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跑膠時蒸餾水代替緩沖液後果

發布時間:2024-12-27 10:22:07

㈠ 跑SDS-PAGE的電泳緩沖液需要什麼水來配製

1.配製電泳試劑用水蒸餾水就可以了就是單蒸水,如果條件允許的話,可以只用更好的當然純水是最好了;
2.一般實驗室都會有蒸餾水,雙蒸水,其實雙蒸水就能滿足大多數實驗室的要求,純水才是所謂的去離子

㈡ 為什麼蒸餾水作透析液比磷酸緩沖溶液作透析液的透

1.分壓.例如某容器內某混合氣體對某處容器壁產生的壓力為a,若該氣體有20%是氧氣,氧氣所產生內的壓力叫氧容氣的分壓,為20%a.容器體積不變,氧氣重量不變,無論是加進其它氣體或抽調其它其它,氧氣的分壓都是那麼多.反正就是那麼多的東西產生那麼多的壓力.
2.如果有還原糖的一邊是一樣的,另一邊是水或磷酸緩沖液,這兩種情況,還原糖在膜兩邊的壓力差是一樣的.一邊有若干,另一邊沒有.要研究水就看水的分壓,要研究糖,就看糖的分壓.既然壓力差一樣,為什麼速度不一樣呢?可能阻力不一樣,可能其實壓力差本來就不一樣.
3.可溶性澱粉加唾液產生還原糖,這里有誤差的,大不大呢?是不是這個原因造成的呢?要排除它,這一邊改成定量的還原糖,再測一下就知道.
4.用哪一種半透膜?NaCL、磷酸緩沖液里的各種離子能不能通過?會不會影響澱粉的分解?
5.還原糖在純水中的擴散肯定比在磷酸緩沖液中要快,(在曠野跑與在樹多的地方跑,)我沒做過實驗,但我覺得在你的實驗中,不會差得很多.

㈢ 純凈水可以當緩沖液嗎

可以
除鹽水能用純凈水代替配製緩沖液

化學分析中用的除鹽水,能用蒸餾水代替。蒸餾水制備時的蒸餾過程,其實也是除鹽過程,鹽在水的沸騰過程中,不會揮發。

化學分析中用的除鹽水,能用蒸餾水代替。蒸餾水制備時的蒸餾過程,其實也是除鹽過程,鹽在水的沸騰過程中,不會揮發。

㈣ 二、跑膠切割回收

在進行跑膠切割回收實驗時,確保在跑膠的實驗台上佩戴一次性手套,以防止污染,同時僅限於在跑膠實驗區域內使用,避免污染其他區域。

配製1%瓊脂糖凝膠時,首先使用電子天平稱取0.4g瓊脂粉,然後將此粉加入40ml的1*10的TBST緩沖液與100ml的三角燒瓶中,攪拌均勻後放入微波爐加熱約50秒,使用錫箔紙封蓋以確保完全溶解。接著,在溫熱狀態下加入核酸酶(如Eb替代物)2ul,並持續攪拌以確保充分混合。隨後,將溶液倒入電泳槽中,放入三個大孔和兩個小孔的電泳槽中,並插入梳子,確保其位於紅色條帶下方,以便於樣品的添加。冷凝20分鍾後,取出膠塊並放入電泳槽中,加入足夠的電泳液浸過凝膠。

從冰箱中取出MARK和loading buffer,將6ULloading buffer加入樣品中並充分混合,然後使用加樣槍將混合後的溶液分別加入電泳槽的大孔中。確保緩慢加入以避免穿透凝膠,同時避免過量加樣導致空氣進入並使樣品吹出。MARK應加入小孔中任意一個孔。蓋上電泳槽後,確保紅對紅,黑對黑的極性正確,電源調至60~80V,持續40~60分鍾。觀察條帶的形成。

切膠步驟中,將已跑出條帶的凝膠轉移至切膠機上,並在使用前佩戴一次性手套。打開紫外熒光並蓋上濾光板,根據需要調整條帶的形狀,但切勿觸及有條帶顯示的地方。將切下的凝膠放入干凈無菌的EP管中,密封好。

進行膠DNA回收,使用通用型DNA純化回收試劑盒,離心柱型。產品包含溶液PC(Buffer PC),平衡液BL(BL),漂洗液PW(PW),洗脫緩沖液EB,吸附柱CB2,收集管(2ML)。試劑在15~25℃的室溫下乾燥保存,若出現沉澱,可放置於37℃水浴預熱至溶解。使用前檢查平衡液BL是否澄清,若渾濁,可通過37℃水浴加熱幾分鍾澄清。溶液PC含指示劑,為黃色,pH值應≤7.5。

操作步驟如下:首先,進行柱平衡步驟,向吸附柱CB2中加入500UL平衡液BL,離心1分鍾,倒掉廢液後重新放回收集管中。接下來,將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下,盡量去除多餘部分,稱取其重量。然後,向膠塊中加入等體積的溶液PC(如凝膠重0.1g,則為100UL),在50℃水浴下放置10分鍾,確保充分溶解。膠塊完全溶解後,將溶液冷卻至室溫後上柱。

接下來,離心吸附柱12000rmp/1分鍾,棄掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。然後,向吸附柱加入600UL漂洗液PW,並靜置2~5分鍾,再進行12000rmp/1分鍾的離心,棄掉廢液。重復上述漂洗步驟。最後,將吸附柱放回收集管中,12000rmp/2分鍾離心,盡量去除殘留的漂洗液。將吸附柱置於室溫下放置數分鍾以確保完全乾燥,防止後續酶反應實驗中殘留的乙醇影響。

在干凈的離心管中滴加適量的洗脫液EB(通常使用蒸餾水ddw),以回收DNA。滴加量不少於30UL,放置2分鍾後進行12000rpm/2分鍾的離心,以回收DNA。為了提高回收量,可重復離心操作。最後,將回收的DNA保存於-20℃以防止DNA降解。

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