1 設備和材料
1.1 溫箱：36±1℃。
1.2 冰箱:0～4℃。
1.3 恆溫水浴 :44.5±0.5℃。
1.4 天平。
1.5 顯微鏡。
1.6 均質器或乳缽。
1.7 平皿:直徑為90mm。
1.8 試管。
1.9 吸管。
1.10 廣口瓶或三角燒瓶:容量為500mL。
1.11 玻璃珠:直徑約5mm。
1.12 載玻片。
1.13 酒精燈。
1.14 試管架。
2 培養基和試劑
2.1 乳糖膽鹽發酵管:按GB 4789.28中4.9規定。
2.2 伊紅美藍瓊脂平板:按GB 4789.28中4.25規定。
2.3 乳糖發酵管:按GB 4789.28中4.10規定。
2.4 EC 肉湯:按GB 4789.28中4.11規定。
2.5 磷酸鹽緩沖稀釋液:按GB 4789.28中3.22規定。
2.6 生理鹽水。
2.7 革蘭氏染色液:按GB 4789.28中2.2規定。
3 操作步驟
3.1 檢樣稀釋
3.1.1 以無菌操作將檢樣25mL(或g)放於有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8 000-10 000 r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2 用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3 另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。
3.1.4 根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2 乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖 膽鹽發酵管內,接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃ 溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
3.3 分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃ 溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4 證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置 36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5 報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。
4 糞大腸菌群(faecal coliform)
4.1 用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於EC肉湯管內,置44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於EC肉湯液面),培養24±2h,經培養後,如所有EC肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的EC肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置 培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2 結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值。